y*******9
发帖数: 360 | 1 我的荧光谱图有很强的散射背景，荧光被散射峰遮盖得不明显了，有什么软件可以
normalize掉这些散射背景。谢谢。 |
s*****g
发帖数: 2666 | 2 你的荧光是不是太弱了
【在 y*******9 的大作中提到】
: 我的荧光谱图有很强的散射背景，荧光被散射峰遮盖得不明显了，有什么软件可以
: normalize掉这些散射背景。谢谢。
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y*******9
发帖数: 360 | 3 是比较弱。
【在 s*****g 的大作中提到】
: 你的荧光是不是太弱了
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s*****g
发帖数: 2666 | 4 这个好像比较难办，我不知道有没有什么软件，
不过我一般用相同的溶剂再搞一边空白，然后用把空白减掉，这样能减弱点你的散射。
【在 y*******9 的大作中提到】
: 是比较弱。
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a*********9
发帖数: 774 | |
y****i
发帖数: 1504 | 6 shift your excitation wavelength to blue and/or
decrease excitation light intensity. |
P*V
发帖数: 1145 | 7 这是个好方法。
另外还可以这样考虑。
散射峰的来源在于有激发光进入探测器，探测器误以为是信号光，散射峰的位置在2倍波长处。这样的话，在做荧光光谱时，可以在仪器的软件上选择在探测器前加滤光片，
把入射激发光滤掉，现在的光谱仪很多都有这种功能。这样就不会有激发光干扰了。
【在 y****i 的大作中提到】
: shift your excitation wavelength to blue and/or
: decrease excitation light intensity.
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l*****m
发帖数: 772 | |
F******k
发帖数: 55 | 9 用long pass filter在接收端滤去散射光，或者用polarizor拦住散射光，必要的话两
种手法一起用。
【在 y*******9 的大作中提到】
: 我的荧光谱图有很强的散射背景，荧光被散射峰遮盖得不明显了，有什么软件可以
: normalize掉这些散射背景。谢谢。
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y*******9
发帖数: 360 | 10 polarizor 怎么设？ 入射水平，出射水平,还是垂直？谢谢
【在 F******k 的大作中提到】
: 用long pass filter在接收端滤去散射光，或者用polarizor拦住散射光，必要的话两
: 种手法一起用。
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v*****s
发帖数: 20290 | 11 散射光和荧光都不是polarized的吧。
【在 F******k 的大作中提到】
: 用long pass filter在接收端滤去散射光，或者用polarizor拦住散射光，必要的话两
: 种手法一起用。
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w******a
发帖数: 782 | |
P*V
发帖数: 1145 | 13 严格来说，散射光是有偏振的，不过应该是两种互相垂直的偏振的组合。
用偏振的方法是这样的：
先对入射激发光加一个偏振片，这样入射光进入样品时只有一个偏振方向。然后在探测
器前再加一个和第一偏振片垂直的偏振片，这样，认为散射光仍然保持和入射光一样的
偏振，于是不能通过第二个偏振片。荧光可以认为没有单一的偏振态，这样就可以通过
偏振片了。
【在 v*****s 的大作中提到】
: 散射光和荧光都不是polarized的吧。
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v*****s
发帖数: 20290 | 14 我很怀疑你的这个“认为散射光仍然保持和入射光一样的偏振，”。这里的散射应该是
瑞利散射吧，我去查查书看。
另外，你这个方法，荧光信号也会损失一半的。我看还是long pass filter就行了，别
折腾偏振。
【在 P*V 的大作中提到】
: 严格来说，散射光是有偏振的，不过应该是两种互相垂直的偏振的组合。
: 用偏振的方法是这样的：
: 先对入射激发光加一个偏振片，这样入射光进入样品时只有一个偏振方向。然后在探测
: 器前再加一个和第一偏振片垂直的偏振片，这样，认为散射光仍然保持和入射光一样的
