s******1
发帖数: 4987 | 1 纯粹的投机市场，还是逃不了boom&bust的宿命 |
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w***s
发帖数: 7132 | 2 英文/中文 护肤品成分对照表2006-07-28
Tag：护肤品常识
版权声明：转载时请以超链接形式标明文章原始出处和作者信息及本声明
http://drer5.blogbus.com/logs/2927288.html
你必须知道的常见护肤品成分：
水：water/aqua,purified(纯净水）
酒精：alcohol,SD Alcohol 40,Alcohol denat
香料：fragrance/parfum
色素：种类很多，一般从是否出现颜色的单词来判断，比如CL42090、blue1，Red4
保湿剂：常见的是Glycerin,Sodium```,还有很多其他种类
Hydratant/Hydra/Moisturize=保湿
Pore Minimising/Pore Reducer=收缩，细致毛孔
Lift/Firming/Contouring=紧实，提拉
Sebum/Shine/Beilliance=控制皮质分泌
Nutri/Nutritive/Nourishing=丰富营养，滋润
Repair/Anti-Age=修复，抗衰老
Exfoliant/Gommage/Scru... 阅读全帖 |
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G***a
发帖数: 27294 | 3 因为基础代谢是随年龄递减的。
而且体重增加也不时是线性的。而是一个平衡态。
举个例子，就像一个无机化学试验里的缓冲溶液一样
比如你有个强碱的缓冲液，你往里面加酸，加一试管，ｐｈ值是８，两试管也是８，３
试管也是
加到第四试管，突然变成了６。。。。。这就是过了缓冲范围的结果。
大多数生物系统，都是平衡态，没跨过平衡怎样都行，一旦跨越了平衡，就一发不可收
拾了
啊。 |
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G***a
发帖数: 27294 | 4 还没说明白吗？ ：）这么说吧。
身体都是有代偿性的。一般在阈值内都能给compensate了。
就像缓冲液一样，人体也是多重的缓冲的大ｂｕｆｆｅｒ，有些人缓冲能力强
她的猛吃糖的量还没到她应得糖尿病的threshold
至于，缓冲能力的强弱，和你体重，还有家族其他类型糖尿病史有关，但没有“孕期糖
尿病”这个基因。
所以孕期糖尿病，不是基因引起的。 |
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O******n
发帖数: 1505 | 6 可能缓冲液是某种粘度很大，抗剪切而且散布到人体内部不影响生理机能的神奇液体。 |
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H********g
发帖数: 43926 | 7 【 以下文字转载自 Military 讨论区 】
发信人: CatchGodLine (捆仙绳), 信区: Military
标 题: 韩国丹麦摘桃 韩春雨终于被海外千老逼得交待技术秘密
发信站: BBS 未名空间站 (Mon Jan 23 13:57:51 2017, 美东)
韩春雨终于被海外千老逼得交待了技术秘密
韩国丹麦摘桃
由此可见华人本性的丑陋
华人想保留一些技术秘密有多末难
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在韩春雨的舆论风波逐渐发酵之时，8月8日，韩春雨向非盈利性质粒共享信息库
Addgene提交新版的详细实验方法，并补充了数项应当注意的问题。
中国青年报·中青在线记者在Addgene网站中看到，新版实验方法分为细胞培养、
质粒/gDNA 共转染、基因组提取三个部分，一些实验细节与其在《自然-生命科学》中
发表的论文有所不同。
据 “科学美国人”中文版《环球科学》的微信公众号“科普圈”介绍，新实验步
骤有几处改变，其中包括“血清品牌由Hyclone 变更为Gibco”，“溶解和稀释质粒及
gDNA 的缓冲液变更为水（pH 8.0）”，“建议在质粒/gDN... 阅读全帖 |
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s******y
