T**********t
发帖数: 1604 | 1 我能想象的是增加细胞对文库的ratio，比方说你的文库里总共有100,000个copy，你就
用100，000，000个细胞来转这个文库。因为文库被充分稀释，那么每个细胞能够take
in的DNA不会超过两个。 |
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g*********5
发帖数: 2533 | 2 加抗生素几天后细胞大量死亡，如何分离死细胞和活细胞？
谢谢。 |
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s******y
发帖数: 28562 | 3 听起来应该是一个包含着荧光分子的东西先渗透到细胞里面去，
这个即使可以用在活细胞上，对细胞也不好。而且背景肯定很大 |
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s**e
发帖数: 1523 | 4 老板让我找一个比较universal的secretory signal sequence用来表达一个蛋白（其实是
truncated的，它的细胞外的部分），然后看它在ECM里面增高之后对细胞的影响。我找
了半天都是细
菌、酵母、insect cell之类的表达比较多，直接用人类细胞表达的很少，有具体
signal
sequence的就根本没找到了。我是刚换了工作，所以对这个领域不是很熟悉，查了
pubmed上的文献，
都是蛋白自带的signal sequence，没有人工进行表达的。请大家给我指点指点，或者
给推荐个文章
看看吧！谢谢了！ |
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j****i
发帖数: 6 | 5 如果那位学者可以提供下列生物试剂材料，请和我们联系
1）杂交瘤细胞
2）MAMMALIAN细胞表达质粒（可用于建立Stable cell lines)
3）Adenovirues OR Lentiviral constructs
4) Any other useful cell based assays
谢谢！
Andrew
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n**********s
发帖数: 228 | 6 就是这个纠结啊，一开始看到结果，直接就想到是copy number 的原因， 但是我觉得
用上面那位同学的解释似乎更合理些，heterozygous的细胞，表达GFP那条allele是随
机的，因此GFP positive的细胞数目有个变化范围。
用copy number来解释，感觉不太有说服力，我觉得是不是平均单个细胞的GFP荧光强度
总体来说，homo比heterozygous平均强一些，用这个来解释更合理些？
是直接的显微镜下拍摄照片进行的荧光计数，设定个阈值，高于的就算阳性，因为这个
实验相当于验证这个敲入模型的准确性，所以才做的一个相当于“对照”性质的实验。 |
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l**********n
发帖数: 240 | 7 细胞表达GFP和shRNA，现在想用细胞免疫染色看靶蛋白水平是否下降了。
要用的二抗发光和GFP重叠。我怀疑这样行不通。
但老板告诉我，细胞固定透膜（用福尔马林和TRITON）过程中GFP被破坏了，不会影响
后面的immunumicroscropy 观察。
请问老板说的对吗？谢谢！ |
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s******r
发帖数: 2876 | 8 对吧，GFP很容易被甲醇，乙醇破坏。
细胞表达GFP和shRNA，现在想用细胞免疫染色看靶蛋白水平是否下降了。
要用的二抗发光和GFP重叠。我怀疑这样行不通。
但老板告诉我，细胞固定透膜（用福尔马林和TRITON）过程中GFP被破坏了，不会影响
后面的immunumicroscropy 观察。
请问老板说的对吗？谢谢！ |
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S***a
发帖数: 257 | 9 我的理解是TLR4应该在cellular surface, recognize extracellular ligand,比如说
LPS.
但是看到很多篇drug delivery的文章，都是把MPLA (一种TLR4 ligand)包在纳米颗粒
里面，然后和siRNA/antigen一起被内吞进入树突状细胞内部。那这些MPLA又如何能接
触到细胞表面的TLR4呢？难道这些MPLA也可以像antigen一样被MHC分子递呈到细胞表面？
非常困扰，请免疫高人指点，谢谢！ |
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m********8
发帖数: 314 | 10 看到这篇文献的报道，似乎活体内肿瘤细胞和正常细胞吸收不同化学物质的功能差别可
能很大。既然如此，在原理上，对肿瘤的诊断并不是医学上的难点？
Clin Cancer Res. 2010 May 15; 16(10): 2833.
