l******a
发帖数: 1047 | 1 正如约伯所说：我以前风闻有你，现在亲眼见你，我在炉灰中懊悔。我希望你曾经对
神的一些信靠不要因为一件小事而丧失信心。你如果这样的坚持叛教诋毁神，对你并没
有好处，神的处罚是更重的。
了——恶心死了。 |
|
G*****9
发帖数: 3225 | 2 谢了。
但我不怕他的惩罚，因为他的惩罚只能彰显他的不义。 |
|
R*o
发帖数: 3781 | 3 as long as you believe the Christian God is false, it can do you no harm. |
|
j*******7
发帖数: 6300 | 4 六、加尔文对二十一世纪中国知识分子的挑战。
今日中国社会还有值得人为之舍命的信仰吗？今日中国社会中还有为信仰
甘于舍命的良知分子吗？从根本上而言，中国改革所面对的问题不是经济的问题，也不
是政治的问题，甚至也不是法律的问题，而是人格的问题，而人格的塑造直接涉及到信
仰的问题。一位中国著名的知识分子强调：“中国人的悲哀就是没有上帝的悲哀！”
1911年辛亥革命、1919年五四运动，转眼百年的光阴已经转眼消失。百年中国血泪斑斑
的历史表明，抽象的“德先生”（democracy，民主）和“赛先生”（science，科学）
，具体的“洋务运动”和“经济改革”都不能从根本上解决中国的问题。当然，形形色
色的与中国民间宗教混合的基督教也不是中国问题的答案，笔者深信加尔文及其神学思
想必然能够给中国文化的更新带来一股强有力的清流，除污涤垢，吐旧纳新，使中国文
化浴血重生，再次焕发出新的活力。正如余杰先生所深思和强调的那样：“新教入华两
百年来，很少有中国教会接受清教徒的神学与实践，也罕有基督徒公共知识分子尊奉加
尔文主义。清教徒精神不仅在教会内部如空谷足音，在世俗社会层面亦完... 阅读全帖 |
|
a***n
发帖数: 5665 | 5 钟鼓楼与洋快餐
单单李宗盛和罗大佑是远远无法撑起心灵的空间的，两个偏安与一个
小岛的小资
文人，又被日本的文化侵染，恐怕永远也无法体会我们对大国衰落的
哀恸和对中
兴的渴望。也许现在没有甚麽音乐能完全表达这种切肤之痛，但摇滚
乐能够提供
一个这样的契机。梦回唐朝就是表现了振兴的热望。而我更喜欢何勇
的钟鼓楼。
何勇似乎没有同期的张楚，唐朝，黑豹有名，但他的钟鼓楼是我在那
几张专辑
里最喜欢的一支歌。可能因为歌中唱出的都是我最最熟悉的东西，每
当那深沉而
又撩人心魄的三弦响起，我的心都会被它握紧，一切都已停止，心随
着何勇的歌
声回到日思夜想的北京。我的家住在皇城根的里边，我的家就在中南
海的旁边。
然而北京已不再是北京，银锭桥早已看不见西山，连北海都被肯德基
占领。初二
那年，肯德基刚进入北海，我的一个同学就在周记中写了一篇<<山得
士的微笑和
国人的忧虑>>，列举这桩婚姻的种种弊端。当她在全班朗读这篇文章
时，我们有
一种八国联军有回来了的感觉。一群领导的见地难道真的不如一个初
中生吗？终
于北海没再与肯德基续约，我拍手称快。然而竟有人说这是一种倒退
，让我感到
心寒。难道真是我们狭 |
|
c*********t
发帖数: 30088 | 6 记得先是在shopping mall里吃快餐，想点两个半份，结果人家不卖。就很郁闷说我们P
大从来都卖半份的，人家不信，我说那你啥时候来我请你。
然后场景转回我组织一帮子已经毕业的同学回去吃饭，我从我原来的宿舍楼出来走向学
一，脑子里要找人，不过没找到。。。到学一门口发现所有在校同学都穿着深蓝色裤缝
带两条白杠的运动服，说是校服，真土啊。进了门，原来我那些同学已经在排队了，我
没去左边的厅打鸡翅，在中间的厅最右边的窗口，打了个油饼，一个被汁水侵染得很让
我有胃口的菜花，还有半份凉调花生米，就是和黄瓜粒胡萝卜粒拌在一起的。我用了以
前用的那种饭卡，还帮其他同学刷了卡，在拥挤的学一找了个桌子和朋友们坐了下来。
。。
然后就醒了，打了半天的东西，没吃到嘴里：（ |
|
A****i
发帖数: 5546 | 7 哈哈肯哥稳不起了！
这事情微博上早就炸开锅了，基本上还是一边倒的支持刘莉莉的.毕竟这个妹儿是真正
在找工作，只是很不幸碰到了一群假装招聘的，还有一个更假的拿起鸡毛当令箭的瓜批!
