l*r
发帖数: 79569 | 1 师傅明明是叫你，想溜没那么容易
你是说娜娜熬红了眼睛眼皮都耷拉出褶了么 |
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w****l
发帖数: 535 | 4 譬如是mouse brain之类的比较大的tissue
厚度10um左右 |
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w********r
发帖数: 1431 | 5 玻璃和刀片的位置要调好，
调好了切出来就是平直的，不会卷。
下刀的速度也要干脆利索。
无它，只能自己慢慢摸索 |
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w*********n
发帖数: 439 | 6 你右手摇的速度要和你左手拿镊子拉切出来的组织片的速度要一致
然后用热的玻璃片去粘组织片，不会卷的， |
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w*********n
发帖数: 439 | 7 你右手摇的速度要和你左手拿镊子拉切出来的组织片的速度要一致
然后用热的玻璃片去粘组织片，不会卷的， |
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D*a
发帖数: 6830 | 9 试试放液体里面，IHC or 染色完了再放玻璃里。这样IHC的效果还好。
具体液体不知 |
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h******y
发帖数: 351 | 10 冰冻组织切片的时候，对环境温度有一定要求。先问你一个问题，你的是新鲜组织直接
冷冻，还是固定组织后再过蔗糖然后冰冻。这两种不同处理方法得到的标本，最适宜的
温度稍有不同。我的经验是直接冰冻的新鲜组织，切片最佳温度在-20C到-25C。如果是
预先固定并经过蔗糖的标本，切片温度稍高一点，-18C左后最佳。
我常用的方法是给老鼠心脏灌注，先用50mL PBS，再用50mL 4%PFA，再开颅取脑，4%PF
A过夜，然后30%蔗糖过夜（等脑子全部沉到底部）。在一个100mL的烧杯里放50mL Isop
entane，放在干冰上，等温度稳定（丢一小块干冰到isopentane里，没有气泡出来）以
后即可以冻组织。把组织从蔗糖里取出，擦干，放在模子里，灌满OCT，摆正位置，做好
记号（非常重要，因为OCT冻住以后你就看不见组织了）。用镊子拿着装着组织的模子，
迅速放到冷却好的Isopentane中，两分钟后取出来就行了。如果有多个样本，注意Isop
entane的温度要控制好，用小块干冰测试一下（要求没有气泡出来）。
这种方法冻的组织，做全脑的cross section，saggital sec... 阅读全帖 |
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s******r
发帖数: 2876 | 11 有没有用RNAse later之类的溶液灌注老鼠的，
这样的话RNA会不会保存的好一点，in situ
容易一点。
PF
Isop
做好
子，
Isop |
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h******y
发帖数: 351 | 12 Methylbutane就是isopentane啊。呵呵 |
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w****l
发帖数: 535 | 13 土了，你这么一说我好像记得那个瓶上也有个iso什么的 |
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w****l
发帖数: 535 | 17 还有cryostat上有两个温度
一个是OC,一个CT，我现在一个是-20，一个-25
那个是你说的温度 |
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h******y
发帖数: 351 | 19 这你得看看你的Cryostat的manual。我指的是标本的温度。 |
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w****l
发帖数: 535 | 21 另外flash frozen的tissue,譬如人的spinal cord的切片有什么讲究
为了切方便，我又把它冻到oct了，在tissue没化的时候硬的冻得 |
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h******y
发帖数: 351 | 23 我没切过人的组织。
但是我不建议把冻好的组织再冻到OCT里。OCT的温度是室温，如果你把冻好的组织放在
OCT中，样本外围接触OCT的一圈会发生一个解冻再复冻的过程，这个过程中样本中的水
重新结晶，对组织形态破坏很大。 |
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h******y
发帖数: 351 | 25 可以用一点OCT把你的样本站在那个Stage上。 |
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D*a
发帖数: 6830 | 26 我们是泡了蔗糖还要泡加了gelatine的蔗糖，然后包埋是用gelatine和蔗糖包埋，再冻
。有了gelatine之后，－20就软了，－25才能切。不知道是不是更均一一些。
PF
Isop
做好
子，
Isop |
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l**********1
发帖数: 5204 | 27 Mark.