Near IR heptamethine cyanine dye-mediated cancer imaging.
Fig1. Active uptake of hepatamethine cyanine dyes by human cancer cells but
not normal cells in cultureClin Cancer Res. 2010 May 15; 16(10): 2833. |
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t*********5
发帖数: 2 | 11 生化与细胞所在DNA去甲基化机制研究中获得重要进展：发现一种新的修饰碱基
2011-08-08 10:02:00 | 来源： | 【大 中 小】【打印】【关闭】
在高等生物的基因组DNA中除含有腺嘌呤(A)、鸟嘌呤(G)、胞嘧啶(C)和胸腺嘧啶(T)四
种常见的碱基形式外，还含有胞嘧啶的修饰形式：5-甲基胞嘧啶（5mC），被称为第5种
碱基。而且它可以进一步被氧化为5-羟甲基胞嘧啶（5hmC），也被称为第6碱基。这些
修饰形式在表观调控中都具有重要的作用，但它们如何被可逆转变为胞嘧啶(C)还不清
楚。中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所的工作证明，DNA中
的5mC和5hmC都可以被Tet家族的双加氧酶进一步氧化为第7种碱基：5-羧基胞嘧啶（
5caC）；此外，胸腺嘧啶DNA糖基化酶（TDG）可以特异性地识别这一新的碱基修饰形式
，并将其从基因组中切除。2011年8月4日，《Science》杂志在线发表了这项关于DNA去
甲基化机制的研究发现。这项研究由徐国良、李林、丁建平实验室及中科院药物所等单
位合作完成，副研究员贺宇飞、博士后李滨忠等承担了主要工作。
动植物生长... 阅读全帖 |
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s******y
发帖数: 28562 | 12 嗯，我赞成你的说法。
另外一个方面是，细胞疗法比放疗化疗特异性好，但是这个既可以是优点也可以是缺点。
在CCL这种血癌里，因为肯定就是某种细胞，所以marker 好找。不会误伤其他细胞。
但是固体瘤一方面是marker 不好找，而且就算几个marker 合起来一起用，也顶多
杀他个９０％的癌细胞，剩下的很快就复发了，所以很难杀干净。 |
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s*********y
发帖数: 292 | 13 见过有人把细胞装在1.5ml的管子里，不加DMSO，然后塞在衬衣上面那个口袋，贴身坐
飞机回国，回到目的地后找个实验室马上养上。如果细胞不是那种很娇气的是能够养活
的。关键是要把管子灌满液体，要不液体晃来晃去会把细胞弄死。 |
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b**********8
发帖数: 349 | 14
多谢回复，能否提供您关于serial dilution的更详细的信息，比如什么时候dilution
，转染后第二天？还是如我帖子中描述的挑到阳性colony后再dilution？
另外，重新用高浓度的G418后再次得到高表达的阳性细胞，请问这个细胞和之前浓度降低一半表达量也降低一半的细胞是同一批吗？ |
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e********r
发帖数: 353 | 15 美国公司寻找中国大陆抗体，蛋白质合成，细胞培养等供货方。
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b*********g
发帖数: 19 | 16 如果拧紧细胞培养瓶瓶盖，不让里面空气与培养箱中的空气交换24 hours，这种状态给
细胞造成的是哪种stress？？
缺氧？
积聚的碱性pH? (因为二氧化碳进不去)
细胞自己代谢过程中产生的有害气体？ |
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b*********g
发帖数: 19 | 17 如果拧紧细胞培养瓶瓶盖，不让里面空气与培养箱中的空气交换24 hours，这种状态给
细胞造成的是哪种stress？？
缺氧？
积聚的碱性pH? (因为二氧化碳进不去)
细胞自己代谢过程中产生的有害气体？ |
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O**U