太同意肯哥了！刘莉莉的做法绝对是正确而合适的,主持人自己先开始攻击选手的，这
个时候就应该反击.国内的风气纵然太差还是可以不卑躬屈膝就可以挣一份薪水的.刘莉
莉据说已经找到了东家，这个就是明证.
几点看法：
1.国内职场风气很不专业
国外招聘的时候东家再怎么名头大，对应聘者还是以礼相待的,非常professional.国外
的用人单位要找人就是真的缺人，从发广告邀请到面试等等，整个流程对用人单位自己
来说也是耗费时间跟精力的事情.电话面试挑出来的都是用人单位想真正了解的,所以不
会花自己的钱砸了自己的牌子.找工作虽然说应聘者处于相对弱势，但归根结底是个双
向选择的问题，招聘的是选以后跟自己一起工作的，应聘的选的可能是以后的老板同事
，还没有开始合作共事就兵戎相见，以后呢...
国内由于竞争空前激烈，造成了招聘单位本身的优越感很强，加上国内跳槽是家常便饭
，所以招人的更加不把应聘者当回事情（尊重之类这里先不谈，要... 阅读全帖 |
|
A****i
发帖数: 5546 | 8 不得行.还是要做自己才开心.我本来就遭侵染得来非常独立自信，这个是隐藏不了的事
情.这个事实的反面是对男性我是真正的尊重，理解，体贴，包容，但是没有没有一丝
半点的俯首迁就.
我还是觉得两个人在一起，都必须是自己最自然的状态，每个人自己都开心了，才能让
对方开心，两个人才有真正的开心.
假装成不是自己的样子骗来一个人莫的啥子意思.我觉得. |
|
A****i
发帖数: 5546 | 9 看到梦里花落之多少征文,觉得好有意思.看了哈,觉得大部分成功的标准就是出国十年
之后,搞定了票子,房子,本子,车子,马子,孩子,所谓成功人士的十年.
姐来点正能量,写哈剑走偏锋没事情瞎折腾自己耍的十年...跟五子登科莫的关系的十一年
二零零一年六月八号出国.
印象深刻的事情包括:
学习了两门语言,德语可以沟通无障碍,日语听的懂女优在高潮:-)
学习了沟通的技巧,包括跟人谈判,会议主持,在一群人前发言,跟人吵架,写西方式八卦
一样的公文,直接透明的表达自己的意图,包括不满,倾听他人说话.
迷上了心理学,喜欢
研究人性,看了好多有趣的书.最推荐动机与人格.
跳芭蕾,虽然别个细杆长条上台跳小天鹅,姐土肥圆上台演小企鹅.
通读圣经很多遍,觉得犹太人写进旧约的条条款款好了不起.
切过十几个国家,从三年前开始,每年在一个不同的时区跟不同的人跨年
吃过好多不同地区的美食/猪食,喝过不同的酒,抽过大麻
上过手术台,遭全麻过.
在三个国家工作过,被不同文化侵染过.目前在为第四个国家努力中.
交了好多可以交心的朋友,有两个死地踏地对我好的闺蜜,还有好多可以深夜煲电话粥的
异性朋友.
