k***e
发帖数: 41 | 1 用的是clontech的pRetro-Tight系统。之前出现问题，现在想找问题在哪。于是要
transient tranfect 两个个质粒到细胞中：
1.pRetro-Advanced
2.pRetro-Tight-luc
请问这两个质粒的比例？
实验的目的是检测这套system是否可用，然后再做稳定表达。
谢谢！ |
h******y
发帖数: 351 | 2 When you do transient transfection, millions of copies of plasmid DNA can be
introduced into a cell. The ratio between two plasmids is somewhat irrelev
ant.
【在 k***e 的大作中提到】
: 用的是clontech的pRetro-Tight系统。之前出现问题，现在想找问题在哪。于是要
: transient tranfect 两个个质粒到细胞中：
: 1.pRetro-Advanced
: 2.pRetro-Tight-luc
: 请问这两个质粒的比例？
: 实验的目的是检测这套system是否可用，然后再做稳定表达。
: 谢谢！
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Z******5
发帖数: 435 | 3 应该是相关的。否则那么多用pGL3 + pRL-TK的结果就没法解释了。
be
irrelev
【在 h******y 的大作中提到】
: When you do transient transfection, millions of copies of plasmid DNA can be
: introduced into a cell. The ratio between two plasmids is somewhat irrelev
: ant.
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h******y
发帖数: 351 | 4 That is a different story. The pRL-TK is used as control to normalization,
and since TK promoter is a strong promoter and RLuc's activity is very high,
you only need very few pRL-TK. The closer the activity of RLuc is over the
detection limit of your system, the better it is
for normalization purpose.
【在 Z******5 的大作中提到】
: 应该是相关的。否则那么多用pGL3 + pRL-TK的结果就没法解释了。
:
: be
: irrelev
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j****x
发帖数: 1704 | 5 如果假定每个transfection reagent-plasmid complex单元中两个质粒的比例是一定的
（这个前提并不难推断），那么进入单个细胞中的两个质粒的比例也就是一定的。
至于用报告质粒共转染作normalization，一定程度上也是基于了这个前提。如果两者
进入细胞不成比例的话，用这个方法来消除转染效率的不同就没有多少意义了。
be
irrelev
【在 h******y 的大作中提到】
: When you do transient transfection, millions of copies of plasmid DNA can be
: introduced into a cell. The ratio between two plasmids is somewhat irrelev
: ant.
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