s******r
发帖数: 2876 | 1 请问普通的福尔马林固定的标本，可以用来做RNA in situ hybridization吗？
切片的过程中也没有RNA free，
杂交的时候应该尽量RNA free吧，这个技术是不是容易掌握，
如果有好的protocol，欢迎分享，或者推荐一些简单易学的protocol，
实验室完全没有这方面的经验，周围也找不到专家,
抗体又不好使，没法IHC. |
a*****i
发帖数: 679 | 2 我们一直用4%多聚甲醛固定，没有问题。切片过程如果保持比较干净的环境，没有RNA
free的影响不大。杂交之前的步骤肯定是要RNA free的。 |
x**e
发帖数: 163 | 3 我一直用DEPC处理的FAA来固定植物材料，有一次石蜡切片是请别的实验室切的，所有
试剂都没有用DEPC处理，硬着头皮做完了ISH，结果和以前RNAse free的没什么区别。
当然ISH的试剂都是DEPC处理过的。似乎切片过程不太重要，而且材料在石蜡中保存半
年再做ISH也没有问题。 |
s******r
发帖数: 2876 | 4 多谢指点。
RNA
【在 a*****i 的大作中提到】
: 我们一直用4%多聚甲醛固定，没有问题。切片过程如果保持比较干净的环境，没有RNA
: free的影响不大。杂交之前的步骤肯定是要RNA free的。
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l******u
发帖数: 936 | 5 普通的福尔马林固定的标本 is no problem for RNA ISH
【在 s******r 的大作中提到】
: 请问普通的福尔马林固定的标本，可以用来做RNA in situ hybridization吗？
: 切片的过程中也没有RNA free，
: 杂交的时候应该尽量RNA free吧，这个技术是不是容易掌握，
: 如果有好的protocol，欢迎分享，或者推荐一些简单易学的protocol，
: 实验室完全没有这方面的经验，周围也找不到专家,
: 抗体又不好使，没法IHC.
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s******r
发帖数: 2876 | 6 再次感谢xihe and Andycai
还有问题请教
现在大家一般用什么probe，RNA还是DNA，
什么检测方法比较灵敏，DIG?
【在 x**e 的大作中提到】
: 我一直用DEPC处理的FAA来固定植物材料，有一次石蜡切片是请别的实验室切的，所有
: 试剂都没有用DEPC处理，硬着头皮做完了ISH，结果和以前RNAse free的没什么区别。
: 当然ISH的试剂都是DEPC处理过的。似乎切片过程不太重要，而且材料在石蜡中保存半
: 年再做ISH也没有问题。
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l******u
发帖数: 936 | 7 for me, DIG has been working well.
【在 s******r 的大作中提到】
: 再次感谢xihe and Andycai
: 还有问题请教
: 现在大家一般用什么probe，RNA还是DNA，
: 什么检测方法比较灵敏，DIG?
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h******y
发帖数: 351 | 8 RNA-RNA has a higher Tm than RNA-DNA, so you can use more stringent washing
in your in situ and get better background. In a nutshell, RNA probe is
better than DNA probe. Of course, your RNA probes should be free of any
RNase contamination.
Current commercially available DIG labeling kits is as sensitive as
radioactive labeling kits, although the advantage of using radioactive-
labeled probes is that you can do quantification analysis by densitometry.
The disadvantage of radioactive-labeled probes are that they will have a
short half-life due to the presence of radioactive moiety, thus you need to
make probes freshly.
【在 s******r 的大作中提到】
: 再次感谢xihe and Andycai
: 还有问题请教
: 现在大家一般用什么probe，RNA还是DNA，
: 什么检测方法比较灵敏，DIG?
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a*****i
发帖数: 679 | 9 一般使用RNA probe，DIG灵敏度足够了。
另外杂交前的处理中，蛋白酶K的消化比较关键，直接影响到信号的强弱，这个要摸一
下条件。
【在 s******r 的大作中提到】
: 再次感谢xihe and Andycai
: 还有问题请教
: 现在大家一般用什么probe，RNA还是DNA，
: 什么检测方法比较灵敏，DIG?
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