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全部话题 - 话题: 亲和柱
1 (共1页)
c**********5
发帖数: 653
1
来自主题: Biology版 - 免疫亲和柱纯化蛋白遇到困难
参考文献,以蛋白的一段29Aa多肽免疫制备多克隆抗体,挂NHS-Sephrase柱。 蛋白粗
液上柱,我的蛋白基本不挂柱,洗脱液没有蛋白。可能什么原因引起的?
我认为可能多克隆抗体不行,亲和力不够。还可能什么原因呢
s*******e
发帖数: 1010
2
说句玩笑话,这个问题的答案永远是case by case。如果你的蛋白表达量很高(>mg/
Liter)是有可能的,但是一般都需要在亲和洗脱后加一步分子筛或离子交换进一步纯
化一下才能达到90%。如果你在蛋白质和亲和标签之间加了特异性蛋白酶(TEV,
FactorXa之类的)位点的话,可以考虑上柱之后用蛋白酶切下蛋白而非洗脱,这种情况
一般比洗脱得到的蛋白纯度高(因为相当于针对标签和酶切识别序列进行了双重纯化)
,但要小心有的蛋白结合亲和柱后对蛋白酶有抗性的情况。
a*****3
发帖数: 565
3
想请教纯化蛋白的专家几个问题
1,用Ni-NTA亲和层析柱纯化蛋白,收集到的样品是带有完整的6xhis序列的蛋白
还是洗的时候被洗脱了。
2,有没有人碰到过纯化蛋白没有活性的情况?听说还是很有可能的。
3,如果有可能失活,哪类蛋白比较容易过柱后失去活性呢?
先谢谢了
C*******e
发帖数: 4348
4
来自主题: Biology版 - 亲和层析的功过是非
“亲和层析之前用个4-5M NaCl洗洗干净”
——请教一下,这是什么意思?
是说用4-5M NaCl把亲和层析柱洗洗么?
另外,以前做这个蛋白的时候一般我们都不用UV来读浓度的
做亲和层析也用的gravity column
不是用的FPLC,有UV monitor
浓度都是做bradford或者BCA来测
所以没有观察到不寻常的UV
我不觉得这个应该归结为“没仔仔细细把这个蛋白的性质好好记录过”
T**********t
发帖数: 1604
5
gel filtration是最难填好的柱子了,因为它的分离完全是靠样品的size difference
,所以柱子的均匀程度直接影响分离效果。其他像亲和柱,离子交换柱什么的,因为有
一个先结合再洗脱的过程,所以对柱子的填装质量要求没那么高。
柱子均匀与否,有的时候肉眼很难判断的。你装好了之后跑一个蓝色葡聚糖,看看条带
会不会跑成歪歪斜斜的就知道了。
T**********t
发帖数: 1604
6
按分子量分离蛋白的柱子一般都不小,可以很细,但不会很短。
很短的柱子,通常都是亲和柱。最常见的,多半是Ni2+柱,用来分离含有His-tag的重
组蛋白。像这种:
http://www.gelifesciences.com/aptrix/upp01077.nsf/Content/Products?OpenDocument&parentid=525604&moduleid=165701&zone=Labsep
p****s
发帖数: 3153
7
您这种应该是镍柱之类的,楼上说是亲和柱,我觉得很有道理
y**o
发帖数: 8897
8
来自主题: Military版 - 拿着变黄的培养基,我泪流满面
前天晚上把细菌培养瓶的瓶盖拧的太紧,过了24个小时,里面的培养基变黄发酸了.
酸性环境杀死了我需要的实验菌种,这周又要白干了.
千老的日子不是人过的啊隔壁美女师姐也要回国
我担心她要回去嫁人,早上她来敲门, 递给我一块浸泡了KOH的纱布,告诉我下次把这个
纱布悬在培养瓶里,对改善碳酸有帮助.
我接过纱布,哽咽了一下,她的手很漂亮,指甲精心修过,手背面还有不小心用强酸烫出来的
一些伤痕.真想鼓起勇气去握住.但是我双手都拿着试管.只好用力捏捏试管,仿佛捏住了
她的手指.
她仿佛看出了我的想法,跟我谈谈的说,这次回去,我就不一定回来了.
