m****a
发帖数: 270 | 1 【 以下文字转载自 WaterWorld 讨论区 】
发信人: gluestic (), 信区: WaterWorld
标 题: please transfer to Biology. RE:Ng-Ago 重复
发信站: BBS 未名空间站 (Tue Jun 28 19:07:03 2016, 美东)
Single stranded DNA is much more difficult compared to double-stranded
plasmid DNA in terms of transformation.
Try these single stranded DNA transformation tricks.
1) transformation done at a low pH of ~6. Low pH significantly reduces the
nuclease activity of cutting single stranded DNA.
2) increase Mg++ to 1 mM. Mg is a conformation stabilizer of DNA and RNA.
3) No EDTA in the transformation system because it deprives Mg++ from the
buffer.
Han is a seasoned scientist with expertise on nucleic acid research. He
knows all of these tricks and may not disclose all of them.
Good luck to all. |
m****a
发帖数: 270 | 2 刚搜到的，这位新注册的gluestic同学居然上个月在水版发了一个这么牛逼的帖子，
此人要么就是韩春雨，要么就是和韩春雨关系密切的人，或者是已经重复出实验的高手。
就我一人注意到了么？我靠！ |
d*****w
发帖数: 124 | |
m****a
发帖数: 270 | 4 重新看了一下paper的supplemental method， 文章里明确得说明了
5’-phosphorylated ssDNA guides are dissolved to 100 ng/μl in 0.5x TE
buffer (PH 8.0)....and are diluted in 50 μl Opti-MEM (Gibco).
这与gluestic所说的pH 6，无EDTA 完全矛盾，
事实上不加EDTA，加Mg2+ 会增加Dnase活性，让DNA更容易降解？
如果是真的，那么韩春雨就是在误导大家。如果是假的，那么gluestic就是来这里捣浑
水的。
假的可能性更大。 |
c********6
发帖数: 693 | 5 还无法定论，这个韩春雨真的让人搞不懂，明明一句话就能搞明白的事情，还搞得那么
复杂，故弄玄虚，打太极，跟他在河北科技大学当教授的老爹学的吧
【在 m****a 的大作中提到】
: 重新看了一下paper的supplemental method， 文章里明确得说明了
: 5’-phosphorylated ssDNA guides are dissolved to 100 ng/μl in 0.5x TE
: buffer (PH 8.0)....and are diluted in 50 μl Opti-MEM (Gibco).
: 这与gluestic所说的pH 6，无EDTA 完全矛盾，
: 事实上不加EDTA，加Mg2+ 会增加Dnase活性，让DNA更容易降解？
: 如果是真的，那么韩春雨就是在误导大家。如果是假的，那么gluestic就是来这里捣浑
: 水的。
: 假的可能性更大。
|
F****8
发帖数: 289 | 6 这三个高超技巧应该反着理解吗？
1）pH应该大于6，因为低pH降低切酶活性。
2）Mg++应该小于1nM，因为Mg++使DNA/RNA更稳定。
3)实验应该加EDTA，可以络合镁离子。
【在 m****a 的大作中提到】
: 重新看了一下paper的supplemental method， 文章里明确得说明了
: 5’-phosphorylated ssDNA guides are dissolved to 100 ng/μl in 0.5x TE
: buffer (PH 8.0)....and are diluted in 50 μl Opti-MEM (Gibco).
: 这与gluestic所说的pH 6，无EDTA 完全矛盾，
: 事实上不加EDTA，加Mg2+ 会增加Dnase活性，让DNA更容易降解？
: 如果是真的，那么韩春雨就是在误导大家。如果是假的，那么gluestic就是来这里捣浑
: 水的。
: 假的可能性更大。
|
Z***L
发帖数: 9 | 7 NgAgo 在韩的文章里，它是不能切单链dna的啊，本来就没活性啊？
每次韩的回复，总会引起更大的困惑。
醉了，醉了 |
b****s
发帖数: 872 | 8 这还不简单，因为有商业价值，他不想告诉所有步骤，隐瞒一些关键的东西，所以要打
太极。
韩春雨不用对其他人负责，其他人想不出关键步骤，不能重复和他无关。发表文章也没
说一定要把所有步骤都写出来，有商业价值的东西，都是隐瞒关键步骤的
韩春雨只要对他的学校负责就够了，他的学校不认为他造假就够了。
【在 c********6 的大作中提到】
: 还无法定论，这个韩春雨真的让人搞不懂，明明一句话就能搞明白的事情，还搞得那么
: 复杂，故弄玄虚，打太极，跟他在河北科技大学当教授的老爹学的吧
|
s*********y
发帖数: 292 | |
D*a
发帖数: 6830 | 10 所以CRISPR都隐瞒了啥？
【在 b****s 的大作中提到】
: 这还不简单，因为有商业价值，他不想告诉所有步骤，隐瞒一些关键的东西，所以要打
: 太极。
: 韩春雨不用对其他人负责，其他人想不出关键步骤，不能重复和他无关。发表文章也没
: 说一定要把所有步骤都写出来，有商业价值的东西，都是隐瞒关键步骤的
: 韩春雨只要对他的学校负责就够了，他的学校不认为他造假就够了。
|
|
|
S**********e
发帖数: 620 | 11 说你是河北科大的人还真像
到底这三个秘籍是不是靠谱的？纯学术问题，好奇一下
【在 b****s 的大作中提到】
: 这还不简单，因为有商业价值，他不想告诉所有步骤，隐瞒一些关键的东西，所以要打
: 太极。
: 韩春雨不用对其他人负责，其他人想不出关键步骤，不能重复和他无关。发表文章也没
: 说一定要把所有步骤都写出来，有商业价值的东西，都是隐瞒关键步骤的
: 韩春雨只要对他的学校负责就够了，他的学校不认为他造假就够了。
|
m****a
发帖数: 270 | 12 这里说的是转染，不是切割。
【在 Z***L 的大作中提到】
: NgAgo 在韩的文章里，它是不能切单链dna的啊，本来就没活性啊？
: 每次韩的回复，总会引起更大的困惑。
: 醉了，醉了
|
Z***L
发帖数: 9 | 13
看一下第一条，明明说的是ph值能影响切割单链dna的活性。
【在 m****a 的大作中提到】
: 这里说的是转染，不是切割。
|
Z***L
发帖数: 9 | 14
看一下第一条，明明说的是ph值能影响切割单链dna的活性。
【在 m****a 的大作中提到】
: 这里说的是转染，不是切割。
|
m****a
发帖数: 270 | 15 哥，这里的single strand DNA 是指 guide DNA 不是 target.
意思是降低ph能防止潜在的Dnase降解ssDNA.
发这三条所谓tricks的Gluestic与其说是韩的水军，不如说是韩的高级黑，
这个帖子被好事者当成韩春雨的建议发到了google group，
立马被专业人士喷成了筛子，最确切的评价就是"not even wrong".
【在 Z***L 的大作中提到】
:
: 看一下第一条，明明说的是ph值能影响切割单链dna的活性。
|