发帖数: 72 | 18 ambion的cells to cDNA还行
不过不如直接用水+RNaseOUT把细胞破了来得快
反正我从来都是直接加水破细胞，用clonetech的EcoDRY逆转录，简单快捷
10个细胞以下很稳定
不.我不是做
System |
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i*****g
发帖数: 11893 | 19 Invitrogen 的Countess 计数器。挺好用的，老死机是因为里面内存满了，要怎么怎么
个清空
业界最标准的细胞计数是德国CASY，其次是beckman
碎片，靠设定参数来区分的，
不过，真正复杂的血系细胞群落，很多细胞的混杂，就是CASY也不好用 |
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s******y
发帖数: 28562 | 20 一般方法里，我用过的是lipofectamine with Plus reagent 比较好，能达到
２０％而且细胞不容易死。
效率比较高的还有另外几个，但是细胞死得很厉害，你要是无所谓的话明天我给你
找找看是哪个厂家的。
病毒转染一般能达到７０％以上 （要注意细胞浓度，最好在５０％～７５％
confluence) |
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s******y
发帖数: 28562 | 21 一般方法里，我用过的是lipofectamine with Plus reagent 比较好，能达到
２０％而且细胞不容易死。
效率比较高的还有另外几个，但是细胞死得很厉害，你要是无所谓的话明天我给你
找找看是哪个厂家的。
病毒转染一般能达到７０％以上 （要注意细胞浓度，最好在５０％～７５％
confluence) |
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k***g
发帖数: 4904 | 22 LB Agar培养E.coli，为啥我每次从上面刮下来一层后，离心后发现混有一些明显不是
细胞的东西？后来用Celltracker Orange标记时那种东西不会有颜色，可是离心总是和
细胞一起沉下来，这是什么东西啊，怎么去掉啊？谢谢啦！ |
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b***h
发帖数: 26 | 23 我讨了一些别人的MSC细胞， 换不同培养基几天后，大量细胞产生泡状结构 （见图).
我很少见到这样的东西， 觉得用来做表型不错，但找不到下手的地方。 先不管培养基
差异，我很感兴趣这些Vacuole是什么？什么常见机制会导致它们的产生？用什么方法
可以抑制它们？有那些常见细胞有这样的结构呢？
有包子奖励！！！ |
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n******w
发帖数: 70 | 24 我知道的两种情况会出现这样的结构，
1，衰老的细胞。细胞长得过满也有可能出现。
2，分化为pre脂肪细胞。
鉴别方法，oil red染色
. |
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D***a
发帖数: 516 | 25 希望找一个能像HEK293一样容易转，但细胞个头要大，能在玻片上铺得开的。
另外问个问题，transfection效率跟细胞的什么性质有关？为什么有的细胞好转，有的
难转？ |
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i*****g
发帖数: 11893 | 26 以前隔壁一个做iPS的实验室，他们就为这个问题焦头烂额，杀来杀去也搞不定，还买
了几种mycoplasma的药。你想想，从1个细胞最后长到10^7 以上做分析，有mycoplasma
肯定完蛋了
所以，我知道这个事情。
他们后来会议时候问美国这边，据说办法就是，不用任何pen-strep。没有pen-strep，
细胞长得非常快，你一旦发现细胞长慢了，又没有细菌污染，必然就是mycoplasma污染了
污染就扔掉 |
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x****n
发帖数: 1454 | 27 买个二手的也正在考虑.
但是今天询问了一下几个小时开外的一个大学, 了解到如果想做人细胞, 实验室必须通
过认证, 请问达到认证要求难吗?