我不知道她为什么这么说,傻呼呼地冒出一句,我会想你的.
师姐轻轻地带着些哭腔说,你想我干嘛?然后带门出去了.
我左手里拿的那些免疫亲和柱纯蛋白,顿时融化......
b*****2
发帖数: 11103
9
【 以下文字转载自 Joke 讨论区 】
发信人: funnymall (Sam), 信区: Joke
标 题: 师姐明天就走了(完整合集)
发信站: BBS 未名空间站 (Fri Nov 18 16:24:26 2011, 美东)
发信人: freeyun2000 (清扬婉兮), 信区: Military
标 题: 师姐明天就走了(完整合集)
发信站: BBS 未名空间站 (Thu Nov 17 13:28:42 2011, 美东)
(本节由yelo执笔)
前天晚上把细菌培养瓶的瓶盖拧的太紧,过了24个小时,里面的培养基变黄发酸了。 酸性环境杀死了我需要的实验菌种,这周又要白干了。
千老的日子不是人过的啊隔壁美女师姐也要回国。 我担心她要回去嫁人,早上她来敲门, 递给我一块浸泡了KOH的纱布,告诉我下次把这个纱布悬在培养瓶里,对改善碳酸有帮助。
我接过纱布,哽咽了一下,她的手很漂亮,指甲精心修过,手背面还有不小心用强酸烫出来的一些伤痕。真想鼓起勇气去握住。但是我双手都拿着试管。只好用力捏捏试管,仿佛捏住了她的手指。
她仿佛看出了我的想法,跟我谈谈的说,这次回去,我就不一定回来了。... 阅读全帖
m*****5
发帖数: 23482
10
【 以下文字转载自 Military 讨论区 】
发信人: yelo (没有昵称), 信区: Military
标 题: 拿着变黄的培养基,我泪流满面
发信站: BBS 未名空间站 (Thu Nov 3 11:45:35 2011, 美东)
前天晚上把细菌培养瓶的瓶盖拧的太紧,过了24个小时,里面的培养基变黄发酸了.
酸性环境杀死了我需要的实验菌种,这周又要白干了.
千老的日子不是人过的啊隔壁美女师姐也要回国
我担心她要回去嫁人,早上她来敲门, 递给我一块浸泡了KOH的纱布,告诉我下次把这个
纱布悬在培养瓶里,对改善碳酸有帮助.
我接过纱布,哽咽了一下,她的手很漂亮,指甲精心修过,手背面还有不小心用强酸烫出来的
一些伤痕.真想鼓起勇气去握住.但是我双手都拿着试管.只好用力捏捏试管,仿佛捏住了
她的手指.
她仿佛看出了我的想法,跟我谈谈的说,这次回去,我就不一定回来了.
我不知道她为什么这么说,傻呼呼地冒出一句,我会想你的.
师姐轻轻地带着些哭腔说,你想我干嘛?然后带门出去了.
我左手里拿的那些免疫亲和柱纯蛋白,顿时融化......
