j******i
发帖数: 939 | 1 为啥会不work呢 不就是酶和底物吗 只要条件合适体外也能cut DNA啊 |
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e****s
发帖数: 1125 | 2 有时候要考虑检测灵敏度的问题。
另外个人认为，根据LZ给的描述，基本没人能得出有意义的结论。
30 uM无效果，60uM完全抑制，给我的感觉有可能是检测方法不是特别灵敏，信躁比较
低？
“增加底物浓度，反应降为0。”这个怎么理解？在60uM 抑制剂的条件下？ |
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p*********9
发帖数: 14 | 3 批次之间的差异不太清楚，我每次都会加一个没有Lacz的样品做negative control，所
以觉得还好 。后来好像还染过 skin，也没问题 。如果不用paraffin可以用frozen的
然后直接加底物显色吧 |
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D*a
发帖数: 6830 | 4 我看它网上就推荐别的所以才觉得不太放心。
请问你做过frozen的直接加底物显色这种么？ |
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p*********9
发帖数: 14 | 5 frozen的做过几次，显色也挺明显的。不过不能用收下后直接freeze的样品做，需要先
固定一两小时，然后用蔗糖溶液平衡过夜，然后再冰冻切片加底物显色 |
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n**e
发帖数: 2026 | 6 正确的提问方式是不是『为什么小儿口服的总剂量比成人差了那么多？』，而应该是为
啥小儿口服和注射剂量一样，而成人口服量是注射量的5倍。
还是回到生物利用度的问题。生物利用度体现了在达到相当血药浓度的情况下，口服量
与静脉注射量的差异。口服生物利用度低于静脉的原因只有两个，一个是胃肠吸收，另
一个就是肝脏的首渡效应。口服药必须先通过门静脉系统，药物在进入血液循环之前先
经过肝脏的首轮灭活。现在我们知道，青蒿素口服吸收是没有问题的。不可能假设小儿
的吸收比成人高5倍。所以结论就是小儿肝脏对青蒿素的灭活能力比成人差。首度效应
基本不存在。这是很有可能的。参与药物灭活的酶大多为诱导酶，由底物的诱导而合成
。成人接触毒性物质多，已经有量的积累。
那个“打酱油的”很明显知道这里面的道理。故意掩盖小儿口服剂量与注射剂量相同的
事实。这种低级造假手段，在尼罗河面前还是最好收起来。 |
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M*******C
发帖数: 183 | 7 以前我们用ECF底物，strip用0.2N NaOH 就好了。
现在ECF 买不着了，改用ECL plus，Thermo Fisher/Pierce （32132）的，发现用NaOH
没法strip了，第一次blot的带仍然在那里。 看了ECLplus 的说明书，他们叫用
Thermo Scientific™Restore™ Western Blot Stripping Buffer (
Product No. 21059) 或者Restore Plus Western Blot Stripping Buffer (Product
No. 46430). ， 价格 500ml/$130, 太贵了，strip 一张膜得10ml 吧，500ml 50张膜。
不知道成分是什么，想自己配点，求各位指点！谢谢 |
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z*****h
发帖数: 172 | 8 我觉得扫描的resolution都比较低。我还是喜欢胶片的。用ECL的好处是可以用比较强
的底物，比如femto，弱的条带都能看到。相比而言Oddsey荧光灵敏度就不那么高了。 |
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z*****h
发帖数: 172 | 9 我觉得扫描的resolution都比较低。我还是喜欢胶片的。用ECL的好处是可以用比较强
的底物，比如femto，弱的条带都能看到。相比而言Oddsey荧光灵敏度就不那么高了。 |
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T****i
发帖数: 15191 | 10 是她自己放到博客上的，怪不了别人。看来您是做结构的。
我倒对做结构没意见。结构挺有用，但用处也有限，只是让人对机制理解更好，有时对
筛小分子有些实际用途，大多数时候就是做完了就放那，增加一个reference。CNS喜欢
发结构，就是因为结构引用率高。只要做哪个蛋白，如果能找到结构，肯定要引用一下
。但大多数时候也就仅此而已，到此止步了。像施院士那样把一个结构包装成那样宣传
，有些让人不忍直视。尤其大家都知道无论是BACE还是gamma secretase，每个都那么
多底物，都不是好的drug target，BACE的抑制剂的trial都失败了。要找也要找BACE或
gamma secretase 结合的蛋白，特异性影响A beta形成的才行。所以那个gamma
secretase应要包装成治疗老年痴呆重大突破，就是无耻了。 |
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l***s
发帖数: 841 | 11 你动手够快的。我们实验室还在克隆Ago。。。ssDNA应该比质粒好转，共用质粒
protocol就行了。听你这么说，情况不乐观啊。NLS signal加了吗？韩自己也说目前的
系统不完善，建议从切GPFplasmid底物开始。看了还有很多工作要做。但希望不是个大
泡泡。 |
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r********s
发帖数: 149 | 12 如果他们号称在293T里可以切endogenous gene, why bother using GFP plasmid?
