f*********e
发帖数: 1144 | 1 我想请教一下版上有Ab Ag binding经验的如下问题：
我的样品（Ag)里面有不同的species 都可以跟Ab 作用，因为它们都有相同的epitope.
比如，A, B,C,D 都可以跟Ab作用。但是[A]>[B]>[C]>[D]. 不知道到底浓度差别多大
，估计最大最小之间有20倍。
我先在的问题是，after incubation for two hours, A可以被capture, B也可以，但
是C和D都没有。所以我就在想是不是Ab的位点可能都被饱和了？有没有什么方法可以证
明确实是因为这个原因？比如after incubating with the real sample, 然后加入更
高纯度的已知Ag(E)with better affinity，看会不会再有这个E的出现？但是首先需要
确认的是这个binding是不是reversible,那个E会不会kick off previously captured
A and B?
多谢多谢！！！！！
| f*********e
发帖数: 1144 | 2 自己顶一下
epitope.
captured
【在 f*********e 的大作中提到】
: 我想请教一下版上有Ab Ag binding经验的如下问题：
: 我的样品（Ag)里面有不同的species 都可以跟Ab 作用，因为它们都有相同的epitope.
: 比如，A, B,C,D 都可以跟Ab作用。但是[A]>[B]>[C]>[D]. 不知道到底浓度差别多大
: ，估计最大最小之间有20倍。
: 我先在的问题是，after incubation for two hours, A可以被capture, B也可以，但
: 是C和D都没有。所以我就在想是不是Ab的位点可能都被饱和了？有没有什么方法可以证
: 明确实是因为这个原因？比如after incubating with the real sample, 然后加入更
: 高纯度的已知Ag(E)with better affinity，看会不会再有这个E的出现？但是首先需要
: 确认的是这个binding是不是reversible,那个E会不会kick off previously captured
: A and B?
| c*****i
发帖数: 1392 | 3 以前做过两个抗体针对同一抗原的competition assay. 一般而言，如果两个抗体
affinity差异10倍以上，low affinity可能被kick off. | f*********e
发帖数: 1144 | 4 终于有回复的了！！谢谢！
你做的competition assay时候是两个Ag同时一起加还是有先后顺序，而且wait for a
certian period of incubation time？Or it doesn't matter as the binding is
irrevisible?
【在 c*****i 的大作中提到】
: 以前做过两个抗体针对同一抗原的competition assay. 一般而言，如果两个抗体
: affinity差异10倍以上，low affinity可能被kick off.
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