l****i
发帖数: 20439
11
来自主题: LeisureTime版 - 师姐明天就走了(完整合集)
【 以下文字转载自 Military 讨论区 】
发信人: freeyun2000 (清扬婉兮), 信区: Military
标 题: 师姐明天就走了(完整合集)
发信站: BBS 未名空间站 (Thu Nov 17 13:28:42 2011, 美东)
(本节由yelo执笔)
前天晚上把细菌培养瓶的瓶盖拧的太紧,过了24个小时,里面的培养基变黄发酸了。 酸性环境杀死了我需要的实验菌种,这周又要白干了。
千老的日子不是人过的啊隔壁美女师姐也要回国。 我担心她要回去嫁人,早上她来敲门, 递给我一块浸泡了KOH的纱布,告诉我下次把这个纱布悬在培养瓶里,对改善碳酸有帮助。
我接过纱布,哽咽了一下,她的手很漂亮,指甲精心修过,手背面还有不小心用强酸烫出来的一些伤痕。真想鼓起勇气去握住。但是我双手都拿着试管。只好用力捏捏试管,仿佛捏住了她的手指。
她仿佛看出了我的想法,跟我谈谈的说,这次回去,我就不一定回来了。
我不知道她为什么这么说,傻呼呼地冒出一句,我会想你的。
师姐轻轻地带着些哭腔说,你想我干嘛?然后带门出去了。
我左手里拿的那些免疫亲和柱纯蛋白,顿时融化。。。。。。
(本节由AI300... 阅读全帖
f*******l
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12
【 以下文字转载自 Military 讨论区 】
发信人: freeyun2000 (清扬婉兮), 信区: Military
标 题: 师姐明天就走了(完整合集)
发信站: BBS 未名空间站 (Thu Nov 17 13:28:42 2011, 美东)
(本节由yelo执笔)
前天晚上把细菌培养瓶的瓶盖拧的太紧,过了24个小时,里面的培养基变黄发酸了。 酸性环境杀死了我需要的实验菌种,这周又要白干了。
千老的日子不是人过的啊隔壁美女师姐也要回国。 我担心她要回去嫁人,早上她来敲门, 递给我一块浸泡了KOH的纱布,告诉我下次把这个纱布悬在培养瓶里,对改善碳酸有帮助。
我接过纱布,哽咽了一下,她的手很漂亮,指甲精心修过,手背面还有不小心用强酸烫出来的一些伤痕。真想鼓起勇气去握住。但是我双手都拿着试管。只好用力捏捏试管,仿佛捏住了她的手指。
她仿佛看出了我的想法,跟我谈谈的说,这次回去,我就不一定回来了。
我不知道她为什么这么说,傻呼呼地冒出一句,我会想你的。
师姐轻轻地带着些哭腔说,你想我干嘛?然后带门出去了。
我左手里拿的那些免疫亲和柱纯蛋白,顿时融化。。。。。。
(本节由AI300... 阅读全帖
s********n
发帖数: 2939
13
理论上可以这样:
构建两个带有不同purification tags而且可以相容的载体,如6xHis tag on pET和
Strep tag on p15A or dual vector。让这两个monomer coexpress,用Ni-NTA和Strep
tag的亲和柱顺序纯化即可。
C*******e
发帖数: 4348
14
来自主题: Biology版 - 离子交换柱求教!
谢谢!用的就是这个guide
选出来三个
Capto S
SP
CM
然后Capto S比后两个贵一倍
不想用FPLC是本来就是粗提
条件摸好了以后gravity column也比较快
然后后面再上亲和层析(有tag)
还有一个是我们没有空柱子
然后这个县Cation exchange再Affinity的想法我没有试过
不知道好不好使
所以不想一下子再买好多东西
就想gravity column先试试

http://www.gelifesciences.com/aptrix/upp00919.nsf/Content/86545
257628001CC7BA/$file/18112731AH.pdf
s*******e
发帖数: 1010
15
如果你蛋白表达量还可以的话,不用tag纯化肯定是行的,无非是分子筛和离子交换轮
番上阵。可以先用两种离子交换粗分以下,最后用分子筛纯化。
但是如果是C末端包埋得太深的话,加了十六个氨基酸还被包埋了,肯定不是因为坑太
深的缘故,可能是你蛋白的某些区域和tag有特异性结合。换一种tag的话应该还有改善
。考虑到不用tag提纯实在太麻烦,你应该至少再试一种tag再考虑放弃亲和层析。我遇
到的一个蛋白就是C末端先连了一个Flag再放了一个His。结果用Ni完全提不出来,而用
Flag能出来不少。
s*******e
发帖数: 1010
16
在你蛋白的C末端终止密码子之前加进两个限制性酶切位点,然后把你的补加的linker
和tag设计成引物。即使十六氨基酸加上十个His也就26×3=78个bp再加上两头的酶切位
点6×2=12和保护碱基四个,总共才不到100个碱基。设计两条长度60bp的引物在中间有
20bp的互补区域就正好能覆盖100个bp。放在一起退个火再延伸一个回合,把产物连到
你蛋白的C-末端就成了。
我觉得这个其实不是连多长的tail的问题,换tag可能更好。你可以连接一个GST或着
GFP到你蛋白的C末端,如果用GFP的话再把His连到GFP的C末端。这个融合蛋白如果能表
达就一定能亲和纯化。在两个蛋白之间加上一个蛋白酶切位点就有机会在纯化后切出你
的蛋白来。
另外,Hisx6已经不fashion了,要X8或者X10才能hold住场面!
