j*********g
发帖数: 463 | 1 比如FACS sort，有人喜欢用4度或者放冰上，这样很不好，对动物细胞会造成低温胁迫
（stress）。
应该全程常温。 |
j*********g
发帖数: 463 | 2 新发现丨细胞常温运输的高效简易方法！
2017-06-03 邓文生 等 细胞
2017年4月18日，武汉科技大学生命科学院邓文生教授在美国公共科学图书馆的期刊上
发表一篇题为“The analysis of viability for mammalian cells treated at
different temperatures and its application in cell shipment”的研究论文。主
要验证了在室温下运输细胞的简易方法的可行性。
目前，传统的细胞运输方法包括冷冻储存运输和充液法。细胞存活率较高，但是都只
能短距离运输，花费高。近几年，也还有一些关于细胞运输方法改进的报道，例如有用
agarose胶或matrigel基质与细胞混匀后，再在室温运输。这种种方法都非常繁琐复杂
，影响因素较多。
邓教授在英国做实验时，一个小的失误，意外发现室温下放置的细胞在第二天仍能保持
较高的活性。就想是否能够直接在室温的条件下运输细胞，从而简化细胞的运输方法。
为了验证这个方案的可行性，该实验室采用其常用的细胞系M2进行一系列验证。首先确
定细胞密度为1*105 个/ml 。用2mlEP管收集1ml细胞，封口膜封口，共48个样，分成四
组，分别置于4个温度（包括1℃、5℃、16℃和22℃）下处理4天，每天每个温度下有3
个重复。首先用FDA/PI双荧光，以及凋亡和坏死三色检测试剂盒检测细胞活性。实验结
果表明, 在16℃ 或22℃下储存的细胞在处理4天后仍达到80%-90%的活性；而在1℃或5
℃下储存的细胞在处理1-2天后绝大多数细胞发生死亡。实验证明细胞的死亡主要由凋
亡而不是坏死导致。进一步利用MTT实验，克隆形成实验，细胞增殖实验，和明场显微
技术等方法确定了细胞的生物学功能和形态是完整的。为验证这种方法的普适性，该实
验室采用293T，Hela，Saos2，K562和鼠胚胎干细胞为材料对上述实验进行验证并得出
相似的结果，尽管一些细胞的存活率在低温下表现出细微差异。干细胞对环境具有高度
敏感性，但用碱性磷酸酶染色和RT-PCR检测干细胞标记基因两种方法验证经22℃处理后
的鼠胚胎干细胞，发现其仍然存在干细胞生物学特性。该研究最后通过案例证明，动物
细胞可以直接悬浮在细胞培养液中并且在环境温度下进行长距离运输，但不严重影响细
胞存活率。此外，该研究结果提示，动物细胞不适宜在冰上孵育或长时间搁置在4度冰
箱里，更不适合在冰上运输，因为低温会对细胞会导致伤害。尤其是对需要进一步培养
的等待分选的细胞，长时间冰浴可能导致细胞复苏能力下降。这一发现将为实验室的操
作带来概念性的变化。 。
无独有偶，最近，澳门大学Ren-He Xu 研究组同一时间在《Biomaterial》在线发表“
Spheroidal formation preserves human stem cells for prolonged time under
ambient conditions for facile storage and transportation”， 该文将人类间充
质干细胞球形化并在环境温度处理7天后，仍然保持较高细胞活性度和干细胞特性。该
文引起国内外同行学者高度关注和评价。而邓文生教授团队的此项研究内容包含小鼠胚
胎干细胞，并证明小鼠胚胎干细胞可以直接在环境温下长距离运输。他们的发现为全球
众多实验室提供了可选择的更为简洁和经济的细胞运输方法。
论文链接：https://doi.org/10.1371/journal.pone.0176120
：比如FACS sort，有人喜欢用4度或者放冰上，这样很不好，对动物细胞会造成低温胁
迫（stress）。
：应该全程常温。
【在 j*********g 的大作中提到】
: 比如FACS sort，有人喜欢用4度或者放冰上，这样很不好，对动物细胞会造成低温胁迫
: （stress）。
: 应该全程常温。
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q******g
发帖数: 3858 | 3 有意思。要看看原文。我一直把sort完的细胞放冰里。
