d****i
发帖数: 2346 | |
D***a
发帖数: 516 | 2 我们用biorad的Trans-Blot® Turbo™ Midi Nitrocellulose Transfer
Packs。 |
d****i
发帖数: 2346 | 3
谢谢！背景干净吗？这个是不是大小可以用在criterion midi box？就是对应这个gel
的 http://www.bio-rad.com/en-us/product/criterion-tris-hcl-precast-gels
【在 D***a 的大作中提到】
: 我们用biorad的Trans-Blot® Turbo™ Midi Nitrocellulose Transfer
: Packs。
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D***a
发帖数: 516 | 4 大小合适。背景挺干净，PVDF的用在Odyssey上背景太高了。 |
d****i
发帖数: 2346 | 5
非常感谢！顺便问一下，criterion midi的非梯度胶用过没有？我用梯度胶小分子量跑
到后面不好，想试试非梯度胶。
【在 D***a 的大作中提到】
: 大小合适。背景挺干净，PVDF的用在Odyssey上背景太高了。
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D***a
发帖数: 516 | 6 用过12%的，挺好用的，就是高分子量部分转膜效率不高。 |
d****i
发帖数: 2346 | 7
非常非常感谢！
【在 D***a 的大作中提到】
: 用过12%的，挺好用的，就是高分子量部分转膜效率不高。
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s*****g
发帖数: 7857 | 8 同样问题。
梯度胶也是有时小分子量跑不好。原因是开始灌胶时，高浓度和低浓度胶液没有匀速控
制好！
12%还行。
不过最近他们一年保质期的胶抽气保存。胶的质量就因为肉眼难以察觉的气孔而质量
下降（即使是12%胶也一样。）。--有时跑出来的带有（但是不匀）或没有（就想被用
抹布在某块抹了一下。。。）（不抽气的胶过保值期一年了，还质量很好。而抽气的胶
，出结果是撞大运，撞好了，就什么带都很好，撞不好就少几条带。。。）
他们的NC膜我们用大卷的，自己切割。质量和Themo的一样。Odyssey是用Bio-rad NC摸
本人更喜欢传统的胶片法。
没有量跑
【在 d****i 的大作中提到】
:
: 非常非常感谢！
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d****i
发帖数: 2346 | 9
非常感谢！你这一说，我去看我的照片上偶尔也有一抹，但是不知道是胶的问题还是我
自己没弄好。
我已经order了biorad的NC 膜，大卷的。
我的目的蛋白是17的，买了18%的，可能有点高了,但是没有其他选择了。
【在 s*****g 的大作中提到】
: 同样问题。
: 梯度胶也是有时小分子量跑不好。原因是开始灌胶时，高浓度和低浓度胶液没有匀速控
: 制好！
: 12%还行。
: 不过最近他们一年保质期的胶抽气保存。胶的质量就因为肉眼难以察觉的气孔而质量
: 下降（即使是12%胶也一样。）。--有时跑出来的带有（但是不匀）或没有（就想被用
: 抹布在某块抹了一下。。。）（不抽气的胶过保值期一年了，还质量很好。而抽气的胶
: ，出结果是撞大运，撞好了，就什么带都很好，撞不好就少几条带。。。）
: 他们的NC膜我们用大卷的，自己切割。质量和Themo的一样。Odyssey是用Bio-rad NC摸
: 本人更喜欢传统的胶片法。
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a*******a
发帖数: 4233 | 10 17k用18％不高。
【在 d****i 的大作中提到】
:
: 非常感谢！你这一说，我去看我的照片上偶尔也有一抹，但是不知道是胶的问题还是我
: 自己没弄好。
: 我已经order了biorad的NC 膜，大卷的。
: 我的目的蛋白是17的，买了18%的，可能有点高了,但是没有其他选择了。
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d****i
发帖数: 2346 | 11 http://www.licor.com/bio/products/reagents/irdye/
有人知道这个link里面的
IRDye 800CW
IRDye 680RD
IRDye 680LT
最后两个字母， CW, RD, LT什么意思？想选700和800nm的二抗。 |
d****i
发帖数: 2346 | |
c****u
发帖数: 56 | 13 Supplier: LI-COR Biosciences Publications: 110
1. Western blots were performed with Alexa Fluor 688-conjugated secondary
antibodies (Molecular Probes), and were quantitated using an Odyssey
Infrared Imaging system and Odyssey InCell Western software (LI-COR
Biosciences) [30]. (from PLoS Pathogens, PMC: 2958806 , PMID: 20975939 , )
2. Western blots images were obtained on an Odyssey® imager (Li-Cor
Biosciences). (from PLoS ONE, PMC: 3531442 , PMID: 23300529 , )
Contact me if more info is needed |
d****i
发帖数: 2346 | 14
谢谢！最后选了800cw和680lt。我只做western，不做in cell。
【在 c****u 的大作中提到】
: Supplier: LI-COR Biosciences Publications: 110
: 1. Western blots were performed with Alexa Fluor 688-conjugated secondary
: antibodies (Molecular Probes), and were quantitated using an Odyssey
: Infrared Imaging system and Odyssey InCell Western software (LI-COR
: Biosciences) [30]. (from PLoS Pathogens, PMC: 2958806 , PMID: 20975939 , )
: 2. Western blots images were obtained on an Odyssey® imager (Li-Cor
: Biosciences). (from PLoS ONE, PMC: 3531442 , PMID: 23300529 , )
: Contact me if more info is needed
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s*****g
发帖数: 7857 | 15 那一抹绝对是胶的问题。即使没有气泡，但是有可能胶之间的原本均匀的分子孔隙被抽
挤得不均匀了。
反正如果他们继续买抽的产品的话，我就买不抽气的大胶或其他公司的产品了。
【在 d****i 的大作中提到】
:
: 谢谢！最后选了800cw和680lt。我只做western，不做in cell。
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d****i
发帖数: 2346 | 16
我一直用这些gel：
http://www.bio-rad.com/en-us/product/criterion-tris-tricine-pre
怎么区分抽气和不抽气？
我用的电泳box是这个：
http://www.bio-rad.com/en-us/sku/165-6001-criterion-cell
对应的gel还有其他选择吗？很多都是给mini系统用的。
【在 s*****g 的大作中提到】
: 那一抹绝对是胶的问题。即使没有气泡，但是有可能胶之间的原本均匀的分子孔隙被抽
: 挤得不均匀了。
: 反正如果他们继续买抽的产品的话，我就买不抽气的大胶或其他公司的产品了。
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