n****3
发帖数: 543 | 1 近来克隆了一个3kb片段到31kb质粒内，然后做单切如lane 1 和双切如lane 2，lane 3
为2切后回收31kb 的大片段，ladder 最大为12kb。 胶0.8%
正常吗，问题在哪里？ |
s******s
发帖数: 13035 | 2 啥不正常？
3
【在 n****3 的大作中提到】
: 近来克隆了一个3kb片段到31kb质粒内，然后做单切如lane 1 和双切如lane 2，lane 3
: 为2切后回收31kb 的大片段，ladder 最大为12kb。 胶0.8%
: 正常吗，问题在哪里？
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n****3
发帖数: 543 | 3 大片段锯齿状，而且拉的比较宽，不象ladder清晰的带 |
s******s
发帖数: 13035 | 4 你load这么多，当然这样了。
【在 n****3 的大作中提到】
: 大片段锯齿状，而且拉的比较宽，不象ladder清晰的带
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n****3
发帖数: 543 | |
c*********r
发帖数: 1312 | 6 你确定只有几十纳克？最小那个条带如果只有几十纳克我信。如果最下边的的小片段是
3k，有几十纳克的话，31k的质粒上样有几百纳克了吧。
【在 n****3 的大作中提到】
: 也就几十 纳克，莫非还搞个脉冲场电泳？
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s******s
发帖数: 13035 | 7 //nod
那个ladder至少每条50，3k不到的条带100,31k的说不定都有1ug了
【在 c*********r 的大作中提到】
: 你确定只有几十纳克？最小那个条带如果只有几十纳克我信。如果最下边的的小片段是
: 3k，有几十纳克的话，31k的质粒上样有几百纳克了吧。
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s***m
发帖数: 6197 | 8 你样品的buffer是什么？
会不会是盐太高了？
3
【在 n****3 的大作中提到】
: 近来克隆了一个3kb片段到31kb质粒内，然后做单切如lane 1 和双切如lane 2，lane 3
: 为2切后回收31kb 的大片段，ladder 最大为12kb。 胶0.8%
: 正常吗，问题在哪里？
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n****3
发帖数: 543 | 9 看来可能是bufferr，lane 1 and lane 2 are 1x digestion buffer, lane 3 is
microinjection buffer with salt |
q*******8
发帖数: 768 | 10 上样太多了吧。。。我做切胶回收的时候都是这个样子的。。。。。。 |
n****3
发帖数: 543 | 11 公司认为smear是降解的dna, 让我重新提供用于注射的dna，我再调整一下上样量 |
t****t
发帖数: 86 | 12 microinjection 你用的哪个公司？ |
k*****n
发帖数: 323 | |
n****3
发帖数: 543 | 14 稀释后效果好多了，没有降解。我在scripps,老板最后决定在所里的transgenic core
做，主要原因是生出来的是b6背景，2250刀一次，不保证是否能得到转基因动物，因为
我的片段大 |