annexin V staining的细胞也是放到冰里。并没有看到更多的细胞凋亡 |
m****a
发帖数: 270 | 4 文章说的是细胞培养液。曾经常温把细胞装在装满培养基的FLASK里面给人快递过，两
天没啥问题。
问题在于FACS之前细胞一般重悬在PBS里面，这个时候可能4度更好。
【在 j*********g 的大作中提到】
: 比如FACS sort，有人喜欢用4度或者放冰上，这样很不好，对动物细胞会造成低温胁迫
: （stress）。
: 应该全程常温。
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j*********g
发帖数: 463 | 5 为啥不重悬在血清培养基里进行sort？取决于你的FACS。一般的BD的Arial只能用PBS，
血清会影响激光。而MoFlo的流动池跟BD的石英流动池结构不一样，可以在血清里上样
。我以前用MoFlo。
不过即使现在用的是BD的FACS，我也是用PBS重悬后用常温，并且sort进血清培养基。
【在 m****a 的大作中提到】
: 文章说的是细胞培养液。曾经常温把细胞装在装满培养基的FLASK里面给人快递过，两
: 天没啥问题。
: 问题在于FACS之前细胞一般重悬在PBS里面，这个时候可能4度更好。
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m****a
发帖数: 270 | 6 低温有损伤但也是一种保护吧，特别是在缺血缺氧条件下，否则器官移植为啥要低温运
输呢？常温估计都腐烂了。
一旦细胞成单细胞悬液，在完全培养基里，或许常温状态更好，下次可以试试。
【在 j*********g 的大作中提到】
: 为啥不重悬在血清培养基里进行sort？取决于你的FACS。一般的BD的Arial只能用PBS，
: 血清会影响激光。而MoFlo的流动池跟BD的石英流动池结构不一样，可以在血清里上样
: 。我以前用MoFlo。
: 不过即使现在用的是BD的FACS，我也是用PBS重悬后用常温，并且sort进血清培养基。
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z*t
发帖数: 863 | 7 HBSS+%2 FBS works well for BD
【在 j*********g 的大作中提到】
: 为啥不重悬在血清培养基里进行sort？取决于你的FACS。一般的BD的Arial只能用PBS，
: 血清会影响激光。而MoFlo的流动池跟BD的石英流动池结构不一样，可以在血清里上样
: 。我以前用MoFlo。
: 不过即使现在用的是BD的FACS，我也是用PBS重悬后用常温，并且sort进血清培养基。
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m*****z
发帖数: 1451 | 8 别的不说
就这里提到的几个细胞系太皮实，想弄死得花点功夫。。。
【在 j*********g 的大作中提到】
: 新发现丨细胞常温运输的高效简易方法！
: 2017-06-03 邓文生 等 细胞
: 2017年4月18日，武汉科技大学生命科学院邓文生教授在美国公共科学图书馆的期刊上
: 发表一篇题为“The analysis of viability for mammalian cells treated at
: different temperatures and its application in cell shipment”的研究论文。主
: 要验证了在室温下运输细胞的简易方法的可行性。
: 目前，传统的细胞运输方法包括冷冻储存运输和充液法。细胞存活率较高，但是都只
: 能短距离运输，花费高。近几年，也还有一些关于细胞运输方法改进的报道，例如有用
: agarose胶或matrigel基质与细胞混匀后，再在室温运输。这种种方法都非常繁琐复杂
: ，影响因素较多。
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a*********0
发帖数: 4998 | 9 LoL 同感。。 某些细胞系堪比小强
【在 m*****z 的大作中提到】
: 别的不说
: 就这里提到的几个细胞系太皮实，想弄死得花点功夫。。。
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