: 偏振，于是不能通过第二个偏振片。荧光可以认为没有单一的偏振态，这样就可以通过
: 偏振片了。
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i********a
发帖数: 789 | |
v*****s
发帖数: 20290 | 16 俺搞混了，你是对的。瑞利散射的偏振和入射光是一致的。拉曼散射才有
depolarization ratio。
【在 P*V 的大作中提到】
: 严格来说，散射光是有偏振的，不过应该是两种互相垂直的偏振的组合。
: 用偏振的方法是这样的：
: 先对入射激发光加一个偏振片，这样入射光进入样品时只有一个偏振方向。然后在探测
: 器前再加一个和第一偏振片垂直的偏振片，这样，认为散射光仍然保持和入射光一样的
: 偏振，于是不能通过第二个偏振片。荧光可以认为没有单一的偏振态，这样就可以通过
: 偏振片了。
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y****i
发帖数: 1504 | 17 首先声明俺主要做磷光，很少碰荧光。
俺有两个问题，你们是否真的用过一般的LPF去掉影响荧光探测的瑞利散射。我问的原
因是我感觉如果两个在很近的区间，一般的filter挡住了散射也会cut荧光，除非是那
种notch filter 或cut 很sharp的那种，但是价格不菲。
第二个问题是如果两端用偏振片，会损失多少信号？是不是激发光必须是激光？一般的
灯让被这个偏振一下，那个偏振一下，剩不下什么了吧？ |
v*****s
发帖数: 20290 | 18 1 那是自然，不过notch filter很贵，一般的LPF就算cut很sharp也没多少钱。这个也
取决于你的荧光和散射分得有多开。
2 取决于你光的偏振态，如果是一般的日光，完全非偏振光，理论上讲是50%。不过荧
光未必就是完全非偏振光了。这个我没做过，不好乱讲，应该会取决于你荧光态的寿命
和转动的快慢。
【在 y****i 的大作中提到】
: 首先声明俺主要做磷光，很少碰荧光。
: 俺有两个问题，你们是否真的用过一般的LPF去掉影响荧光探测的瑞利散射。我问的原
: 因是我感觉如果两个在很近的区间，一般的filter挡住了散射也会cut荧光，除非是那
: 种notch filter 或cut 很sharp的那种，但是价格不菲。
: 第二个问题是如果两端用偏振片，会损失多少信号？是不是激发光必须是激光？一般的
: 灯让被这个偏振一下，那个偏振一下，剩不下什么了吧？
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P*V
发帖数: 1145 | 19 一般的光谱仪会提供一组filter，但是这是通用的设置，所以未必能照顾的到那种入射
光和荧光很近的情况。
现在的光谱仪，我接触到的，一般是各种灯，脉冲的连续的，连续可调激光做光源的，
我还没有见过，估计这种光谱仪太贵了。如果是灯光的话，其实可以调一下狭缝宽度，
这样能让能量高些，不过会损失精度。
我感觉
【在 v*****s 的大作中提到】
: 1 那是自然，不过notch filter很贵，一般的LPF就算cut很sharp也没多少钱。这个也
: 取决于你的荧光和散射分得有多开。
: 2 取决于你光的偏振态，如果是一般的日光，完全非偏振光，理论上讲是50%。不过荧
: 光未必就是完全非偏振光了。这个我没做过，不好乱讲，应该会取决于你荧光态的寿命
: 和转动的快慢。
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v*****s
发帖数: 20290 | 20 光谱仪带灯的？俺的光源和光谱仪完全是无关的。
连续可调激光这东西不存在吧，只有染料激光接近点。
【在 P*V 的大作中提到】
: 一般的光谱仪会提供一组filter，但是这是通用的设置，所以未必能照顾的到那种入射
: 光和荧光很近的情况。
: 现在的光谱仪，我接触到的，一般是各种灯，脉冲的连续的，连续可调激光做光源的，
: 我还没有见过，估计这种光谱仪太贵了。如果是灯光的话，其实可以调一下狭缝宽度，
: 这样能让能量高些，不过会损失精度。
: 我感觉
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P*V
发帖数: 1145 | 21 光源光源，呵呵
【在 v*****s 的大作中提到】
: 光谱仪带灯的？俺的光源和光谱仪完全是无关的。
: 连续可调激光这东西不存在吧，只有染料激光接近点。
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P*V
发帖数: 1145 | 22 忽忽，包子要多发
【在 y*******9 的大作中提到】
: 我的荧光谱图有很强的散射背景，荧光被散射峰遮盖得不明显了，有什么软件可以
: normalize掉这些散射背景。谢谢。
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