m*p
发帖数: 226 | 1 用一家公司的单抗 (mouse IgG) 做CrossLink Immunoprecipitation. 银染和靠马氏良
染结果都很好。 主带（target protein) 很明显出现在正确的位置, 而且抗体的
pulldown比对照IgG多很多条带。 所以送到一家公司protein identification. 有大约
40个蛋白只出现在样品里，而对照没有。
根据Mass-Spect 的结果，奇怪的是主带（target protein)居然不是这个抗体识别的蛋
白， 虽然大小根这个识别的蛋白是一样。其实这个应该识别的蛋白就根本没有被检测
到。
于是我拿这个抗体去做wb 和 ihc。 发现ko 的样品还有这个蛋白，没有比对照少。我
很确信ko，因为phenotype 很明显，Q-PCR 证明85％－95％ ko.
我怀疑这家公司在制作抗体的过程中，根本没做antibody validation， 或者做了，认
为size一样的就是正确的抗体。
我花了大约7000刀，4个礼拜的时间。 我能叫他们赔偿吗？
我不知写清楚没有。 谢各位的反馈。 |
s******y
发帖数: 28562 | 2 首先，这些公司都有律师的。你估计搞不过他们。他们的产品说明里面都有
很长的免责声明，不对你的实验负责。
第二，你买回来的抗体，如果是没有用过的，第一次就必须有正对照负对照
这些东西来摸条件。另外，一般公司作antibody validation 的时候，
是用recombinant 蛋白，或者peptide来做的。不能保证没有cross-reactivity.
而你说的那个用WT 和 KO作的WB 和IHC，除非你已经试过了各种条件
（比方说不同的稀释浓度）都得出相同的结论，否则很难说服他们的。
最后，你最多能让他们退你买抗体的钱，或者免费给你换一个。
这大概就是你所能做的了。
【在 m*p 的大作中提到】
: 用一家公司的单抗 (mouse IgG) 做CrossLink Immunoprecipitation. 银染和靠马氏良
: 染结果都很好。 主带（target protein) 很明显出现在正确的位置, 而且抗体的
: pulldown比对照IgG多很多条带。 所以送到一家公司protein identification. 有大约
: 40个蛋白只出现在样品里，而对照没有。
: 根据Mass-Spect 的结果，奇怪的是主带（target protein)居然不是这个抗体识别的蛋
: 白， 虽然大小根这个识别的蛋白是一样。其实这个应该识别的蛋白就根本没有被检测
: 到。
: 于是我拿这个抗体去做wb 和 ihc。 发现ko 的样品还有这个蛋白，没有比对照少。我
: 很确信ko，因为phenotype 很明显，Q-PCR 证明85％－95％ ko.
: 我怀疑这家公司在制作抗体的过程中，根本没做antibody validation， 或者做了，认
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A******d
发帖数: 571 | 3 我用R&D的一个抗体，什么带都没有，优化各种条件，换各种体系，花了2个月，还是不
行。后来免费给我换了一个，做出了16条带！一分钱不退，白白浪费3个月时间。丫的
还好意思天天垃圾邮件来骚扰 |
m*p
发帖数: 226 | 4 我们学校也有律师的。
如果从实验的角度来讲，他们的抗体就一条带，looks very specific at right size
，很有可能他们made a mistake and did not validate the antibody. 他们在向我要
wb and ihc 的图 包括wt and ko. 他们的argument 是她们的产品没说可以做co-ip。
问题是这是一个错的抗体。
我得去看产品说明。
【在 s******y 的大作中提到】
: 首先，这些公司都有律师的。你估计搞不过他们。他们的产品说明里面都有
: 很长的免责声明，不对你的实验负责。
: 第二，你买回来的抗体，如果是没有用过的，第一次就必须有正对照负对照
: 这些东西来摸条件。另外，一般公司作antibody validation 的时候，
: 是用recombinant 蛋白，或者peptide来做的。不能保证没有cross-reactivity.