做了义工,在大学
外办... 阅读全帖 |
|
h*d
发帖数: 19309 | 10 ☆─────────────────────────────────────☆
boldhead (光头司令) 于 (Mon Apr 25 13:24:36 2011, 美东) 提到:
自强不息，厚德载物；独立精神，自由思想
这后面两句从来没听说过哈。看来真是被阉割了。这个校庆也是。我一直觉得参加这次
校庆对于一般校
友来说是自取其辱。如果你不是位高权重，或者是黄金万两，还是不要去了。这校友也
是要看看含金量
的。记得有个朋友参加一个所谓清华校友聚会，发现参加的都是各大公司的CEO之类，
都是在清华MBA班
认识的，他自己就是一个普通校友，根本没人理会，只好灰溜溜的回来。
☆─────────────────────────────────────☆
hillhong (自强不息厚德载物) 于 (Mon Apr 25 13:26:38 2011, 美东) 提到:
从来不是十六字，看新竹清华的就知道了
☆─────────────────────────────────────☆
piyaoke (辟谣客－睡教大师) 于 (Mon Apr 25 14:23:... 阅读全帖 |
|
b***m
发帖数: 2112 | 11 鉴湖女侠，钱塘苏小小，才女林徽因。多少才子佳人、英雄将侯，或留连于山水间，或
附佳句墨迹，或托身后于此地。虽似流星飞过，他们仍然是西湖的精魂。虽则山水的容
颜受尘世侵染，然魂灵仍然跨越时空，穿透访客的心灵。 |
|
S*******C
发帖数: 7325 | 12 呵呵 笑话。你能找到一种文化被所有地区接受的吗？
南方的文化在北方没有土壤，但是北方的文化能侵染到南方。至于上海和香港，你去问
问，香港有什么文化？上海的所谓沪剧能在香港有丝毫市场吗？ |
|
A*********0
发帖数: 16 | 13 嘻嘻，北方的文化如何侵染到南方？也就是东北大叔去南边旅游才会看看小品提高此类
节目在南边收视
率吧。
再说了，即使在北边，年轻人们会觉得小品“喜闻乐见”吗？ |
|
B****2
发帖数: 8892 | 14 几年前居住宾州大费城地区的时，一次外出钓鱼回家的路上，发生了一次惊动当地警察
和消防队的小事，至今记忆犹新。那天是周六，清晨起来决定去钓鱼，因为那时正是钓
花鲤（Crappie）的季节。花鲤是一种产于北美淡水湖泊、河流中的鱼种，个头虽普遍
不是很大，但其肉质疏嫩、鲜美可口，是淡水鱼中最受欢迎的自钓食用鱼种之一。钓鱼
的地点是郊区的一座水库，距离我们家约有二十英里。水库的上面，有一座为州公路修
建的大桥，桥的两侧设有专门的人行道和供人们垂钓用的Deck。由于花鲤喜阴凉，因此
常聚集在桥下。如此一来，桥上自然是人们钓鱼的理想场所。在此垂钓，既能享受钓鱼
的乐趣，又能欣赏库区大自然的秀丽风光，是周末的理想去处。
那天上午十点来钟启程，开钓时还不到十一点。当天运气不错，到下午两点来钟就已经
完成了任务，达到了日允许带回鱼数的上限（25条），收杆回家。当时的心情可想而知
，可谓一路高歌凯旋而归。然而乐极生悲，后面所发生的事情简直有些不可思议。不知
是高兴过头还是心不在焉，开车走在熟悉的回家路上，居然出现了差错。走出库区后，
本应右转，但自己却鬼使神差地直行，走上了一条不知去向的公路。数分钟后，发... 阅读全帖 |
|
wh
发帖数: 141625 | 15 发信人: bendm (ben), 信区: Cantonese
标 题: Re：西湖散记1
发信站: BBS 未名空间站 (Fri Sep 14 03:42:43 2012, 美东)
鉴湖女侠，钱塘苏小小，才女林徽因。多少才子佳人、英雄将侯，或留连于山水间，或
附佳句墨迹，或托身后于此地。虽似流星飞过，他们仍然是西湖的精魂。虽则山水的容
颜受尘世侵染，然魂灵仍然跨越时空，穿透访客的心灵。 |
|
j**********i
发帖数: 3758 | 16 八十年的人生是24x365X80=700800 个小时，如果重装一次视窗系统花费一个小时的话，
七十万零八百台机器重装一次就是花费一条宝贵的生命。那么，如果一种计算机病毒侵染
了七十万零八百台机器导致这些机器重新安装，设计这种病毒的人该当何罪呢？要是
是死罪的话，许多人认为有些过于严格，然而，这样的算法还是很宽容的，因为并没有
算上
打乱他人工作节奏等导致的其他隐含的损失。病毒已经不是一种新的东西了，可是还是有
一批又一批的无知的年轻人前仆后继地去逞能。这和媒体上的的私下同情和鼓励意见是
分不开的。