a*****x
发帖数: 901
17
来自主题: Biology版 - 学术交流谈论帖
三分之一
Chris Miller 认为, 记录不到ClC-ec1单通道电流的原因可能有两个, 一个是电流被其
他杂质蛋白通过的电流遮盖住了. 另一个原因可能是电流实在太小或者出现时间太短了
, 以至于仪器灵敏度不够, 记录不到. (还有一个提到的可能性是所用的ClC-ec1蛋白大
多失活了, 不过很早就被实验排除了, 因为这些蛋白可以通过同位素标记过的氯离子,
这里就不详述了)
先来解决杂质蛋白的问题. Chris Miller记录的是通过纯化过的蛋白的电流. 想想看
ClC-ec1已经可以纯化到的结晶的程度了, 难道还会有杂质吗? 的确, 纯化过的ClC-ec1
已经很纯了, 99.9%量级, 电泳绝对是一条带...可惜, 用来记录单通道电流还是不够纯
. 可见单通道电流记录无愧是生物技术精密之颠峰. Chris Miller发现, E. Coli中的
porin孔蛋白有少量污染到了纯化的ClC-ec1. 而porin可以通过巨大的电流, 影响ClC-
ec1的记录. 所以Chris Miller首先做的, 就是通过纯化去处杂质porin.
花了很多money和time去除了por... 阅读全帖
y******n
发帖数: 8667
18
才明白你是在Yeast extract里?根本没有粗提纯?那东西怎么能用来测蛋白比例含量
的?至少你先用离心加盐沉淀把蛋白搞到吧?细胞里的杂蛋白上百条,你那个如果是过
量表达(Overexpressed)的,至少先跑SDS-PAGE确定大致含量吧?
其实根据的带的深浅粗细已经可以估算大致的量了。如果带根本看不见,你只有用来确
定是否有,或用抗体亲和柱来分离和估算结合柱上的或流出的蛋白大致量。
J*******3
发帖数: 1651
19
南京为什么是中国最亲日的城市之一?

近两千年来,南京一直是中国佛教的中心。中国佛教界一直用佛教的布施、忍辱和无我
精神来应对日本的侵略和屠杀。
佛教界涌现出了大量的汉奸:如宣化上人,本焕长老,净空法师,以及《无量寿经》汇
集本的作者:夏莲居佛教学者等等……
近来,南京又有惊人之举动:
《去年买了个表!南京将大规模用日系车作出租车!》
http://bbs.tianya.cn/post-worldlook-915079-1.shtml
============================================================================
===
宣化上人曾经是汉奸?
心情随笔
在日本侵略东北三省的时候,宣化上人是万国道德会的一个科长,查查历史就知道万国
道德会只不过是日伪控制的汉奸组织,那么宣化上人会不会是汉奸?希望有一天能够真
相大白。
附上资料:
我就到拉林鎮去賒棺材。因為我參加道德會,在家的時候就在道德會做總科長,我認識
街上的一些人;就到棺材舖姓田那兒,這人叫田老埠。怎麼叫老埠呢?他的嘴很黑,好
罵人,是個跑江湖的... 阅读全帖
J*******3
发帖数: 1651
20
南京为什么是中国最亲日的城市之一?

近两千年来,南京一直是中国佛教的中心。中国佛教界一直用佛教的布施、忍辱和无我
精神来应对日本的侵略和屠杀。
佛教界涌现出了大量的汉奸:如宣化上人,本焕长老,净空法师,以及《无量寿经》汇
集本的作者:夏莲居佛教学者等等……
近来,南京又有惊人之举动:
《去年买了个表!南京将大规模用日系车作出租车!》
http://bbs.tianya.cn/post-worldlook-915079-1.shtml
============================================================================
===
宣化上人曾经是汉奸?
