s*********t
发帖数: 600 | 1 是不是必须得用maxi？mini的质量不能做细胞转染？
另外，G418, puro没用完，是放回－20，还是可以放在4度？能stable多久？
多谢！ |
r******y
发帖数: 21907 | 2 yes, we use at least 10 ug to transfect 10^5 cells. plant cells though. but
i think it would be similar to animal cells?
【在 s*********t 的大作中提到】
: 是不是必须得用maxi？mini的质量不能做细胞转染？
: 另外，G418, puro没用完，是放回－20，还是可以放在4度？能stable多久？
: 多谢！
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s******y
发帖数: 28562 | 3 Mini 的完全可以
【在 s*********t 的大作中提到】
: 是不是必须得用maxi？mini的质量不能做细胞转染？
: 另外，G418, puro没用完，是放回－20，还是可以放在4度？能stable多久？
: 多谢！
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n********k
发帖数: 2818 | 4 it depends on the kits/company, the cells, so many factors...this kind of
question is a bit too hard/general to answer...
【在 s******y 的大作中提到】
: Mini 的完全可以
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s*********t
发帖数: 600 | 5 是吗？多谢
不过我看到有人说mini的plasmid的quality较差，因为没有去掉内毒素，有较多开环和线性，而maxi的去除了内毒素，且
多为超螺旋，更适合转细胞
还有G418和puro该怎么保存？
【在 s******y 的大作中提到】
: Mini 的完全可以
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s*********t
发帖数: 600 | 6 谢了。
不过不是担心plasmid的量，而是担心质量
有时候只转很少的细胞，mini prep的量是够的，做max太麻烦
想知道mini的到底能否转染细胞
but
【在 r******y 的大作中提到】
: yes, we use at least 10 ug to transfect 10^5 cells. plant cells though. but
: i think it would be similar to animal cells?
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s******y
发帖数: 28562 | 7 如果你要转的是类似Hela, HEK293T 这些大众化的细胞的话，
我亲手做过，用lipofectamine能转。如果你担心内毒素的话，
在做miniprep 的时候额外多洗两次（一次用buffer PB,
然后70%ETOH 洗的这一步多洗一次）
唯一要注意的是大部分mini-prep 出来的质粒浓度比较低，
如果浓度太低（低于50ng/ul) 的话要浓缩。
和线性，而maxi的去除了内毒素，且
【在 s*********t 的大作中提到】
: 是吗？多谢
: 不过我看到有人说mini的plasmid的quality较差，因为没有去掉内毒素，有较多开环和线性，而maxi的去除了内毒素，且
: 多为超螺旋，更适合转细胞
: 还有G418和puro该怎么保存？
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s******r
发帖数: 2876 | 8 这个depend on你的细胞，如果你的细胞耐粗饲，那没问题。
试一下好了。
谢了。
不过不是担心plasmid的量，而是担心质量
有时候只转很少的细胞，mini prep的量是够的，做max太麻烦
想知道mini的到底能否转染细胞
but
【在 s*********t 的大作中提到】
: 谢了。
: 不过不是担心plasmid的量，而是担心质量
: 有时候只转很少的细胞，mini prep的量是够的，做max太麻烦
: 想知道mini的到底能否转染细胞
:
: but
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a****d
发帖数: 1919 | 9 Try endotoxin removal solution from Sigma if you worry about endotoxin.
http://www.sigmaaldrich.com/catalog/ProductDetail.do?D7=0&N5=SE
G418 and puromycin solution should be stable for weeks at 4 degree. |
g*********3
发帖数: 177 | 10 如果你担心的不是mini prep的DNA quantity，那么mini prep是可以的。mini prep的
kit也有好几种，你可以选哪种transfection grade的，没有问题。
http://www.qiagen.com/products/plasmid/qiagenplasmidpurificatio
我以前用过，但不知道是不是这个kit。
【在 s*********t 的大作中提到】
: 是不是必须得用maxi？mini的质量不能做细胞转染？
: 另外，G418, puro没用完，是放回－20，还是可以放在4度？能stable多久？
: 多谢！
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h******y
发帖数: 55 | 11 mini kit 可以啊。碱法用酚氯仿抽下做transfection都可以。
要包子！ |
g*********5
发帖数: 2533 | 12 qiagen,invitrogen,fermentus,sigma的小抽试剂盒都用过，hek 没有问题。 |
c**********r
发帖数: 2372 | 13 恩，我用mini的转过
就是mini出来的量太少，真正大规模使用，还是要用maxi
【在 s******y 的大作中提到】
: Mini 的完全可以
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A******y
发帖数: 2041 | 14 Seriously, I though mini, midi, and maxi just telling you the prep size.
Use a quality kit not a kit from an unknown company. Qiagen is my preferred
one. |
r******y
发帖数: 21907 | 15 我们用macherey-nagel的，非常好比其他的都便宜 而且他们可以单独买column单独买
buffer。
【在 g*********3 的大作中提到】
: 如果你担心的不是mini prep的DNA quantity，那么mini prep是可以的。mini prep的
: kit也有好几种，你可以选哪种transfection grade的，没有问题。
: http://www.qiagen.com/products/plasmid/qiagenplasmidpurificatio
: 我以前用过，但不知道是不是这个kit。
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m*********e
发帖数: 378 | 16 mini prep的没用过，但是有高质量的mini的提质粒的kit完全可以转，也是Qiangen的
，效果很好的 |
c**i
发帖数: 265 | 17 可以啊，至少HEK293可以，我一般用400ng或800ng转100，000cells，没问题的。 |