[在 laghs (微小) 的大作中提到：]
:你动手够快的。我们实验室还在克隆Ago。。。ssDNA应该比质粒好转，共用质粒
:protocol就行了。听你这么说，情况不乐观啊。NLS signal加了吗？韩自己也说目前
的系统不完善，建议从切GPFplasmid底物开始。看了还有很多工作要做。但希望不是个
大泡泡。 |
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r********s
发帖数: 149 | 13 如果他们号称在293T里可以切endogenous gene, why bother using GFP plasmid?
[在 laghs (微小) 的大作中提到：]
:你动手够快的。我们实验室还在克隆Ago。。。ssDNA应该比质粒好转，共用质粒
:protocol就行了。听你这么说，情况不乐观啊。NLS signal加了吗？韩自己也说目前
的系统不完善，建议从切GPFplasmid底物开始。看了还有很多工作要做。但希望不是个
大泡泡。 |
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r********s
发帖数: 149 | 14 如果他们号称在293T里可以切endogenous gene, why bother using GFP plasmid?
[在 laghs (微小) 的大作中提到：]
:你动手够快的。我们实验室还在克隆Ago。。。ssDNA应该比质粒好转，共用质粒
:protocol就行了。听你这么说，情况不乐观啊。NLS signal加了吗？韩自己也说目前
的系统不完善，建议从切GPFplasmid底物开始。看了还有很多工作要做。但希望不是个
大泡泡。 |
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s********n
发帖数: 248 | 15 请问大家有哪些荧光分子可以标记细胞，然后把标记的细胞打入老鼠体内，然后可以直
接做whole mouse imaging的？目的是想看清楚细胞进入体内以后的去向和各个组织器
官的分布。
我知道有人用luciferase，但是imaging之前需要再打luciferin之类的底物吗？
除了luciferase还有其他的可以用吗？
在此先谢过大家了！ |
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s******y
发帖数: 28562 | 16 如果我没有搞错的话，你是要对整个老鼠进行活体观察吧？对于这种应用，除非有特殊
需要（比方说需要达到单细胞分辨率），否则用luciferase是最简单也最有效的方法。
在imaging之前的确需要打一针底物，但是这个很容易。一般打到皮下即可，老鼠对此
忍耐度比较高。发出来的光很容易被观察到（因为背景低），在绝大部分组织都没有问
题。但是如果细胞跑进了骨头可能会有点麻烦。
如果用荧光蛋白来做活体标记，普通的绿色和红色荧光蛋白都不合适，因为激发光不能
透入体内，即使用双光子显微镜也不行（一般双光子显微镜最多就一到两个毫米的穿透
深度，不能穿透整个老鼠）。上面有人提到远红荧光蛋白，我对此没有直接经验，但是
我也不觉得对于这个蛋白的激发光可以穿透整个老鼠（即使用双光子应该也不行）。而
且荧光蛋白的观察还有其他各种各样的限制，所以不到万不得已不要用。
如果你是想把老鼠杀了然后把组织切了然后再作荧光的话，那么倒是随便你爱用啥就用
啥。 |
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s******y
发帖数: 28562 | 17
这个目前不好下结论。但是如果最后发现原因真的在这里的话，那么有一种可能性是那
些没有磷酸化的oligo 起的是非竞争性的抑制作用，比方说一种可能性就是可能会把催
化位点给卡住让正常的底物无法结合上去。 |
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N****n
发帖数: 294 | 18 你说的也对。
不过我关心的是Ca2+一般不在DNA/RNA酶里起作用。Mn2+有可能改变底物专一性 |
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发帖数: 1 | 19 初次接触氧化还原一类的题目。现在要用tert-Butyl hydroperoxide 做氧化刺激剂，
如果用高浓度短时间刺激 （看文献是500uM 30min）之后用PBS洗掉，这个oxidation
的状态能维持多久？
我是希望这个oxidation状态能维持时间长一些，然后看我的酶分子是不是被氧化了？
并且这种氧化是不是改变了酶底物的状态和多少。所以希望酶的氧化状态能保持久一些
，从而容易观察到和对照的区别。
tert-Butyl hydroperoxide 低浓度长时间的刺激文献里没看到需要摸索条件。 |
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j*****y
发帖数: 94 | 20 To Yolanda,
谢谢你提的这些问题，我想我可能没有仔细考虑过以后的研究。只是我现在做的东西和
实际相差太远，完全是为了发文章而做研究，knock-out 这个酶的gene 这个生物也能
存活，而且根本不知道体内这个酶的底物是什么，现在做的研究用的是体外的
substrate，不是optimal的；结晶对蛋白位点的预测和酶assay很不一致，非常
