o****e
发帖数: 1011 | 1 用比如NaHCO3/Na2CO3 buffer coating（antigen or antibody）完，甩掉后，
一定要洗，还是可洗可不洗？
加完blocking solution，block完，甩掉后，
一定要洗，还是可洗可不洗？
感觉block完后，似乎可以不洗，反正残余的可以继续block些空位？ |
c*****i
发帖数: 1392 | 2 这两步都可以不洗。blocking buffer一般不加tween吧，不过加了也没啥问题
TBS？
【在 o****e 的大作中提到】
: 用比如NaHCO3/Na2CO3 buffer coating（antigen or antibody）完，甩掉后，
: 一定要洗，还是可洗可不洗？
: 加完blocking solution，block完，甩掉后，
: 一定要洗，还是可洗可不洗？
: 感觉block完后，似乎可以不洗，反正残余的可以继续block些空位？
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f*********r
发帖数: 1233 | 3 coating完毕，到加样品之前，要彻底洗一下。洗液加满，至少5遍。
同理，联酶抗体孵育完毕，到加显色剂之前，也要彻底洗一下。
中间的冲洗，不认真也没关系。
冲洗的时候，只要不是用力喷射，而且没有用枪头刮well内壁的话，是不会把抗原、抗
体、封闭分子洗下来的。
加一句：以上方法只适用于三明治elisa。而不可用于竞争性elisa。 |
b****r
发帖数: 17995 | 4 正解，一看就是老手
【在 f*********r 的大作中提到】
: coating完毕，到加样品之前，要彻底洗一下。洗液加满，至少5遍。
: 同理，联酶抗体孵育完毕，到加显色剂之前，也要彻底洗一下。
: 中间的冲洗，不认真也没关系。
: 冲洗的时候，只要不是用力喷射，而且没有用枪头刮well内壁的话，是不会把抗原、抗
: 体、封闭分子洗下来的。
: 加一句：以上方法只适用于三明治elisa。而不可用于竞争性elisa。
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f*********r
发帖数: 1233 | 5 客气客气。这东西我做过5年多。没有上千，也有几百盘。做到最后，都不用plate
reader，看一眼就知道结果了（开玩笑）。现在看见12X8的组合就想吐。不过也总结出
不少道道。别人买1个kit做1盘，我现在1盘变5盘。
【在 b****r 的大作中提到】
: 正解，一看就是老手
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p******i
发帖数: 1092 | 6 請問是如何1變5的～
【在 f*********r 的大作中提到】
: 客气客气。这东西我做过5年多。没有上千，也有几百盘。做到最后，都不用plate
: reader，看一眼就知道结果了（开玩笑）。现在看见12X8的组合就想吐。不过也总结出
: 不少道道。别人买1个kit做1盘，我现在1盘变5盘。
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f*********r
发帖数: 1233 | 7 商业机密。（开玩笑啦）
我是不会随便推荐厂家说明书以外的用法。一来不想对不成功的结果负责，二来也不想
对成功的、但是不被审稿人接受的结果负责。
给你一个提示：kit提供的coating ab，capturing ab，显色剂等，都是“绝对过量”
的。
【在 p******i 的大作中提到】
: 請問是如何1變5的～
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p******i
发帖数: 1092 | 8 恩,恩
多謝您~
不過, 什麼情況下 審稿人不接受成功的結果呢...比較好奇 :)
【在 f*********r 的大作中提到】
: 商业机密。（开玩笑啦）
: 我是不会随便推荐厂家说明书以外的用法。一来不想对不成功的结果负责，二来也不想
: 对成功的、但是不被审稿人接受的结果负责。
: 给你一个提示：kit提供的coating ab，capturing ab，显色剂等，都是“绝对过量”
: 的。
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f*********r
发帖数: 1233 | 9 假设我审稿，投稿人说他买来kit，但是
多次回收重复使用coating ab
稀释样品（包括standards）至厂家建议的浓度的20%甚至更多
明显降低capturing ab和显色剂
或者与别家产品混用
等等
就算最后结果无异，我也会拒他。理由：破坏游戏规则。NIH发我们这么多钱，不是让
我们节约的，而是应该使劲花，养活下游企业的。
【在 p******i 的大作中提到】
: 恩,恩
: 多謝您~
: 不過, 什麼情況下 審稿人不接受成功的結果呢...比較好奇 :)
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p******i
发帖数: 1092 | 10 啊，這樣說確實也 Make Sense ……
再次感謝～
【在 f*********r 的大作中提到】
: 假设我审稿，投稿人说他买来kit，但是
: 多次回收重复使用coating ab
: 稀释样品（包括standards）至厂家建议的浓度的20%甚至更多
: 明显降低capturing ab和显色剂
: 或者与别家产品混用
: 等等
: 就算最后结果无异，我也会拒他。理由：破坏游戏规则。NIH发我们这么多钱，不是让
: 我们节约的，而是应该使劲花，养活下游企业的。
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M*****n
发帖数: 16729 | 11 as long as you do it consistently each time, I don't see any difference it makes。 |
s********n
发帖数: 248 | 12 搭车问前辈个问题，ELISA检测T cell IL-2 production的实验，如果background比较
高，有什么办法降低background么？
多谢了先！
【在 f*********r 的大作中提到】
: 假设我审稿，投稿人说他买来kit，但是
: 多次回收重复使用coating ab
: 稀释样品（包括standards）至厂家建议的浓度的20%甚至更多
: 明显降低capturing ab和显色剂
: 或者与别家产品混用
: 等等
: 就算最后结果无异，我也会拒他。理由：破坏游戏规则。NIH发我们这么多钱，不是让
: 我们节约的，而是应该使劲花，养活下游企业的。
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f*********r
发帖数: 1233 | 13 我昨天看到你的问题，想了一晚上，还是没能确定你说的背景是个啥。你能不能具体说
说是怎么回事？
【在 s********n 的大作中提到】
: 搭车问前辈个问题，ELISA检测T cell IL-2 production的实验，如果background比较
: 高，有什么办法降低background么？
: 多谢了先！
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