d****i
发帖数: 2346 | 1 1. 这细胞好像贴壁很紧很难消化下来，大家都怎么做的？
2. 细胞分化好以后我们加药时换成普通的DMEM培养基发现过几天细胞越来越少了，好
像是慢慢是死掉了。大家有没有这种情况？
谢谢！ |
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B*N
发帖数: 455 | 2 一个成年心肌细胞长约100-140Um，厚约20-25um,在体内的时候，收缩时长度变短约40%
。厚度增加约30%，成年心肌细胞在体外一般跳动用药物抑制住，不跳，挑跳的细胞不
贴壁很快死掉。也有人做单细胞动力学，跳动的幅度一般比体内小 |
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c*****i
发帖数: 1392 | 3 Hybridoma是最容易复苏的一类细胞了。 37C水浴速融，贴壁的Hybridoma直接加入培养
瓶，2小时后换液，可用20％FBS。悬浮细胞解冻后加1ml培养基，慢速离心1000rpm，
5min，去上清，加新鲜medium，培养。若细胞太少，培养一周后看
10000rpm
了。 |
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发帖数: 1 | 4 最近做luciferase assay，就是把含有疾病相关的snp的promoter跟luciferase连接在
一起，看snp对promoter的影响。假设snp的ref allele是A, 疾病相关的allele是B
我首先在hek293里做，用lipofectamine3000转染。铺板子（12-well）铺了10个孔，5
个用于allele-a, 5个用于allele－b。先把lipo和dna混合好，然后把mix分给每一个孔。
以上是第一次实验，过两天我会一模一样的重复上述实验。
我想请问这里的5个孔中的每一个孔算是biological replicate还是technical
replicate呢？
而这两次实验算是biological replicate还是technical replicate呢？
之所以问这个问题是因为后来面对转染neuron的实验。neuron比较难转染所以用的是
nucleofection，一次性用cuvette转染100万个细胞，然后分到12-well的3个孔中。
同样的实验过两天我也会一模一样的再重复一次。
对于neuron的转染，分到3个孔中的... 阅读全帖 |
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G***G
发帖数: 16778 | 5 your experiments after two days are biological replicate.
five replicates at the same times are technical replicate.
最近做luciferase assay，就是把含有疾病相关的snp的promoter跟luciferase连接在
一起，看snp对promoter的影响。假设snp的ref allele是A, 疾病相关的allele是B
我首先在hek293里做，用lipofectamine3000转染。铺板子（12-well）铺了10个孔，5
个用于allele-a, 5个用于allele－b。先把lipo和dna混合好，然后把mix分给每一个孔。
以上是第一次实验，过两天我会一模一样的重复上述实验。
我想请问这里的5个孔中的每一个孔算是biological replicate还是technical
replicate呢？
而这两次实验算是biological replicate还是technical replicate呢？
之所以问这个问题是因为后来面对转染neur... 阅读全帖 |
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s******s
发帖数: 13035 | 6 贴壁的细胞，直接把slide扔到dish里面长；悬浮的细胞，
用cytospin。
stuck |
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m*****u
发帖数: 15526 | 7 血液细胞很多都有游走，贴壁的特性。用96孔板，液体培养基最后怎么收集分析？用半
固体培养基的重要作用是可以观察血细胞集落，有经验的根据集落形态，颜色，大小就
可以判断progenitor的分化情况。细胞集落也容易收集分析，验证 |
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a*******a
发帖数: 4233 | 8 lenti 24小时后能看到gfp
问题是一定要在细胞贴壁以后再感染，不然可能会造成细胞融合。 |
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s*****o
发帖数: 22187 | 9 【 以下文字转载自 Texas 讨论区 】
