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- 请教大家一个关于pulldown之后MS的问题
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1
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l***g
发帖数: 19
1
想先做GST-pulldown,然后用pulldown产物电泳银染切胶回收去做MS。问题是,如果我
现在想用细菌中纯化的GST融合蛋白,应该bind多少蛋白到多少的beads上(100ul?)
,然后用HeLa细胞的裂解液来亲和吸附,应该大概用多少HeLa细胞裂解液?我感觉细胞
裂解液少了的话可能结合在GST融合蛋白上的蛋白太少了,在之后洗脱的过程中可能又
损失点,然后在银染的话可能看不出来。如果不用裂解液用动物组织,譬如rat或者
sheep的脑子,大概需要裂解多少克的脑子?多谢!
1
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