我们很想和有经验的实验室合作, 但是我们想用提取物加到细胞培养液里, 而且提取物
不是很稳定, 所以想就近做细胞实验, 如果能通过认证的话, 还是打算试试. |
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b****r
发帖数: 17995 | 28 那也得看什么细胞，分裂慢代谢慢的原代细胞可能就可以活很久，不停分裂的细胞可能
一天就全死光光 |
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b****r
发帖数: 17995 | 29 那也得看什么细胞，分裂慢代谢慢的原代细胞可能就可以活很久，不停分裂的细胞可能
一天就全死光光 |
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D*a
发帖数: 6830 | 30 古代的单细胞不是现代的单细胞。
古代的单细胞演化，有些演化成了多细胞，有些演化成了更适应特殊环境的单细胞（特
殊环境例如池塘，火山，树林，etc...），这些单细胞并不是终止了演化过程，而是从
古代到现代一直在演化，只是演化方向不是朝着多细胞的方向。
生物演化是朝着适应环境的方向，并不是朝着有智能多细胞的方向 （所谓从“低等到
高等”）。
另外并不是更“高级”的生物才更适应环境，比如细菌很很难被全体杀死，很容易大面
积传播（当然人现在也知道怎么抵抗了），但是其他物种就不行。 |
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l*******c
发帖数: 478 | 31 请问：293细胞是T细胞的一种吗？是悬浮生长还是贴壁的？
谢谢！ |
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D***a
发帖数: 516 | 32 在癌细胞里用retrovirus过表达了一个蛋白，之后免疫荧光检测这个蛋白，看见从细胞
里伸出如图的丝状东西。这是细胞的某种特殊结构吗还是因为过量表达导致细胞疯掉了
？ |
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F*Q
发帖数: 3259 | 33 本来需要serum的细胞如果在培养液里去掉serum，就会导致细胞的starvation，细胞的
starvation可能会触发某些cellular process。所以可能会使你的试验得到不一样的结
果。 |
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s******y
发帖数: 28562 | 34 在该文章中，研究者们使用的是从小鼠里取出来的未完全发育的视觉细胞来移植
到夜盲的成年鼠中。
那些细胞能够正确地找到发育的位置并能正确地和大脑视觉中枢建立起神经联系。
经受处理的老鼠中有近一半得到了rescue.
该实验对退行性视觉丧失的治疗带来了一丝曙光。
虽然在实验中使用的是已经部分分化的体内细胞，但是研究者们下一步会试验使用干细
胞。
injected |
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h****n
发帖数: 2552 | 35 他的某些细胞是AA，某些细胞是aa，某些细胞是Aa
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有这回事? |
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y****u
发帖数: 74 | 36 全骨髓细胞中细胞种类和大小分布不均，很难用血球计数板计数。我们一般用CASY
cell counter, 它可以根据细胞大小分类计数。
hemocytometer |
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b********h
发帖数: 348 | 37 我们实验室最近用B6 WT小鼠的脾脏，用1077 ficoill-pague PLUS处理取单层细胞层后
做flow cytometry发现：
处理前T细胞大约30%，B大约50%，
处理后T细胞大约55%，B大约35%
重复几次都是这样，本来以为T B会同等比例被富集，这个结果对吗？如果不对有可能
是什么原因？ |
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b*****o
发帖数: 150 | 38 用brdu PI 分析细胞周期分布
如果看到S期的细胞多了 是不是就是说细胞分裂更快？ |
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p********e
发帖数: 61 | 39 有人做过从胰腺导管细胞（人或鼠，最好是人）体外加点
细胞因子之类的让它变成所谓的ILC吗（胰岛样细胞簇）？文献上的Protocol我们自己
能查到，想向亲自实践过的大侠们请教一二。 |
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A***g
发帖数: 191 | 40 从ATCC订的细胞，来了以后，完全按照它的protocol养，有很多悬浮细胞，每天都得换
培养基，两天不换，就有一半以上开始悬浮，培养基变浑浊。并且不管怎么天天换培养