frustrating。我对chemE的了解知之甚少，只是厌倦了生物这种脱离实际的研究，花这
么多时间和精力去搞一个non-essential的东西。以后不愿意去做博士后，所以想转到
工科，学习新的技术手段，希望毕业后能在公司找到工作。我看到这个版上大家的讨论
，似乎chemE里做的和生物相关的不是很好找工作，而只有做那些石油，流体啊什么的
才能更迎合市场的需要。不知道我的理解对不对，也不知道我这样半路出家如果完全脱
离生物去做真正化工的东西，是不是很难？
To Jiudi，
为什么会感到失望呢？ |
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j*********5
发帖数: 6221 | 21 Pd0也许会被氧化，但是Pd2应该好很多，不会变质那么快，重新考虑保护一下底物
aniline的氨基试试，如果是催化剂问题，大不了产率低，不会fail，
PPh3 |
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t*******e
发帖数: 119 | 22 两个都是以TAG（triacylglycerol）为底物。两个酶的英文分别是TAG lipase和TAG
hydrolase。试问他们的催化产物是否不同。 |
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a******w
发帖数: 898 | 23 产物中有一个末端双键，两个氢在5ppm附近
做过类似化合物，两个氢积分分别为1，正确的，
这次我把底物中的一个谜保护基换成了乙酰保护基基，然后发现这次产物的末端双键的
氢积分分别变成0.5左右了，少了一半。请问这种积分减少的情况可能么？或者，这次
反应最后产物不对？ |
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e****2
发帖数: 2723 | 24 根据它的REDOX 性质，首先一般是电子的TRANSFER， 前提是底物有容易失去电子的地
方，一般产物是夺氢产物， DDQ是这个体系最强的氧化剂。一个中国教授最近作这个不错。
Zhang, Y.
参考
Becker, H. In The Chemistry of Quinoid Compounds; Patai, S., Ed.; Wiley: New York, 1974; p 335. (b) Becker, H.; Turner, A. B. In The Chemistry of Quinoid Compounds; Patai, S., Rappoport, Z., Ed.; Wiley: New York, 1988; Vol. II, p 1351. (c) Xu, Y.-C.; Kohlman, D. T.; Liang, S. X.; Erikkson, C. Org. Lett. 1999, 1, 1599-1602. (d) Ying, B.-P.; Trogden, B. G.; Kohlman, D. T.; Liang, S. X.; Xu, Y.-C. |
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B****i
发帖数: 107 | 25 我刚看到这篇文章， 说实话没觉得怎么样
主要是因为只有一个底物， 而且完全没有机理研究
没想到上了C&E news |
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G***O
发帖数: 839 | 26 带的本科试验有一个类似底物（endo）水解的反应，问学生可能的副产物是什么？
答案是内戊酯。
不知道楼主的反应物是exo 还是endo的？
大牛们请继续 |
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n*****g
发帖数: 4117 | 27 ☆─────────────────────────────────────☆
choubaoben (fancy) 于 (Wed May 20 00:30:45 2009) 提到:
很简单的底物olefin，dichloromethane做溶剂，-78oC 通ozone gas，（通的稍微有点
久，原料消耗完，又通了半个小时），然后加 dimethyl sulfide。
后来分离的结果有aldehyede 生成，但是还有另外一个点，在5.4 ppm 和 5.1 ppm附近
有峰，但肯定不是原料。
那位大虾对ozonolysis的副产物有概念的呢？
（尽管我很穷，不过还是尽力给包子），谢谢大家。
☆─────────────────────────────────────☆
choubaoben (fancy) 于 (Wed May 20 00:52:03 2009) 提到:
没人回答？ 顶一下
☆─────────────────────────────────────☆
echfour (h4) 于 (Wed May 20 01:23:18 2009) |
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b******n
发帖数: 4225 | 28 谢谢你的帮助和指导
这是我想要的思路
我想检测全细胞裂解液中的某个酶活
然后过HPLC柱子来检测底物的产生
反应一段时间之后可以终止反应，
然后沉淀蛋白
但是对于什么方法沉淀比较好没把握
谢谢啦
.