心情随笔
在日本侵略东北三省的时候,宣化上人是万国道德会的一个科长,查查历史就知道万国
道德会只不过是日伪控制的汉奸组织,那么宣化上人会不会是汉奸?希望有一天能够真
相大白。
附上资料:
我就到拉林鎮去賒棺材。因為我參加道德會,在家的時候就在道德會做總科長,我認識
街上的一些人;就到棺材舖姓田那兒,這人叫田老埠。怎麼叫老埠呢?他的嘴很黑,好
罵人,是個跑江湖的... 阅读全帖
R*o
发帖数: 3781
21
来自主题: TrustInJesus版 - 归正宗屠杀医生塞尔维特
宗教改革的祭品――塞尔维特
“The Dark Ages”,这是欧洲人自己用来代称欧洲中世纪的一个假定时间名词,意为“
黑暗时代”。的确,欧洲的中世纪是够黑暗的,其中,披着“仁慈的上帝”外衣的教会
组织即为当时极具代表性的一股黑暗势力。这里且不说拥有正统地位的罗马教会系统经
常会灭绝人性地迫害一些反教会的异端分子,如伽利略、布鲁诺等人所遭遇的那样,即
使是打着使人们“更接近上帝”的旗号进行宗教改革的代表人物,在一旦有人对他们所
宣扬的宗教思想有所非议时,他们也同样会丧心病狂地迫害有关反对者。其手段之卑鄙
、毒辣,比之罗马教会的宗教裁判所,竞毫不逊色,甚至有过之而无不及。在这方面,
16世纪的法国宗教改革家加尔文罗织罪名,蓄意谋害其反对者塞尔维特一案,可称其中
典型。要想了解其中的曲折,还是让我们回顾一下那充满血与火的沉重一幕吧。查佩尔
高台上的火刑
翻开世界史的日历,400多年前的1553年10月27日――想起来,4个世纪是遥远而淡漠的
,然而一旦说这一天曾发生一件骇人听闻的真真切切的残杀,那么,人类的同情和爱心
就不允许我们无动于衷。在死亡面前,尤其是在光天化日之下不公正的谋杀面前,... 阅读全帖
k*****a
发帖数: 7110
22
来自主题: SciFiction版 - 周天 桫椤城 BY碎石
第1节:东海。鲆岛。噬魂山脊。(1)
挖掘伊始,四方云聚,有神自云中叹息。
但是没有人留意。
没有时间抬头仰望苍穹了。
踩在用五牺祭祀的血池里,他们目光炯炯。所有的眼睛都盯着脚下的泥土,仿佛看
得穿深重的大地,看得透幽冥的黄泉,一直往下,看破狂暴的魔域深渊,一直一直往下
……直到那让神也暗自敬畏的力量。
传说中的力量……
混沌的力量……
他们渴望的力量。
挖掘的工作是如此保密,参与挖掘的人都没有名字,他们只有属于自己的行数与
标号。掌管金、木、水、火、土五行结界的人法力之强,恐怕连妖族的五老院或周国的
天监所里,这样的高手都屈指可数。但他们甘愿舍弃姓名,与另外三百四十五人一道黑
袍裹身,面色从容。
三百五十人替自己取了统一的名:"纯"。
--传说中存在着连天也无法干预的事,便被称做"纯粹"。
他们要做的,就是纯粹的事。
三百五十名纯按五行分做五组,艰辛工作,不分昼夜。"金"以纯刚之力荡平大地
,配合"土"破开泥土,砸开顽石,深入地底。"木"搭建起连接地面与坑底的通道。"火"
以纯阳之气烧灼泥中残破的魂灵,抵御侵... 阅读全帖
m**i
发帖数: 8296
23
来自主题: Zhejiang版 - mesa生日快乐;并祝浙版常乐
如果自己写生日贴,只会发生日祝福。不会夹带,不会借生人熟人都聚一起的当儿重提
版务做总结状,不会借重系温情的时候讲不相干的事情。或是直指离开的人是出于“恩
怨”(这种定性的言论,连一般媒体做话题的时候都会给证据好不好)。尤其是当事人
不来了的情况下。
还有,自己不会背后点评他人任何事情。当然,每个人思考的角度方式和权衡都不同,
不能强求一致。而且可以料到回复这个帖子的后果,会让纠正版务的人在大家眼里“小
题大做”。从这个角度讲,的确是自己写不出的。
这个帖子是从首页看到,冲着mesa进来的,也看人面子上点到即止。也许这个帖子会被
删,但是自己觉得没有违反任何版务版规,总不能不让讲真话。