发帖数: 28562 | 8 这个得看我的状态，如果心不在焉的话的确不行，跑出来的胶条带容易散。
其实跑胶的一个关键就是一些细节，首先就是成胶的质量要非常好（这个最重要），上
样前要把胶孔用缓冲液洗一洗，然后上样的时候枪头不能歪着，而且上样要快而且稳（
这个第二关键），然后跑的电压不要太高防止胶体过热。如果能顾及所有细节，那么跑
出来的胶都不会太难看。
但是如果太久不玩这个东西了就会忘记很多细节。 |
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p****p
发帖数: 2052 | 9 第六章 生命的重量
一
郭襄听到刘正风跳楼自杀的消息的时候，正小心地握着加样枪，把刚刚做好的PCR样品加进
琼脂糖胶的孔道里面去。
这时候那个汴大医学院基础系的女孩子推门进来，对正在做实验的另一个女孩子说，
“明天刘正风教授的追悼会，你去不去？”
“去啊，怎么能不去？唉，到底为什么跳了楼呢？”
郭襄手一抖，混了蓝色染料的样品没有加进孔道，从旁边流泻，电泳池里本来清澈的缓冲
液里，便漾起了一朵深蓝色的小花，迅速地晕开，变成浅蓝色的圈圈，继续晕开，慢慢不
见，而让透亮的缓冲液有了点点蓝色的混浊。
郭襄放下加样枪摘下手套回过头的时候，两个女孩子已经都出去了，实验室里只有她一个
人。
她往四周看看，离心机还放在最里面的台子上，三台PCR机旁边的记录本依然登记满了名字
，一直排到明天的午夜，里外屋之间放置的蒸馏水大桶半满着，外屋门旁堆着几个装试剂
的包装箱。。。。。。一切如同大半年前完全一样，只是那个带着他们四个中学生走进这
间实验室的人，跳楼死了。
“欢迎你们， |
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B*********k
发帖数: 3110 | 10 冲击力的区别大了，车转弯和撞车的区别。大脑防震的缓冲液作用有限，晃两下可以应
付，撞两下不行。 |
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h*********o
发帖数: 19006 | 11 最近在用Co-IP的方法检测细菌细胞内的蛋白磷酸化水平（32P标记）。最后洗完Protei
n-A agarose后，加2 X SDS上样缓冲液，如果直接吸一是太粘吸不出来，另外这样的缓
冲液里也没蛋白信号（文献上说37度处理5 min，试过不行，难道beads用的不一样？）
。
如果100度煮5 min倒是能把蛋白从protein-A agarose上分离下来，但预实验表明100度
处理大概会使50%的磷酸化蛋白信号消失。请问做体内蛋白磷酸化检测的朋友，还有别的
什么着数可以用吗？ |
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r****o
发帖数: 105 | 12 你给的信息不够，至少得说说这两个蛋白的标签是什么吧，比如
Flag, HA, 或者myc什么的。既然你用proteinA/G，你应该还加了一种
抗体可以把两个蛋白中的一个拽下来吧？
背景高倒是很常见，因为非特异性的结合会比较严重。要做得好，
被首先拽下来的蛋白的tag要比较好才行，而且如果用多次串联的TAG
会比较好，比如6XFLAG。也有人用两种不同的TAG串联在一起，通过
两步纯化来增强特异性。另外就是最好直接用抗体共价耦联的琼脂凝胶(
比较贵，1ML可能要五百多刀)。
还有就是，一般的做法是直接把洗过的beads 直接用sample buffer
煮。这样的样品非特异性的成分会不少，但如果用TAG peptide的溶液
冲洗蛋白(比如anti-flag matrix 用flag peptide 来冲洗)，效果会好很多。
没信号也许是因为缓冲液太强，或者是因为两个蛋白结合太弱，
冲洗过程中脱落了。用crosslinker可能会有所帮助。 |
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r****o
发帖数: 105 | 13 1. 一般LYSIS BUFFER里头SDS的浓度比较低，最多只有1%，所以
不至於让蛋白质变性，破坏正常的结合能力。不过很难讲，你要
试试。如果你要用lysate做enzyme assay,那就最好不要用SDS，因为
会降低酶活性。
2. 不太清楚，常规的LYSIS BUFFER并不一定需要Sodium fluoride.