病毒的出现在理论上是下层社会的人们相互惩罚的结果。根除这种邪恶，需要指出的不仅
是这种危害程度，还要告诉病毒的传播者做病毒者的结局。这些目光狭窄的“高手”不
仅不了解
其他优秀的人的工作的意义和影响，也无法能长期持续本身这种被认为极其COOL的勾当，
不仅本来病毒就可以很好防范，未来的世界连病毒的载体都会消失。
“不可给头脑愚笨的人设置陷阱，让他绊倒。” |
|
r****r
发帖数: 379 | 17 这个问题比较tricky，一般来说，因为血清里的一些成分，比如补体，免疫球蛋白等会结合病毒，因此干扰细胞对病毒的吸收。但这依病毒类型而定，有些就不受影响。
但也因为如此，有些不含CAR的细胞，相反必须依靠补体之类的东西才能吸收这些病毒，所以对这些细胞的侵染还必须加血清。 |
|
e******e
发帖数: 116 | 18 做生物的能和农学分开吗？？？
做植物材料的不外乎就是作物，园艺，林木...
做动物的不就是畜牧，育种，兽医...
做微生物的，它不侵染植物动物？
楼主自己做的就是和农学院来的xdjm一样的事情嘛。 |
|
m****m
发帖数: 395 | 19 大家见笑。
为了研究流感病毒膜蛋白，要更好地模拟其环境，所以想买胆固醇、焦磷酸酯、神经酰
胺等试剂，调配出和病毒膜成分类似的载体，来承载该膜蛋白，然后研究其结构。虽然
我也知道，蛋白提纯后，没有核酸存在了，但是在重组蛋白和脂膜的过程中，不能保证
环境中没有其它生物体的核酸存在啊，比如各种细菌啊啥的，请问那些核酸会不会进入
我的实验，自己组装成活性病毒啊？
因为我觉得病毒膜蛋白种类本来就不多吧？我研究的那个是控制其融合、病毒成熟开始
具有侵染力的标志，请问有没有那种可能啊？。。。 |
|
T**********r
发帖数: 287 | 20 针对一个基因，order了3个Thermo GIPZ lentivirus shRNAmir，侵染细胞，通过
puromycin
获得stable cell line，之后通过western blot检测，三组shRNAmir都没有明显降低蛋
白水
平。这种情况是否有必要用realtime PCR在检测一下，希望牛人能推荐一下好用的Q-
PCR kit. |
|
T**********r
发帖数: 287 | 21
and
其实我也是担心污染，如果是污染，那么adenovirus应当是悬浮在空气中，通过扩散到
未侵染的
plate里。 |
|
T**********r
发帖数: 287 | 22 设计以adenovirus为载体，以CMV为promoter,drive mCherry和shRNAmir,shRNAmir从
openbiosystem pGIPz上PCR下来，连接到载体上，即pAd/CMV/mcherry-linker-
shRNAmir,
计划用adenovirus侵染免疫缺陷的rag1-/-animal,不知道这样设计合理吗？
另外可以直接用以lentivirus为载体的shRNAmir做in vivo的knock down吗？
多谢了！ |
|
w***e
发帖数: 269 | 23 adenovirus 侵染做liver gene knockdown 比较容易.其他tissue 难点.你的基因是在
liver里面么? |
|
T**********r
发帖数: 287 | 24
我是往pancreas里注射，让adenovirus侵染pancreas，并且在pancreas里表达，这个技
术问题已
经解决了。我是想知道pAd/CMV/mCherry-linker-shRNAmir这样的设计是否合理。
linker是
polycistronic的2A。多谢答复。 |
|
p*****y
发帖数: 44 | 25 我是往pancreas里注射，让adenovirus侵染pancreas，并且在pancreas里表达，这个技
术问题已经解决了
能讲讲这个技术吗？把老鼠打开来直接注射？ |
|
B*******l
发帖数: 41 | 26 小弟是新人，用H3 influenza侵染MDCK细胞时(microneutralization)，titer总是很低
，HAU
却挺高，plague assay表明病毒是活的。请教有什么方法解决么？多谢！ |
|
|
p*****m
发帖数: 7030 | 28 CD11c用的是APC 应该不会和GFP干扰吧？ |
|
p****l
发帖数: 291 | 29 CD11c APC will not influence on GFP signal, and vice versa.