麻烦WH不要借这样那样的机会再扯貌似维系感情实则伤人的事情了。如果继续点评和回
复跟自己有关的事情,麻烦知会一下,因为自己实在是不怎么来了。算我谢谢你。真为
版面好就莫再提历史了,别人都move on了,明白个中缘由的都睁眼闭眼地走开了,何
必再拎出来,非要既得实又得名的,何苦来。
如果现任的几个版面管理员,时间会证明的。水至清则无鱼,怎么样版面繁荣就怎么样
。水版一天到晚都是骂人的帖子,不还是好好的,... 阅读全帖
c***s
发帖数: 70028
24
霍启刚。 CFP供图
郭晶晶。(资料图片)
南沙酒店游泳池
商务客房。
南沙酒店室外小花亭,传说要在这里宣誓结婚。
本报记者独家揭秘“晶刚”婚宴细节
对于广东市民来说,明星、富豪大婚通常都是只能在报章杂志或者电视上看个热闹,这次终于有一场豪门婚宴在家门口上演,不少市民表示好想前往南沙看个究竟。媒体摩拳擦掌,纷纷爆料透露“晶刚”婚宴的相关筹备情况。随着“晶刚”婚宴日期的临近,其婚宴举行地南沙大酒店也成为了外界关注的焦点。本报记者早前特意前往该酒店探访,以期提前解密“晶刚”婚宴的细节。
婚宴三天,仅吃住约300万
此前就有消息传出“晶刚婚礼”要从简,不办“世纪婚礼”,从此次选择自己名下产业就能看出端倪。记者就此算了一笔账,如果按照每桌喜宴8088元起,在宴会厅一开就是50席,连摆3天,加上服务费、酒水,至少花费150万元;而在住方面,记者已得知住房全部被预订,虽然客房分豪华、商务、行政、套房等多个档次,但在网络上均有价可循,豪华型房间每晚大概850元,商务型大概900元,行政房大概1100元,天后宫套房到总统套房,从1400元到3万元不等,按照酒店320间房连住3晚来算,至少也得花费150... 阅读全帖
b*****e
发帖数: 3522
25
【六朝燕歌行】第一集  汉宫日暮

第一章 长门灯暗。
洛都北宫。永安宫外。
突如其来的惊呼声如同海啸,翻滚着往四面八方扩散开来。巍峨的琼玉阙楼上方,一具
穿着衮服的屍身双手扶着栏杆,兀自傲然挺着胸膛,鲜血喷泉般从断颈中喷出。那颗戴
着天子冕旒的头颅,此时正被人提在手中,冕延前方用白玉珠串成的垂旒乱糟糟绞在一
起,摇晃着不断淌下血滴,如同一只血腥的玩具。
秦桧提着刘建的首级,沿阙楼的墙面一路滑下。另一方向,吴三桂背着长矛逆势而上。
两人错身相过时,秦桧传声道:「人在上面」。
吴三桂笑道:「甕中捉鳖」。
秦桧叮嘱道:「当心狗急跳墙」。
「省的」。
当秦桧落到地面,阙楼下方翘首以盼的军士立刻爆发出一片巨大的欢呼声。
金蜜镝走马上前,接过首级,仔细看过,然后摘下天子冕旒,将刘建的头颅高高举起。
四周欢声雷动,平叛军士气如虹。
亲眼目睹了「天子」被一剑斩首的一幕,原本还抱着一丝幻想,在宫中顽抗的乱军瞬间
被打回原形。那些刘建用重金召募来的家奴、门客,投诚来的内侍、军士,冀图成为从
龙功臣的野心家们,此时都彷彿被滚水浇到的蚂蚁,轰然作了鸟兽散,争相往宫外逃命
。跑不掉的纷纷丢下兵刃,跪地求饶。... 阅读全帖
e*****g
发帖数: 2560
26
【 以下文字转载自 NewJersey 讨论区 】
发信人: HudsonHank (芸芸众生), 信区: NewJersey
标 题: 没有深夜痛哭过 不足以谈人生(zt) (转载)
发信站: BBS 未名空间站 (Thu Apr 26 13:57:38 2012, 美东)
发信人: HudsonHank (芸芸众生), 信区: Taiwan
标 题: 没有深夜痛哭过 不足以谈人生(zt) (转载)
发信站: BBS 未名空间站 (Thu Apr 26 10:08:59 2012, 美东)
发信人: lovefreedom (happy), 信区: Stock
标 题: 没有深夜痛哭过 不足以谈人生(zt)