查了一下，NaF好像是一种phosphatase的抑制剂。
3. 选择HEPES还是TRIS主要是看在特定pH 附近的缓冲能力。HEPES
是一种酸，用它配pH从5到7.5都还可以，再偏硷性，比如到8，就不是
很好了。TRIS则是一种硷，Pka比HEPES大，配pH8到7之间的缓冲液，
还可以，再偏酸性就不合适了。
如果你要做crosslinking，并且用的是amine coupling的crosslinker,
就不能用TRIS，因为TRIS分子有四个氨基，很容易与crosslinker发生
耦联。
4. 非离子型去垢剂，Nonidet P-40 是最温和的一种。 Triton X-100
也可以。
5. 不太清楚，但是我觉得问题不大。只要你保 |
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r****o
发帖数: 105 | 14 本文献给YL
（二十二）失败中的启示
离子交换层析之后是最后一步纯化，疏水作用层析(hydrophobic
Interaction Chromatography, HIC)。HIC和硫酸铵沉淀是同一个原理。
蛋白质表面有一些疏水区域，如果在蛋白质样品溶液里面加足够的盐，
就会与这些疏水区域争夺水分子。没有了足够的分子，这些疏水区域倾向
于与其他疏水区域结合。HIC的beads上衍生有非极性基团，可以与蛋白
质的疏水区域结合，这样蛋白质就能bind到柱子上。要想把蛋白质洗脱
下来，则要用低盐缓冲液冲洗，盐浓度下降之后蛋白质与柱子的疏水相互
作用也被削弱，所以能被冲洗下来。由于HIC要求样品的起始盐浓度很高，
所以特别适于作为硫酸铵沉淀或者离子交换层析后续步骤。因为硫酸铵沉
淀（无论是上清还是沉淀）和离子交换层析的产物，盐浓度都非常高，如
果直接再跑HIC，不但省了透析脱盐的一步，还进一步纯化了蛋白。现在
常用的HIC resin上的疏水基团有两种，一种是Phenyl 另一种是Octyl。比
较而言，Octyl group更加疏水一些。我们这一次的实验中用的是Phenyl
se |
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C*********d
发帖数: 12 | 15 是这样的：左边那些道的样品是不是某高盐洗脱，上样体积比较大，而右边是细胞浓度
高的裂解液，粘稠。
建议将细胞稀释在大一点的同种缓冲液，裂解完全，上相同大小体积。 |
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T**********t
发帖数: 1604 | 16 如果配方那么容易自己改进了，商家赚什么？
好多ingredients都是保密的。
或者告诉你成份，不告诉你浓度。 |
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n**********1
发帖数: 251 | 17 就是交流一下，如果有知道的人可以共享一下，呵呵。 |
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l****y
发帖数: 398 | 20 http://tools.invitrogen.com/content.cfm?
pageid=10642&fuseaction=appendix.browse&category=Elec_Blotting
not high man myself.
You can get the invitrogen buffer recipes from the above link.
you can also call the company for the recipe. They usually will tell u. |
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n******d
发帖数: 1055 | 22 western 都用commercial buffer, 你奔到家了。 |
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s********n
发帖数: 2939 | 24 用楼上的配比配，或者
也可以先计算好50 mM NaH2PO4的量，用NaOH调到pH 8.0，再定容到你需要的体积。 |
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m****m
发帖数: 395 | 25 试了 ThisjobIwant 的方法，果然厉害，算好、配完后测PH差不多正好8。0 |
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e********r
发帖数: 147 | 26 用甲醛-MOPS变性琼脂糖胶跑细菌总RNA电泳，发现样品完全降解。做实验逐一排除，发
现MOPS缓冲液，去离子甲酰胺和总RNA分别混合后65度处理都没问题，而只要把甲醛和
RNA混合后就会降解。奇怪的是，换了几瓶甲醛都是这个结果，而别人的总RNA用同样的
甲醛没问题，极为郁闷，难道我们的总RNA和甲醛不对付？RP不够？
各位说说看这该如何是好？ |
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t*****z
发帖数: 1598 | 27 如题，有些啰嗦，诸位好心的看官如果课题紧张的话，只看题目就行啦。
我在做一个最最常规的把插入序列连接到载体里面的分子克隆实验。插入片段两边的酶
切位点是BamHI和XbaI，载体当中的酶切位点是BglII和KpnI。其中BamHI和BglII是匹配
的，可以连接，但是XbaI和KpnI不匹配。但是我为了赶时间，打算强行连接了。我注意
到KpnI是平端。我想先把XbaI用Klenow片段修平了，再连接到KpnI的平端上去。我的具
体实验设计如下：
把插入序列和载体用T4连接酶连接一段时间（连接BglII和BamHI末端），然后把T4连接
酶加热失活，然后加入Klenow片段（他们的缓冲液相互兼容），反应一段时间（把XbaI
末端补平），加热失活，再加入T4连接酶，反应更长的时间（把两个平端相连），最后
转化。
这个方案不知可行否？成功率大不大呢？可以做什么样的改进呢？
另外我对T4连接酶的效率比较好奇。以前读书的时候，都是连接过夜，至不济也要连接
四个小时。可是现在的T4连接酶的说明书上，都只要五分钟十分钟的，是现在的酶果真
都那么强吗？各位平时做连接都连接多久呢？
谢谢各位！ |
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m*n
发帖数: 695 | 28 玻片置柠檬酸缓冲液中，微波炉先大火到沸腾然后小火维持将沸不沸的水平十分钟，自
然冷却 |
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m*********s
发帖数: 1188 | 29 这个填柱子的难点是什么啊? 慢慢加, 保证没气泡, 柱子均匀, 保证足够多的缓冲液先
洗洗?