基，也永远都只能长到30-40%满的样子。
给ATCC技术支持发邮件，来来回回N久，说可以给Replace，但是要我们自己付邮费，那
就付呗。并强调希望他们能自己养着试试，好了再给我寄。
结果又来一管同一批号的，千小心万小心的伺候着，还是跟上次一样。
版上有没有人养过这个细胞呀，用的什么培养基，有没有什么诀窍？ |
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B****w
发帖数: 48 | 41 上flowcytometry了，可是很多人说不是免疫细胞也可以表达他们的CD marker。人家不
相信我得到的细胞是免疫细胞。 |
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w***a
发帖数: 432 | 42 还是先想想不解决这个问题能不能解决你需要回答的问题吧。
我知道的情况是，retrovirus和细胞周期有关，静息期的细胞不容易被感染。而
lentivirus不受细胞周期相关。我不知道是不是和你得到的结果有关系。 |
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h******o
发帖数: 9 | 43 导师给我的课题是师兄以前做了个开头的，但是他做的时候实验室细胞都有支原体感染
，导师也没有先把支原体问题解决了就继续让大家做下去，不知这样的结果可靠吗？
另外，请问大家你们实验室如果细胞有支原体感染，导师或老板会不顾支原体感染继续
要大家做实验吗？要知道，如果实验室细胞大部分被感染就需要花很多的时间和经历来
处理，这要耽误不少实验的进度。这样的导师是不是不严谨？ |
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m*****y
发帖数: 420 | 44 我就一直都没用G418筛选出来过，筛的过程中细胞形态就变了，原来的细胞可以紧紧贴
在plate上，后来细胞变了而且很容易detach.... G418筛选该怎么弄啊，实验室没人用
这个，没人请教。 |
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w********r
发帖数: 1431 | 45 当然可以啊。毒性大可以优化一下转染条件。比如细胞密度，转染前细胞贴壁时间（3-
5小时就可以，有些贴壁细胞太久之后效率会变低）。此外lipo RNAiMAX或者LTX毒性比
2000要小。 |
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t**l
发帖数: 109 | 46 为什么cancer cell的heat shock protein水平高，普通细胞低？
难道heat shock protein 不是好东西吗？还是搞不明白。如果普通细胞over express
一些HSP，会怎么样？
为什么细胞只有在stress的时候才会出现HSP表达高，一直高不行吗？
还有一个问题：那为什么CANCER CELL 很怕HSP inhibitors?
如果用HSP inhibitor,普通CELL是不是也跟着一起死？这种HSP inhibitor 抗癌药物有
什么特效和好处呢？还是说普通CELL，不是那么害怕HSP inhibitor? |
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O*********e
发帖数: 79 | 47 Mammalian cell culture, 要把细胞冻起来，当时有点事，就把加了DMSO的细胞放在－
２０度冰箱里，准备一会儿忙完了就转到－８０，哪知道忙着忙着就忘记了，等想起来
就是两天以后了。请问，这个细胞还能要吗？谢谢！ |
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s*****g
发帖数: 7857 | 48 这个是Control well的，就是只是change 了media.
--那你的treat换了没有?
我一般是提前一天把细胞设置好,第二天一早加药treat.根本不换media了.不过我的多
是悬浮细胞.
有可能换MEDIA把贴壁细胞给冲悬浮了? |
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t******k
发帖数: 599 | 49 因为用的细胞是从要先从组织里分离出来，大概15只老鼠才能有30x10e5个细胞，不知
道够不够做chip呢？我看到的protocol里要求的细胞量巨大。。。 |
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h*****G
发帖数: 113 | 50 小弟不才，最近需要从培养的beta细胞提取全部胰岛素，测胰岛素的总含量。看了很多
paper，都是用ethanol/HCl溶液提取，但是具体过程都语焉不详。有的是从组织中提取
，把组织放在ethanol/ HCl中研磨，然后离心取上清。现在我是培养皿的细胞，也需要
用trypsin把细胞detach，然后放buffer里homogenize吗？还是直接把buffer加到培养
孔了，然后取上清就可以了？希望有经验的达人不吝指教，如果有详细的protocol就更
好了。
小弟先谢了。 |
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