: 而你说的那个用WT 和 KO作的WB 和IHC，除非你已经试过了各种条件
: （比方说不同的稀释浓度）都得出相同的结论，否则很难说服他们的。
: 最后，你最多能让他们退你买抗体的钱，或者免费给你换一个。
: 这大概就是你所能做的了。
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m*p
发帖数: 226 | 5 我的抗体来自scbt。 看来前辈们说的没错。scbt不可能很快的变好。 我还花了4－5k
去做mass-spect。 期望很高的那种等待。
【在 A******d 的大作中提到】
: 我用R&D的一个抗体，什么带都没有，优化各种条件，换各种体系，花了2个月，还是不
: 行。后来免费给我换了一个，做出了16条带！一分钱不退，白白浪费3个月时间。丫的
: 还好意思天天垃圾邮件来骚扰
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D******U
发帖数: 385 | 6 没办法 作抗体的很多用小肽作抗原 纯环境下和体内差远了。
以前做过一个肽 买来的抗体总是从血液中识别一个很大的片断 后来发现是这个肽的血
中载体，呵呵，发了篇文章。
所以公司里都不管problem叫problem，而是opportunity for new discovery:)
好好琢磨琢磨，首先好好看看公司的抗体背景，如何做的，假设抗体识别没问题，这样
的结果暗示的各种情况列出来，设计实验逐一排查，没准你那个靶子在体内是dimmer或
者有其他载体。一般要本着科学的态度分析表象可能意味着什么，一味抱怨很可能错失
重大发现的机会。
这是真正research的态度。
当然你要是working under time pressure,还是换几家公司多试试
。订时一定要问他们是自己做的还是外包买的，别买来抗体都是一个源头，你就傻眼了
。呵呵
Good Luck! |
s********n
发帖数: 2939 | 7 Good point!
【在 D******U 的大作中提到】
: 没办法 作抗体的很多用小肽作抗原 纯环境下和体内差远了。
: 以前做过一个肽 买来的抗体总是从血液中识别一个很大的片断 后来发现是这个肽的血
: 中载体，呵呵，发了篇文章。
: 所以公司里都不管problem叫problem，而是opportunity for new discovery:)
: 好好琢磨琢磨，首先好好看看公司的抗体背景，如何做的，假设抗体识别没问题，这样
: 的结果暗示的各种情况列出来，设计实验逐一排查，没准你那个靶子在体内是dimmer或
: 者有其他载体。一般要本着科学的态度分析表象可能意味着什么，一味抱怨很可能错失
: 重大发现的机会。
: 这是真正research的态度。
: 当然你要是working under time pressure,还是换几家公司多试试
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z********i
发帖数: 610 | 8 我最近也遇到你同样的问题了，买个一个单抗WB的时候有一条非常强的带，机几乎没有
杂带。最后证明这个带根本就不是。
好在我只是做WB IP,没有华多少时间。
【在 m*p 的大作中提到】
: 用一家公司的单抗 (mouse IgG) 做CrossLink Immunoprecipitation. 银染和靠马氏良
: 染结果都很好。 主带（target protein) 很明显出现在正确的位置, 而且抗体的
: pulldown比对照IgG多很多条带。 所以送到一家公司protein identification. 有大约
: 40个蛋白只出现在样品里，而对照没有。
: 根据Mass-Spect 的结果，奇怪的是主带（target protein)居然不是这个抗体识别的蛋
: 白， 虽然大小根这个识别的蛋白是一样。其实这个应该识别的蛋白就根本没有被检测
: 到。
: 于是我拿这个抗体去做wb 和 ihc。 发现ko 的样品还有这个蛋白，没有比对照少。我
: 很确信ko，因为phenotype 很明显，Q-PCR 证明85％－95％ ko.
: 我怀疑这家公司在制作抗体的过程中，根本没做antibody validation， 或者做了，认
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w*****3
发帖数: 1582 | |
m*p
发帖数: 226 | 10 如果我的样品里，哪怕是有一点target protein, 都有信心去想，去做。 因为没有一
点target protein, 说明抗体是错的。
不过谢谢你的suggestion and appreciate your altitude. 你所说的载体是什么意思
？能否解释一下！
【在 D******U 的大作中提到】
: 没办法 作抗体的很多用小肽作抗原 纯环境下和体内差远了。
: 以前做过一个肽 买来的抗体总是从血液中识别一个很大的片断 后来发现是这个肽的血
: 中载体，呵呵，发了篇文章。
: 所以公司里都不管problem叫problem，而是opportunity for new discovery:)
: 好好琢磨琢磨，首先好好看看公司的抗体背景，如何做的，假设抗体识别没问题，这样
: 的结果暗示的各种情况列出来，设计实验逐一排查，没准你那个靶子在体内是dimmer或
: 者有其他载体。一般要本着科学的态度分析表象可能意味着什么，一味抱怨很可能错失
: 重大发现的机会。
: 这是真正research的态度。
: 当然你要是working under time pressure,还是换几家公司多试试
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m*p
发帖数: 226 | 11 该曝光那个公司吧！
【在 z********i 的大作中提到】
: 我最近也遇到你同样的问题了，买个一个单抗WB的时候有一条非常强的带，机几乎没有
: 杂带。最后证明这个带根本就不是。
: 好在我只是做WB IP,没有华多少时间。
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q*****n
发帖数: 331 | 12 you can show your Western result with the knockout sample. They should give
you refund. |
