C*******e
发帖数: 4348 | 1 要跑非变性蛋白电泳
我的蛋白比较bt，pI很高
不知道有没有人试过在pH值大于10 （pH>pI）的条件下跑蛋白PAGE胶啊
比如用CAPS做缓冲溶液之类的
如果有配方就更加感谢了！
（或者有没有可能在pH |
T**********t
发帖数: 1604 | 2 我用酸性或者中性的native gel跑过pI在9-10之间的蛋白，能分开，就是条带不是特别
好看。这个文章里两个recipe都有：
http://dx.doi.org/10.1016/0003-2697(81)90178-0
Analytical Biochemistry
Volume 118, Issue 1, 15 November 1981, Pages 194-196
A new discontinuous buffer system for the electrophoresis of cationic
proteins at near-neutral pH
John M. Thomas and M. E. Hodes
跑这个的时候，正负极是要反接的。 |
C*******e
发帖数: 4348 | 3 非常感谢哈！我回头试试看
可是我的蛋白pI在11以上。。。。
【在 T**********t 的大作中提到】
: 我用酸性或者中性的native gel跑过pI在9-10之间的蛋白，能分开，就是条带不是特别
: 好看。这个文章里两个recipe都有：
: http://dx.doi.org/10.1016/0003-2697(81)90178-0
: Analytical Biochemistry
: Volume 118, Issue 1, 15 November 1981, Pages 194-196
: A new discontinuous buffer system for the electrophoresis of cationic
: proteins at near-neutral pH
: John M. Thomas and M. E. Hodes
: 跑这个的时候，正负极是要反接的。
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T**********t
发帖数: 1604 | 4 那你跑中性的非变性胶就够了吧，Histidine-MOPS的那个，pH 6.8左右。你的蛋白pI那
么高，肯定能跑得开的。
【在 C*******e 的大作中提到】
: 非常感谢哈！我回头试试看
: 可是我的蛋白pI在11以上。。。。
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C*******e
发帖数: 4348 | 5 恩，我可能还是跑醋酸的那个，我有4个蛋白，分别是7，8，10，11
再次感谢！
【在 T**********t 的大作中提到】
: 那你跑中性的非变性胶就够了吧，Histidine-MOPS的那个，pH 6.8左右。你的蛋白pI那
: 么高，肯定能跑得开的。
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T**********t
发帖数: 1604 | 6 醋酸那个pH太低了，碱性蛋白跑得太快分不开。我的蛋白pI大概9.9的样子，用Acetate
-beta-Alanine pH 4.3的跑，单体和dimer紧挨着一团。用Histidine-MOPS pH 6.8的跑
，就能看出来两团，虽然也还是团，不是条带，但至少是分开的两团。
【在 C*******e 的大作中提到】
: 恩，我可能还是跑醋酸的那个，我有4个蛋白，分别是7，8，10，11
: 再次感谢！
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C*******e
发帖数: 4348 | 7 好的，那我先试试看histidine-MOPS pH 6.8的
想问你一下你用什么loading buffer呢？
我不确信BB和XC在反接电极的条件下是不是和蛋白一个方向移动
Acetate
【在 T**********t 的大作中提到】
: 醋酸那个pH太低了，碱性蛋白跑得太快分不开。我的蛋白pI大概9.9的样子，用Acetate
: -beta-Alanine pH 4.3的跑，单体和dimer紧挨着一团。用Histidine-MOPS pH 6.8的跑
: ，就能看出来两团，虽然也还是团，不是条带，但至少是分开的两团。
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T**********t
发帖数: 1604 | 8 loading dye 用methyl green
其他的就跟别的loading buffer成分差不多，就是stacking buffer加上甘油。
【在 C*******e 的大作中提到】
: 好的，那我先试试看histidine-MOPS pH 6.8的
: 想问你一下你用什么loading buffer呢？
: 我不确信BB和XC在反接电极的条件下是不是和蛋白一个方向移动
:
: Acetate
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