PF
Isop
做好
子，
Isop |
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w****l
发帖数: 535 | 28 譬如是mouse brain之类的比较大的tissue
厚度10um左右 |
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w********r
发帖数: 1431 | 29 玻璃和刀片的位置要调好，
调好了切出来就是平直的，不会卷。
下刀的速度也要干脆利索。
无它，只能自己慢慢摸索 |
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w*********n
发帖数: 439 | 30 你右手摇的速度要和你左手拿镊子拉切出来的组织片的速度要一致
然后用热的玻璃片去粘组织片，不会卷的， |
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w*********n
发帖数: 439 | 31 你右手摇的速度要和你左手拿镊子拉切出来的组织片的速度要一致
然后用热的玻璃片去粘组织片，不会卷的， |
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D*a
发帖数: 6830 | 33 试试放液体里面，IHC or 染色完了再放玻璃里。这样IHC的效果还好。
具体液体不知 |
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h******y
发帖数: 351 | 34 冰冻组织切片的时候，对环境温度有一定要求。先问你一个问题，你的是新鲜组织直接
冷冻，还是固定组织后再过蔗糖然后冰冻。这两种不同处理方法得到的标本，最适宜的
温度稍有不同。我的经验是直接冰冻的新鲜组织，切片最佳温度在-20C到-25C。如果是
预先固定并经过蔗糖的标本，切片温度稍高一点，-18C左后最佳。
我常用的方法是给老鼠心脏灌注，先用50mL PBS，再用50mL 4%PFA，再开颅取脑，4%PF
A过夜，然后30%蔗糖过夜（等脑子全部沉到底部）。在一个100mL的烧杯里放50mL Isop
entane，放在干冰上，等温度稳定（丢一小块干冰到isopentane里，没有气泡出来）以
后即可以冻组织。把组织从蔗糖里取出，擦干，放在模子里，灌满OCT，摆正位置，做好
记号（非常重要，因为OCT冻住以后你就看不见组织了）。用镊子拿着装着组织的模子，
迅速放到冷却好的Isopentane中，两分钟后取出来就行了。如果有多个样本，注意Isop
entane的温度要控制好，用小块干冰测试一下（要求没有气泡出来）。
这种方法冻的组织，做全脑的cross section，saggital sec... 阅读全帖 |
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s******r
发帖数: 2876 | 35 有没有用RNAse later之类的溶液灌注老鼠的，
这样的话RNA会不会保存的好一点，in situ
容易一点。
PF
Isop
做好
子，
Isop |
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h******y
发帖数: 351 | 36 Methylbutane就是isopentane啊。呵呵 |
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w****l
发帖数: 535 | 37 土了，你这么一说我好像记得那个瓶上也有个iso什么的 |
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w****l
发帖数: 535 | 41 还有cryostat上有两个温度
一个是OC,一个CT，我现在一个是-20，一个-25
那个是你说的温度 |
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h******y
发帖数: 351 | 43 这你得看看你的Cryostat的manual。我指的是标本的温度。 |
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w****l
发帖数: 535 | 45 另外flash frozen的tissue,譬如人的spinal cord的切片有什么讲究
为了切方便，我又把它冻到oct了，在tissue没化的时候硬的冻得 |
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h******y
发帖数: 351 | 47 我没切过人的组织。
但是我不建议把冻好的组织再冻到OCT里。OCT的温度是室温，如果你把冻好的组织放在
OCT中，样本外围接触OCT的一圈会发生一个解冻再复冻的过程，这个过程中样本中的水
重新结晶，对组织形态破坏很大。 |
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h******y
发帖数: 351 | 49 可以用一点OCT把你的样本站在那个Stage上。 |
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