发信人: Zamborghini (BMW), 信区: Texas
标 题: 转贴：美国最新最轰动最全面的营养报告
发信站: BBS 未名空间站 (Thu Apr 12 15:17:00 2012, 美东)
美国最新最轰动最全面的营养报告：吃肉无异于吃毒
美国参议院「营养问题特别委员会」向全美提出的轰动性报告，是有史以来最庞大的饮
食健康报告，全文长达五千页之多。
一.中毒
由于动物被杀之前的极度恐惧和巨大痛苦，使体内的生化作用产生了极大的变异，致使
毒素遍布全身,尸体完全被毒化。
根据大英百科全书的记载, 动物身体中的毒素，包括尿酸与多种毒性分泌物、激素、排
泄物，遍布在血液与身体组织之内，因而提出中肯的见解：「若是与牛肉中所含的百分
之五十六不净的水分相比较，从坚果、豆类及谷类中所得到的蛋白质，显然要纯洁多了
。」 正如我们的身体在恐惧、愤怒或紧张时会得病一样，动物在极度危险的情况下
，体内会产生极大的生化异变。当它们见到同类惨遭屠宰，为了活命而极度挣扎时，体
内的多种荷尔蒙尤其是肾上腺素, 会异常分泌，死后，大量的荷尔蒙便留在了肉中... 阅读全帖 |
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s******y
发帖数: 28562 | 10 我们那里的Core 没有那么贵，也就是１０块钱左右。
但是还是要买一个的，因为要做活细胞成像，如果用core 的服务很不方便。
比方说我们有一个细胞系特别难贴壁那种，如果要拿到core去路上颠上颠下
弄不好就把它们又颠散了。
而且我们经常一做就是一整夜什么的，到Core里做真的是不方便。
只是觉得一台新的系统太贵了，贵得肉痛痛的。 |
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Z*********i
发帖数: 3422 | 11 美国最新最轰动最全面的营养报告：吃肉无异于吃毒
美国参议院「营养问题特别委员会」向全美提出的轰动性报告，是有史以来最庞大的饮
食健康报告，全文长达五千页之多。
一.中毒
由于动物被杀之前的极度恐惧和巨大痛苦，使体内的生化作用产生了极大的变异，致使
毒素遍布全身,尸体完全被毒化。
根据大英百科全书的记载, 动物身体中的毒素，包括尿酸与多种毒性分泌物、激素、排
泄物，遍布在血液与身体组织之内，因而提出中肯的见解：「若是与牛肉中所含的百分
之五十六不净的水分相比较，从坚果、豆类及谷类中所得到的蛋白质，显然要纯洁多了
。」 正如我们的身体在恐惧、愤怒或紧张时会得病一样，动物在极度危险的情况下
，体内会产生极大的生化异变。当它们见到同类惨遭屠宰，为了活命而极度挣扎时，体
内的多种荷尔蒙尤其是肾上腺素, 会异常分泌，死后，大量的荷尔蒙便留在了肉中，随
后毒化食用者的身体组织。美国营养机构早已指出：动物死尸是富含大量毒素的物质。
二.致癌物
最近一个以五万名素食者为对象的研究报告，在癌症研究领域引起巨大震撼。
这个报告指出：这群素食者罹患癌症的比例之低，相当令人惊讶。与同样年龄及性别的
人比较，各... 阅读全帖 |
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z***i
发帖数: 8285 | 13 没听过。愿闻其详
为什么看了这贴我会想到那个口腔壁细胞的典故 |
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p*****n
发帖数: 981 | 14 ☆─────────────────────────────────────☆
wonderlich (左岸，遁去) 于 (Sat Dec 30 04:42:34 2006) 提到:
帮LP问个问题。。。谢谢。。。
☆─────────────────────────────────────☆
sinister (@_@) 于 (Sat Dec 30 05:55:45 2006) 提到:
你的问题不清楚？你要看什么phenotype? 还是细胞形状大小？
☆─────────────────────────────────────☆
wonderlich (左岸，遁去) 于 (Sat Dec 30 06:00:53 2006) 提到:
贴壁的cell在flask里面attach在flask底部,
用显微镜就可以看了，容易聚焦，
假如悬浮的话，怎么看呢？
我说的Phenotype就是很基本的比如形状、大小，是否健康之类。。。
☆─────────────────────────────────────☆
sinister (@_@) 于 (Sat |
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h******o
发帖数: 23 | 15 they have different requirement for extracellular matrix |
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p**i
发帖数: 3525 | 19 Many thanks. Is it stronger than gelatin?