还是有别的实际问题?
我再把样品体积弄小点, 整个20uL体积再过柱子, 运气好的情况下, 该可以分开了吧?
求教...谢谢. |
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l********n
发帖数: 62 | 32 十块钱的一根Bt 试纸条，抓把种子磨碎，加上缓冲液，插上试纸条。是阴性还是阳性
，5分钟就出结
果。 |
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m*r
发帖数: 602 | 33 我没做过你这个实验，不过我用过P32，而且我觉得"老板娘"的方法并不会让你吃太多
放射。P32标记后绝大部分放射性都没在DNA或蛋白上，你电泳后让小分子同位素跑出胶
，缓冲液倒掉后胶上残余同位素应该很低了。如果你再用sheild，你身体受的辐射可能
比晒太阳受到的辐射还少。当然，手受的辐射要多得多，但这个剂量的辐射不会对手有
伤害。同位素实验主要的危险是同位素进入体内。至于拿P32胶穿堂而过，我没觉得有
什么问题，因为绝大多数胶都不怎么hot，再加上短时间接触，实际辐射不会比背景辐
射高多少。 |
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W****C
发帖数: 1937 | 34
24小时太久了。。。如果真是ｍｉｃｒｏＲＮＡ 要这么久才起作用， 甚至>10小时
， 我根本都不考虑它了。
其实我觉得ｍｉｃｒｏＲＮＡ是象缓冲液一样微调控的， 我要做的这个是ｅｍｅｒｇ
ｅｎｔ ｒｅｐｏｎｓｅ， 如果不是ｍｉｃｒｏＲＮＡ的作用， 我倒是省好多时间
去做。 |
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s******y
发帖数: 28562 | 35 有一个可能就是你那个全长的蛋白因为一些构象原因不能被pulldown,
反而是被切过的（或者alternatively splice) 的可以被pulldown.
如果你开始用的是native buffer pulldown 的话，不妨换成denaturing pulldown
condition
比方说用 2 %SDS 把细胞给煮了，然后加缓冲液稀释到0.2% SDS再pulldown,
这样一方面可以解决大部分构象原因，另外一方面也会减少背景
当然，如果你比较倒霉的话，这样也有可能导致你什么都pulldown 不下来。这个你得
试一试，就没有人敢给你保证了。 |
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Z******5
发帖数: 435 | 36 把菌液离心沉淀，加1/10~1/20的裂解缓冲液重悬，再加相应体积的5xloading buffer
，100度煮5分钟，12000转离心2分钟，搞定，取上清直接上样就行了。 |
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i*e
发帖数: 352 | 37 一开始我猜也有可能是跑胶缓冲液太久没换的关系
不过你说新引物也相对应有200bp的诡异条带
难不成上样/跑胶时候漂移了？ |
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t*****z
发帖数: 1598 | 38 我抽的一些质粒，尺寸在15kb以上，把它们放到一般的琼脂糖电泳（0.8-1%）上去跑，
跑出来的结果，往往不是常见的开环和超螺旋的样子，而是几条带，目前还没有找到这
几条带的分布、亮度、出现频率和电泳时间、电压、胶浓度、上样缓冲液、上样量等等
之间的关系。看上去就好像质粒自己断裂成小片段了的样子。但是酶切鉴定，却没有杂
带，说明质粒是完整的。QIAGEN的手册上说，对于像BAC这么大的质粒，开环的会跑得
比超螺旋还快。我的15kb也没到BAC的程度，难道发生了同样的现象吗？
不知谁有类似经历的，分享下经验。多谢！ |
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d*******i
发帖数: 472 | 39 PCR产物刚刚跑出胶孔就不动了，但条带形态很好
1，把marker和样品点在一个孔里面，marker完全正常，样品还是异常
2, 所有primer组合都出问题了，出事之前都是用的好好的primer
3，公用药品缓冲液都没有动过 |
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C*********u
发帖数: 811 | 40 loading dye的问题吧
PCR产物刚刚跑出胶孔就不动了，但条带形态很好
1，把marker和样品点在一个孔里面，marker完全正常，样品还是异常
2, 所有primer组合都出问题了，出事之前都是用的好好的primer
3，公用药品缓冲液都没有动过 |
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s******y
发帖数: 28562 | 41 哦！原来你是这个意思啊！
那没有问题，就是注入的时候要小心产生泡泡
另外，如果你不明白我的意思的话，我的意思是上样环里不应该是空的，
而是一开始就应该在洗完之后注射进满满的缓冲液，所以反正你本来
就不是对一个空的上样环来注射的。明白我的意思了吧？ |