your
column. |
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s*******h
发帖数: 3731 | 29 老娘踢你个鸡飞蛋打。。。居然又在这里寒碜超工。。。。
俺硕士还是肄业，怎么懂得如此高深的东东。。。
不过放了半天狗，查了半天金镐头数据库。。。
超工发现：
这个体系不能用DMAc啊。。。
1. DMAc稳定phenolate啊。。solvation shell大啊。。反应就慢啊。。。
2. DMAc稳定反应中间体啊。。不容易进行消去Cl或者phenolate
3. phenolate也是好的离去集团啊。。
当年俺用一个malonate的酚酯的底物，加碱马上消去形成ketene了。。
综上所述啊，不反应不奇怪啊。。。 |
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e****2
发帖数: 2723 | 30 现在大家都是真的吧
只是筛选100个底物
保留20个最好EE值的
然后发表之
根本就是一妥实
很难叫有机方法学,更像是筛选学 |
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s*******h
发帖数: 3731 | 31 不负责任的说一句，这个底物的hoffman会死的非常难看。。。 |
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s*****5
发帖数: 70 | 32 我觉得雷爱文很牛。不光说数量，不知道你们读过他的jacs没有。他不是想有些教授只
是做了个新东西，扩展底物等。他还研究反应机理，算研究的比较深入了。以他现在的
水平，如果持续5-10年，绝对院士级别。
另外，还有北大的余志祥，也做得比较深入。施章杰也很好，可是就是觉得研究的不是
很深入。好idea发了不少好文章，但是没有更深入。中国真的很缺研究的更深入的教授
。这样才能成为世界一流。 |
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y****d
发帖数: 46 | 33 招聘岗位：特别研究员(副高级职称)
招聘条件
研究生学历,博士学位
身体健康，热爱科研工作，勤奋，富有责任心，具有良好团队合作精神；
在海外著名大学获得生物信息学、计算生物学、有机化学、微生物学或其他相关学科的
博士学位，且在海外著名大学或研究机构有相应的博士后研究工作经历或已获得相关职
位。
具有良好的英文阅读和写作能力。具有指导和培养硕士生研究工作的能力。
岗位职责
完成学校及学院规定的各项教学、科研、行政及服务社会等任务。
参加科学研究，参与课题申请、执行、项目开发、论文及专利写作等科研任务。
根据工作需要，指导本科生及研究生的课题设计、实验培训、论文写作及毕业答辩等工
作。
参与实验室团队建设和管理工作。
承担学院及团队负责人分配的其他教学科研及学科建设工作。
其他
研究方向：招聘人员将主要从事酶学与酶工程及相关领域工作，研究内容集中于利用多
种手段揭示酶分子的催化活性、热稳定性、底物选择性机制，并在此基础上应用蛋白质
工程技术构建具有良好应用潜力的人工进化酶及人工代谢通路；构建表达系统，开发具
有良好应用潜力的新型酶制剂。应聘人员可任选以下一个作为主攻方向： 1）蛋白质进
化 |
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a********m
发帖数: 201 | 34 看底物。如果时间比较短，没什么问题。要是时间很长的话，还是要注意，最好能分成
几次加。 |
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s*******h
发帖数: 3731 | 35 买来的LDA一般来说，用不了两次就挂了。。
自己做吧。。另外quench一下中间体看看拔氢拔的怎么样。。
如果回收的就是原料，估计就是拔氢不彻底或者是底物反应比较慢。。。 |
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w*******s
发帖数: 1644 | 36 你如果还有转成OTf的底物，试试HECK。应该比你试的内两种好上。
I。 |
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a********t
发帖数: 118 | 37 11-Step Enantioselective Synthesis of (-)-Lomaiviticin Aglycon
从简单的底物出发 合成出销魂的多环结构。。。 |
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a**********c
发帖数: 70 | 38 弱弱的问一下，
立体选择cis-（Z）> 90%以上的。
底物是8-9个碳的醛和10多个碳的三苯基磷溴盐。
有没有亲自做过的给一点点指点。。 |
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s*******h
发帖数: 3731 | 39 最简单是高温高压氢化。。。。一步到位。。。就怕你底物不稳定。。。 |
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C*******e
发帖数: 420 | 41 在做一个polymer的侧基改性实验, 反应条件完全一样,在室温下往反应底物里缓慢的滴
加改性剂,但结果差别很大.