Collagan I or IV?
3T3 cells 最适合用什么呢? |
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s******y
发帖数: 28562 | 20 Our NIH 3T3 cells are very well adhesive even without any coating.
If yours don't still to the wall tight enough, very likely they are
contaminated with mycoplasma |
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b********i
发帖数: 73 | 21 Hi, there: May I have a question about 3T3-L1 preadipocyte differentation?
In induction medium, I will use
10% FBS, 5ug/ml insulin, 0.5mM IBMX and 1uM DEX for 4 days. Then keep in
5ug/ml insulin for another 4
days. Any difference from your protocol? |
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s******y
发帖数: 28562 | 22 不好意思我们不是做这个的，我对这个实验不了解
? |
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p**i
发帖数: 3525 | 23 谢谢，贵就算了。我老板反复教导我们要用最省钱的方式做实验。 |
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p**i
发帖数: 3525 | 24 这样啊。可是这些我做的stable lines。。。 |
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n********k
发帖数: 2818 | 25 must be a newbie and a bit careless researcher:))) this 3t3 is not that 3t3.
..
? |
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n********k
发帖数: 2818 | 26 u can use drug to treat them to get rid of the containimation if u have no
choice..otherwise just start all over...additionally, it could be the
manufacture plates/gelitin changed...I had a big struggle before my
graduation due to a manufacture change from BD, but they never admit the
problem even if I had stone-solid evidence...they did send me several case
of plates free but they never figured out the problem...later on, I found
out online even their own researchers was reporting/asking about |
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p**i
发帖数: 3525 | 27 haha, thanks
I will at least cite:
neverthink, sunnyday, et al, mitbbs, 2010, .... |
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p******d
发帖数: 3737 | 28 实验要用siRNA 瞬时knockdown贴壁细胞系老鼠的Notch1和Notch4。有没有人推荐哪个
公司的哪个
产品效率比较好的？
我初步看了一下ambion的产品，不知道买多少比较合适？怎么稀释？有没有前辈有转染
的protocol可
以参考一下。我打算是要做T25的小flask，因为要比较多的细胞跑流式的。 |
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R*****w
发帖数: 447 | 29 最近在做用mammalian cell 表达蛋白，贴壁培养还是不太方便。请问那些哺乳动物细
胞可以悬浮培养？（可以用spinner flask）
我试过293T细胞，可是在spinner flask长的很差。听说HeLa 可以悬浮培养，是吗？
悬浮培养应该注意些什么：
1，培养基一样吗？
2，FBS浓度还是用10％吗？
多谢！ |
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D***a
发帖数: 516 | 30 我也养过，发现这不怎么贴壁，轻轻一吹打就下来。可能就是这样死细胞多才脏吧。 |
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s*****g
发帖数: 7857 | 32 只有吸,没有吹.
我做细胞的(贴壁或悬浮生长的).我旁边实验室做组织切片.我还是从他们那里得到的启
示,用笔隔绝,然后反复洗/吸.
当然,最后一步洗可以整个载片泡在PBS里,其他没有任何问题. |
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s****l
发帖数: 395 | 33 今年参观了一次，最牛x的地方是养贴壁的细胞已经不用人工了，全部机器化编程培养 |
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d****i
发帖数: 2346 | 37
轻微晃动不会掉，可能经不住5次洗涤啊。谢谢！ |
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r***e
发帖数: 2539 | 39 cyto-spin?
or spin the whole plate with cells.
一般做免疫荧光都没问题，比如Jurkat cell。
就是不知道你准备怎么洗。 |
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w********r
发帖数: 1431 | 41 我们用PDL coate plate
效果不错 |
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w********r
发帖数: 1431 | 43 PEI,便宜量又足。
两三百美刀可以配2L,能用到地老天荒了 |
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k***e
发帖数: 41 | 44 calcium phosphate.