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b******3
发帖数: 377 | 42 用磷酸缓冲液会造成代谢物的leakage。但是不洗却会造成对代谢物分析的干扰。谢谢
！ |
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s*********t
发帖数: 600 | 43 可能是接触不良。电流300mA，你留意一下你的电压是多高？开始应该是90－100V，之
后逐渐下降到60V或者稍低。
三明治夹的紧不？膜和胶紧不？每铺一层，要用滚轴轻轻压一次。膜和胶贴的不紧也转
不过去。
缓冲液发热大不？如果太热（手伸进去感觉温或者烫）也转不好。要埋在冰里面或者加
上冰盒。
如果解决了，记得回来报告下啊。
题, |
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k****o
发帖数: 589 | 44 可是我用含甲醇缓冲液(20%)，硝基纤维素膜transfer，从未出问题 |
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t*****z
发帖数: 1598 | 45 谢谢各位的提议！这两天我又做了一系列实验，试图提高两边都是原始引物的情况的扩
增效率，同时也做了几组一边原始一边巢式的。我目前发现：延长失活初始时间没用（
我原先设想长时间高温可以破坏DNA末端的二级结构）；延长延伸时间没用；增加模板
量有用（条带变深了）；增加反应循环数没用；降低温度没用（用的温度都高于理论Tm
）；增加镁离子没用（反而增加非特异扩增），改变缓冲液的种类没用（比如用Cl和用
SO4的）。我打算试试直接纯化和切胶回收。
大家的提议，我会陆续试试看！ |
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s******y
发帖数: 28562 | 46 首先，没有任何证据说明你的做法有任何的不对，这种东西必须是防水的，
不然跑胶的时候缓冲液一早就把仪器泡坏了。把漂白剂滴在上面和用滤纸来
抹不应该有这么巨大决定性的差别。
你这个情况，很可能就是里面的紫外灯到了寿命尽头烧了而已，不巧碰到
正好是你在用而已。
我的建议是：把当时的情况如实向双方老板写一个说明，越快越好。在写
的时候不要主动把责任揽到你的身上，等仪器检查过之后再说。而且，即使
是你的责任，按理也应该是你的老板去赔相关零件，而不是你来赔。你对此
不应有任何心理压力。仪器损坏是使用时候必须预先考虑到的一个因素，
一般实验室也对此有专门的资金预留来应付这种情况的，所以这个不应该
由你来负责。
transilluminator，可以实时观看跑胶的情 |
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u*********1
发帖数: 2518 | 47 是人家commercial available的gel，是不需要任何什么缓冲液的，算是在一个solid
argarose gel里跑
所以说这个系统很fancy
我觉得这种fancy系统应该都没什么市场，很怀疑会不会有人来修 |
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s******y
发帖数: 28562 | 48 首先，没有任何证据说明你的做法有任何的不对，这种东西必须是防水的，
不然跑胶的时候缓冲液一早就把仪器泡坏了。把漂白剂滴在上面和用滤纸来
抹不应该有这么巨大决定性的差别。
你这个情况，很可能就是里面的紫外灯到了寿命尽头烧了而已，不巧碰到
正好是你在用而已。
我的建议是：把当时的情况如实向双方老板写一个说明，越快越好。在写
的时候不要主动把责任揽到你的身上，等仪器检查过之后再说。而且，即使
是你的责任，按理也应该是你的老板去赔相关零件，而不是你来赔。你对此
不应有任何心理压力。仪器损坏是使用时候必须预先考虑到的一个因素，
一般实验室也对此有专门的资金预留来应付这种情况的，所以这个不应该
由你来负责。
transilluminator，可以实时观看跑胶的情 |
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u*********1
发帖数: 2518 | 49 是人家commercial available的gel，是不需要任何什么缓冲液的，算是在一个solid
argarose gel里跑
所以说这个系统很fancy
我觉得这种fancy系统应该都没什么市场，很怀疑会不会有人来修 |
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g*********5
发帖数: 2533 | 50 agree，shelf time about 1 year, 并且有时候有promotion，买几盒胶送gel box.
就是贵些 （about 14dollar one minigel）
不过midi gel 价钱只比mini贵一点点，所以我经常跑midi的（20个或者26个wells）
去年底我买了6盒midi胶送了个gel box
前段时间有个99刀的promotion，送一盒胶，一个gel box，一瓶缓冲液，antioxidant
结果我们实验室每个人都买了一套：） |
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