v********g
发帖数: 25 | 1 我现在正在做一个butylation的反应，一个有两个羧基的化合物PBG和丁醇反应。反应
条件是将N2吹干过的PBG和100 ul溶解在3N盐酸中的丁醇65度加热15分钟，不知道为什
么这个反应只能在polyprene的 amber tube里进行。在透明的poplyprene的管子里就不
能发生。
另外比较疑惑的是同样浓度的PBG在纯水里的反应效率要远远高于溶解在血清和尿液里同等浓度的PBG。在血清中的反应是这样做的
50ul血清+ 250ul MeOH-->deprotenization, take the supernatant -->dry under N2/40 degree for 15 min --> add 100 ul Butanol/3N HCL, 65 degree for 15 min
我是生物背景的，希望这里化学牛人给点建议或者提供点文献参考。 |
s******g
发帖数: 2230 | 2 这个butylation很奇怪。 3N HCl？
里同等浓度的PBG。在血清中的反应是这样做的
N2/40 degree for 15 min --> add 100 ul Butanol/3N HCL, 65 degree for 15 min
【在 v********g 的大作中提到】
: 我现在正在做一个butylation的反应，一个有两个羧基的化合物PBG和丁醇反应。反应
: 条件是将N2吹干过的PBG和100 ul溶解在3N盐酸中的丁醇65度加热15分钟，不知道为什
: 么这个反应只能在polyprene的 amber tube里进行。在透明的poplyprene的管子里就不
: 能发生。
: 另外比较疑惑的是同样浓度的PBG在纯水里的反应效率要远远高于溶解在血清和尿液里同等浓度的PBG。在血清中的反应是这样做的
: 50ul血清+ 250ul MeOH-->deprotenization, take the supernatant -->dry under N2/40 degree for 15 min --> add 100 ul Butanol/3N HCL, 65 degree for 15 min
: 我是生物背景的，希望这里化学牛人给点建议或者提供点文献参考。
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v********g
发帖数: 25 | 3 盐酸的作用我也不大肯定，是不是用来吸水的，促进脱水反应？ |
s******g
发帖数: 2230 | 4 酸催化， 不过应该用无水氯化氢呀， 或者硫酸， 不该用盐酸呀。
【在 v********g 的大作中提到】
: 盐酸的作用我也不大肯定，是不是用来吸水的，促进脱水反应？
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v********g
发帖数: 25 | 5 不好意思，一下就露馅了，是3.0N HCl in n-Butanol, 所以应该是溶解在丁醇里的无
水氯化氢。
你觉得在血清里是什么物质阻止了我的这个化合物和丁酸发生酯化反应呢？另外一个和
pbg在一起溶解的化合物delta-Aminolevulinic acid， 结构是
http://www.frontiersci.com/detail.php?FSIcat=A167 （溶解以后没有氯），可以很容易的被butylated 不知道为什么
不能被butylated化和物PBG的结构是
http://www.frontiersci.com/detail.php?FSIcat=P226 |
m*******a
发帖数: 245 | 6 看上去象是，
不管你的polyprene 还是后面的血清，应该都是体系里面带进了水或者碱导致干盐酸催
化效果降低了吧。100ul的微量反应很容易受影响的。反应本身也是产生水的，加大盐
酸量或者加些中性干燥剂如硫酸镁之类的或许有用。 |
s******g
发帖数: 2230 | 7 不知道血清里面有啥， 没法回答。。
【在 v********g 的大作中提到】
: 不好意思，一下就露馅了，是3.0N HCl in n-Butanol, 所以应该是溶解在丁醇里的无
: 水氯化氢。
: 你觉得在血清里是什么物质阻止了我的这个化合物和丁酸发生酯化反应呢？另外一个和
: pbg在一起溶解的化合物delta-Aminolevulinic acid， 结构是
: http://www.frontiersci.com/detail.php?FSIcat=A167 （溶解以后没有氯），可以很容易的被butylated 不知道为什么
: 不能被butylated化和物PBG的结构是
: http://www.frontiersci.com/detail.php?FSIcat=P226
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D********g
发帖数: 533 | 8 中和氨基。
【在 v********g 的大作中提到】
: 盐酸的作用我也不大肯定，是不是用来吸水的，促进脱水反应？
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D********g
发帖数: 533 | 9 我觉得也许是pH?
你这个东西又有氨基又有羧基 如果pH太大 甚至于中性的时候 氨基和羧基成盐？降低
了反应效率？血清和urea都是缓冲体系把。
里同等浓度的PBG。在血清中的反应是这样做的
N2/40 degree for 15 min --> add 100 ul Butanol/3N HCL, 65 degree for 15 min
【在 v********g 的大作中提到】
: 我现在正在做一个butylation的反应，一个有两个羧基的化合物PBG和丁醇反应。反应
: 条件是将N2吹干过的PBG和100 ul溶解在3N盐酸中的丁醇65度加热15分钟，不知道为什
: 么这个反应只能在polyprene的 amber tube里进行。在透明的poplyprene的管子里就不
: 能发生。
: 另外比较疑惑的是同样浓度的PBG在纯水里的反应效率要远远高于溶解在血清和尿液里同等浓度的PBG。在血清中的反应是这样做的
: 50ul血清+ 250ul MeOH-->deprotenization, take the supernatant -->dry under N2/40 degree for 15 min --> add 100 ul Butanol/3N HCL, 65 degree for 15 min
: 我是生物背景的，希望这里化学牛人给点建议或者提供点文献参考。
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v********g
发帖数: 25 | 10 多谢上面的回复。昨天我连夜按照各位的思路，加大了反应体系的体积。原来用氮气吹
干的50微升的血清或者尿液，加100微升的丁酸/3N HCL， 现在改为20ul血清，尿液里 （
吹干的）+ 600 微升的丁酸/3N HCL, 在血清里，PBG反应效率至少提高了100倍！！
但是，尿液中的反应PBG无明显变化。我觉得楼上提出尿素的干扰很有道理，不知道有
什么简便的办法可以降低尿素的干扰，我用过oasis的solid phase extraction （ion
exchange column）96-well plate，但是每个well之间recovery差别太大，不大适合应
用。 |