请问二楼， PDL是？ |
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f*******d
发帖数: 92 | 46 的确，这个细胞不是很容易贴壁。而且非常容易浮起来。你可以试着用collegen
coated的板子。 |
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v********a
发帖数: 646 | 47 在做一种贴壁非常不好的细胞，要做荧光，中间需要harsh washing。因此需要coating
非常结实的chamber slides。
有朋友建议sequential coating with multiple reagents。请问，有人用多种试剂进
行复合coating的么？ |
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发帖数: 1 | 48 新的实验步骤有几处更改，其中包括“血清品牌由 Hyclone 变更
为 Gibco”，“293T细胞贴壁不牢，换液时要小心操作”，“溶解和稀释质粒及
gDNA 的缓冲液变更为水（pH 8.0）
实在忍不住爆下粗口，我操，耍人也要有点诚意行吗？joshhaha，替我问候下你老婆，
等你身败名裂了，也许出于人道主义我可以出钱让你家隔壁老王照顾她一下。 |
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g****t
发帖数: 31659 | 49 《三体III：死神永生》
作者：刘慈欣
申明:本书由奇书网(Www.Qisuu.Com)自网络收集整理制作,仅供预览交流学习使用,版权归原作者和出版社所有,如果喜欢,请支持订阅购买正版.
写在"基石"之前
姚海军
"基石"是个平实的词，不够"炫"，却能够准确传达我们对构建中的中国科幻繁华巨厦的情感与信心，因此，我们用它来作为这套原创丛书的名字。
最近十年，是科幻创作飞速发展的十年。王晋康、刘慈欣、何宏伟、韩松等一大批科幻作家发表了大量深受读者喜爱、极具开拓与探索价值的科幻佳作。科幻文学的龙头期刊更是从一本传统的《科幻世界》，发展壮大成为涵盖各个读者层的系列刊物。与此同时，科幻文学的市场环境也有了改善，省会级城市的大型书店里终于有了属于科幻的领地。
仍然有人经常问及中国科幻与美国科幻的差距，但现在的答案已与十年前不同。
在很多作品上(它们不再是那种毫无文学技巧与色彩、想象力拘谨的幼稚故事)，这种比较已经变成了人家的牛排之于我们的牛肉。差距是明显的--更准确地说，应该是"差别"--却已经无法再为它们排个名次。口味问题有了实际意义，这正是我们的科幻走向成熟的标志。
与美国科幻的差距，实际上是... 阅读全帖 |
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y********n
发帖数: 288 | 50 【 以下文字转载自 WaterWorld 讨论区 】
发信人: ruomu (ruomu), 信区: WaterWorld
标 题: 医院和医生都不愿说的！有了它 胜过五年医科大！
发信站: BBS 未名空间站 (Sun Jan 30 11:21:58 2011, 美东)
护士都知道，医生都明白 ！！！
1。牙痛：乙酰螺旋霉素片+甲硝唑
乙酰螺旋霉素片+人工牛黄【消炎】
乙酰螺旋霉素片+糖甾醇片
2。干咳：百合固定口服液 养阴清肺
3。白痰：固本止咳膏
4。黄痰：急支糖浆 肺力咳合剂 等等。。。。。。
白痰和黄痰都可以使用：镇咳宁含片
5。眼药：复方硫酸软骨（润洁）【保健】
萘敏维（润洁）【消炎】
氯霉素滴眼液【沙眼】
6。近视眼：珍珠明目滴眼液
四味珍层冰硼滴眼液（珍视明滴眼液）
眼药水开封后，一个月内使用完，不然会氧化
7。慢性鼻炎：鼻炎片（中联） 千柏鼻炎片（奇星） 鼻炎康片（德众）
丙酸倍氯米松鼻气雾剂（伯克纳） 丙酸氟替卡松鼻喷雾剂（辅舒良）
8。肠胃炎：胃肠安丸
9。鸡眼：水杨酸苯酚贴膏
10。感冒药要凡是含有〈扑尔敏〉的成分都会犯困
11。扁桃体炎：一清胶囊 众生丸 银... 阅读全帖 |
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