绝大部分时候反应进行很短时间系统就不稳定了,有大块的沉淀生成, 搅拌停止, 实验
进行不下去了. 这时候改性剂只加了很少一部分,不超过1/3.
很少的时候反应能比较缓慢进行,系统一直处于比较uniform的状态, 最后比较浑浊,但
整个反应过程没有显著的大块沉淀. 改性剂能完全加完, 反应比较彻底.
我想要的是没有显著沉淀的结果, 但很难达到, 基本上是可遇而不可求.怎么能控制沉
淀还是不沉淀呢? 请有经验的同学指教! |
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j********1
发帖数: 628 | 42 这𠆤好象比较浪费，一大半Pt都沉积在反应器壁和sopport上了。而且如果是真
正的ALD的话，一大半Pt会被抽走，底物表面的coverage可能只是sub-mono layer, 多
搞几个循环做到几𠆤纳米的话，Pt precursor的利用率会很低的。
化。 |
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Z*****1
发帖数: 20 | 44 最近在做一个醇羟基的烷基化反应， 要用NaH拔氢。 底物中有芳香醛，所以试了用乙
二醇或硫醇保护。 但是每次醛基都脱保护。不知道大神有没有遇到过类似的情况或用
什么保护及比较好。 |
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Z*****1
发帖数: 20 | 45
话
底物用丙炔醇？可能醇上的质子酸性不够吧。能不能给个link？谢谢。 |
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b****n
发帖数: 379 | 46 我需要测的是底物是否和氧气反应，想知道反应后氧气含量有没有减少。所以，一开始
是有氧气存在的，如果用氧气试纸，一开始就是氧化的，等氧气减少后，颜色能变回来
吗？
另外，因为是密闭体系，所以不可能用蓝瓶实验；而且一般反应物都很少，只能用小
vial，所以用电极什么的很不方便。还能有什么方法吗？ |
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g****b
发帖数: 143 | 47 姐终于不做合成了。尼玛姐做个全合成虽说才十几步，但也是全合成呀。最后一步就做
了七十好几遍。产率都是过了柱子称出来，尼玛过就过，称就称，两个副产物还要过好
，称好。天然产物做完还要尼玛analogs,有完没完。谱图要干净，没错，咱既然做了就
要做好，尼玛溶剂搞干净，木有silicone,木有grease,都应该，还要走800兆，姐处理
核磁时这个紧张呀。每次做关键反应做关键核磁的时候都沐浴更衣焚香拜佛啊。
那啥蒸这个那个溶剂就不说了，你说你就砸那个难伺候呢，非得新鲜滴，借给老公炖个
汤都木有这么上心过啊。
那个偶氮啦，铊啦，硫啦，还有那些个人名反应就不说了，说多了都是泪。第一步备料
搞个上百克，3升的三颈瓶也不提了，都是泪。尼玛我爷爷的爹叫啥我都不晓得，砸要
记住上百个亲手做几十个人名反应呢！？
方法学姐也做啊！自己做个催化剂，开一排反应啊。不行就换啊，理论解释啊，模型啊
，终于有一个有门儿啦，各种修饰啊，HPLC出峰的时候姐都是双手合十呀有没有！！！
它对有的底物不work呀，再改进呀！再理论模型呀！反正最后都要work呀，要自圆其说
！反正不管你信不信，我都信了！！
姐现在终于不做... 阅读全帖 |
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F********y
发帖数: 7139 | 49 不做bench很多年了。可否考虑用2,4-dihydroxylbenzaldehyde做底物，nitration完了
之后分离出来3-nitro的那份，再和methyl iodide反应上甲基？ |
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j**********s
发帖数: 3 | 50 测试一个酶的抑制剂，３０uM 完全没有作用，６０uM完全抑制， 反应速度很低。而且
，增加底物浓度反应速度降为０。 这是什么抑制剂？如果是uncompetitive inhibitor
，lineweaver burk plot得不到平行线 |
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