It seems that the problem is the empty virus itself. |
|
i*****i
发帖数: 30 | 30 病毒感染导致TLR等活化，DCorpreDC活化后死亡。
试试SiRNA转染，尽量在终末细胞时候转染。 |
|
p****l
发帖数: 291 | 31 Actually virus transduction in DCs is a quite mature technique.
And if the DCs died, she can observe that, and when she measured GFP
signal in FACS, dead cells should firstly be gated out.
Dead DCs can be easily distinguished even under microscope.
At d0, in bone marrow cells, there should not be so much TLR expression,
and even for d4-5 BMDCs, the whole virus is not efficient in TLR
activation. |
|
p*****y
发帖数: 44 | 32 Virus infection impaired DC maturation. |
|
p*****m
发帖数: 7030 | 33 恩 是 好像很多Paper用类似方法 所以lp不知道问题可能出在哪儿。。 |
|
p****l
发帖数: 291 | 34 DC maturation和CD11c都检测不到有关系？
d4到5的BMDCs，50%以上细胞CD11c都很高 |
|
|
|
p****l
发帖数: 291 | 37 别叫俺前辈，haha
我没做过病毒载体感染DCs，但是做BMDCs非常多
实验室有人用病毒载体转染HSC，各个阶段前体细胞，还有pDC的
我能想到的建议就是
首先设置严格对照
1.bone marrow cells cultured with GMCSF for 4 to 5 days, facs CD11c vs.
MHCII
2.bone marrow cells transduced with empty retrovirus at day0, facs CD11c vs.
MHCII at day4 to 5, and plus GFP signal in facs
3.same as 2, but retrovirus carrying shRNA
4.before transduction with lentivirus, check CD11c vs. MHCII
5.letivirus also empty virus control and experimental vector
我觉得问题在病毒本身的可能性更大，我不知道她用什么载体
理论上，如果对照组CD11c表达... 阅读全帖 |
|
p*****y
发帖数: 44 | 38 I should have said DC development. Virus infection did cause DC apoptosis.
HIV patient also have less DC. |
|
s****9
发帖数: 932 | 39 I use retrovirus (MSCV) to transduce BM-Macrophage. Start to infect cells
1day after BM culture. Never have had any problem. Not sure about BM-DC,
but it is fairly unlikely that virus can influence DC differentiation.
I would suggest to try another viral vector or a commercial one.
vs. |
|
O******e
发帖数: 4845 | 40 It is just too hard to get good transfection. |
|
l*****m
发帖数: 122 | 41 啊哦~先来谢谢lg帮忙问问题:)
还要谢谢大家介绍的经验和提出的建议~潜水多年的我再不加入讨论有些说不过去，这
个破实验实在是太让我头大了呃... |
|
|
l*****m
发帖数: 122 | 43 You're absolutely right...I've seen tons of papers using either lenti- or
retro-virus to transduce BMDCs. Although the protocols vary a little bit
from one to another, none of them worked for me so far :(
I don't see much cell death by PI staining, but the pattern of the side/
forward scatter of the transduced cells does look a little different from
that of the untransduced cells (gated on live cells only). And more
importantly, CD11c expression is highly inhibited in transduced cells.
One exper... 阅读全帖 |
|
l*****m
发帖数: 122 | 44 I've talked to quite a few people who used retrovirus to transduce BMM. And
none of them had experienced any problem. Not sure if it is because of the
vector since I've seen papers in which they used the same vector for BMDCs..
