o**4
发帖数: 35028 | 1 我做Flag pull down，之后把elution冻在-20°过夜，今天早上解冻的时候发现蛋白质
沉淀，
我加了SDS （终浓度1%），煮了5分钟，还是没见到任何溶解，
请问该怎么溶解蛋白质啊？
用loading buffer煮一下能溶解么？
谢谢 |
b******y
发帖数: 627 | 2 boiling in loading buffer should work. |
b******y
发帖数: 627 | 3 some salt is not compatible with SDS, for instance K+. make sure no high
concentration of it in your original buffer. |
s******y
发帖数: 28562 | 4 如果你不关心蛋白是否变性的话可以用8M urea，而且也不影响跑胶。
6M Guanidine 更好使，就是用完之后不太好跑胶。
【在 o**4 的大作中提到】
: 我做Flag pull down，之后把elution冻在-20°过夜，今天早上解冻的时候发现蛋白质
: 沉淀，
: 我加了SDS （终浓度1%），煮了5分钟，还是没见到任何溶解，
: 请问该怎么溶解蛋白质啊？
: 用loading buffer煮一下能溶解么？
: 谢谢
|
o**4
发帖数: 35028 | 5 哦，这样啊，谢谢，我不在意蛋白变性
【在 s******y 的大作中提到】
: 如果你不关心蛋白是否变性的话可以用8M urea，而且也不影响跑胶。
: 6M Guanidine 更好使，就是用完之后不太好跑胶。
|
k******0
发帖数: 1073 | 6 1％SDS都无法溶解，这蛋白质有点生猛，是输水的膜蛋白吗？
有没有加了还原剂？ |