.but it is a good idea to look into other vectors...Thank you! |
|
T**********t
发帖数: 1604 | 45 学到一个新词儿，gregarious
不过我不大明白，他说gregarious people比lonely people更容易受病毒侵染，所以
gregarious people体内与病毒防御相关的基因受到正调控。而lonely people得病主要
来源于环境微生物，所以他们体内与细菌防御相关的基因表达水平上升。可是不管
gregarious people还是lonely people，他们生活的环境是一样的，面对的细菌感染的
威胁也是一样的啊。gregarious people不会因为他们sociable，细菌就怕了他们吧。
。。为什么lonely people就变得iller了？
总之他的这个发现很有意思，可是他的这个解释很有点儿扯淡的意思。 |
|
p*****m
发帖数: 7030 | 46 10%可能困难吧 一般筛受体不都是病毒挂个luciferase or GFP gene,然后看秦染细胞
以后的signal 要是本底信号就highly variable(侵染了10%的细胞或者15%就差出50%),
上了RNAi screen放进plate reader还不得愁死人
preS binding receptor这个可能问题不大(话说回来,PreS binding cell surface
molecle是真的,PreS是进细胞必须应该也是真的.但是这个是不是就说明preS binding
的是receptor?) 话说有没有人直接拿preS和人肝原代细胞incubate然后TAP-MS? 没查
过... 另外,和乙肝病毒或者那个鸟的类似病毒binding的surface molecule找了大于5
个了吧 还是没有找够sufficient的 所以光靠binding来找我是觉得不够的 还是得有
functional assay(i.e. 至少能看到进细胞表达reporter基因)
其实也许HCV的故事会有启发性.HCV一共是找了3个还是4个receptor才算是suffic... 阅读全帖 |
|
p*****m
发帖数: 7030 | 47 嗯 受教了（我也想起来以前看到这个细胞要分化n久。。）
我本来也是想硬筛的。因为这玩意看起来也不会比HCV难做太多（HCV的好处是起步容易
，因为一开始就有还说的过去的可侵染的cell line） 无非是有n多receptor必须就是了
。我以前想过用xenopus oocyte，一次把肝细胞total mRNA搭进去看看有没有用 有用的
话不断的fractionation,这样说不定可以一次找全。。
问个问题哈，现在已知那几个HBV receptor-like protein,有没有人针对他们做药物了
？我一直不是很相信那些结果的原因一个就是好像号称发现一个receptor一半就没下文
了（还有原因就是LoS都做得不彻底，这个没办法，要做真正的LoS得用人元代肝细胞进
行遗传操作） |
|
p*****m
发帖数: 7030 | 48 我理解你的意思 不过国内靠大分子药我觉得还是不靠谱 太贵了 用起来又不方便 1亿携
带者呢。。。国内还是要靠疫苗外加小分子药物。而小分子药物最直接的就是block病毒
entry.
当然了，你可以说乙肝携带者其实大多数的肝细胞都已经被侵染了 阻止entry用处不大
。但是现在乙肝在肝细胞之间怎么transfer的似乎了解的不是很清楚，也许阻止entry会
有意想不到的效果？（比如说，virus transfer对维持病毒的存在是关键的）
有没有人在做最针对这些个疑似receptor的药物，我也不是很清楚，只知道现在号称的
那些个receptor，没有一个是真正HBV specific甚至hepatocyte specific的，所以我
猜测这些不会是很好的target。PreS1 derived peptide作为entry inhibitor目前据说
效果已经非常好了，另有其他一些entry inhibitory peptide/molecule在pre-
clinical阶段的效果也不错，所以我估计眼下针对“疑似”receptor的rational
design不会有太大的吸引力... 阅读全帖 |
|
p*****m
发帖数: 7030 | 49 10%可能困难吧 一般筛受体不都是病毒挂个luciferase or GFP gene,然后看秦染细胞
以后的signal 要是本底信号就highly variable(侵染了10%的细胞或者15%就差出50%),
上了RNAi screen放进plate reader还不得愁死人
preS binding receptor这个可能问题不大(话说回来,PreS binding cell surface
molecle是真的,PreS是进细胞必须应该也是真的.但是这个是不是就说明preS binding
的是receptor?) 话说有没有人直接拿preS和人肝原代细胞incubate然后TAP-MS? 没查
过... 另外,和乙肝病毒或者那个鸟的类似病毒binding的surface molecule找了大于5
个了吧 还是没有找够sufficient的 所以光靠binding来找我是觉得不够的 还是得有
functional assay(i.e. 至少能看到进细胞表达reporter基因)
其实也许HCV的故事会有启发性.HCV一共是找了3个还是4个receptor才算是suffic... 阅读全帖 |
|