发信站: BBS 未名空间站 (Wed Apr 25 17:29:01 2012, 美东)
国军老兵冲水喝下故乡土:没有深夜痛哭过 不足以谈人生
1
“我是踩着尸体上船的”高秉涵说。
十多万人在金门的海滩上等船,来了两艘,每艘最多一艘能装一万人。他13岁,拖
着一根棍子,瘸着腿站在人群里,他不知道这是哪儿,也不知道要去哪儿,他离开山东
老家逃难6个月了,他妈妈说,跟着人流走... 阅读全帖
l*********m
发帖数: 16971
27
【 以下文字转载自 Stock 讨论区 】
发信人: lovefreedom (happy), 信区: Stock
标 题: 没有深夜痛哭过 不足以谈人生(zt)
发信站: BBS 未名空间站 (Wed Apr 25 17:29:01 2012, 美东)
国军老兵冲水喝下故乡土:没有深夜痛哭过 不足以谈人生
1
“我是踩着尸体上船的”高秉涵说。
十多万人在金门的海滩上等船,来了两艘,每艘最多一艘能装一万人。他13岁,拖
着一根棍子,瘸着腿站在人群里,他不知道这是哪儿,也不知道要去哪儿,他离开山东
老家逃难6个月了,他妈妈说,跟着人流走,要活下去。
天亮的时候登陆艇靠岸,人像海水一样往上冲,刚开始没有一个能进去,全都卡在
门口,“挤不进去就往下踩呀,就这么踩着人上满了”
他肩膀一沉,身后有个兵拿枪托往下拼命压小孩子的肩膀,准备踩着他上船,一个
军官一枪把士兵从他肩上打下来,救了他,“我上了船两只脚都没有鞋子了,鞋子老早
就掉了,踩的都是人,都没有走路,是被推上去了。你不走都不行。”
船要关门,门还卡着很多人,关的时候,有的人从颈部一下切掉了,有的人是切断
一条腿,比起那个场面,孩子更害... 阅读全帖
p******o
发帖数: 9007
28
来自主题: History版 - 雍正即位真相-作者温相
http://www.ourjg.com/bbs/simple/?t8972.html
查看完整版本: [-- 转载-雍正即位真相-作者温相 --]
[稽古右文·康雍梦华] -> 九州清晏 -> 转载-雍正即位真相-作者温相 [打印本页]
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maudlin 2012-02-07 19:15
转载-雍正即位真相-作者温相
作者认为雍正非正统继位,内容很多,只选取了部分,我正统和非正统继位说都看了不
少,倾向于非正常继位一点,觉得这篇分析得似乎更有道理,或说更符合我个人思考逻
辑,编辑得比较乱,请大家谅解。大家若有兴趣可去网上搜索
3.胤禵悄然崛起
就在雍正积极讨好乃父、营求储位的同时,康熙末期的清朝政坛上正在悄然崛起一
颗闪亮的政治新星,这个人就是雍正的同母弟、皇十四子胤禵。胤禵,又名胤祯。关于
胤禵的名字问题清史研究界历来有争议,南开大学教授冯尔康认为胤禵本名胤禵,更名
胤祯,复称胤禵(指雍正上台后又给他改回胤禵)。而海外学者杨启樵教授则认为胤禵
原名胤祯、改名胤禵。胤禵的崭露头角是在一废太子之际,清康熙四十七年,老皇帝斥
责皇... 阅读全帖
d******a
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来自主题: History版 - 雍正即位真相-作者温相
用临死时候没有见马齐来反驳“病重时”见马齐
这个“温相”智商有问题
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朝鲜人所作的《李朝实录·景宗实录》卷10记载了康熙病重时召见大学士马齐说:
“第四子雍亲王最贤,我死后立为嗣皇。胤禛第二子有英雄气象,必封为太子。”这段
话里面错漏更多,康熙临死之际召见的皇子、大臣的名单中根本就没有马齐,雍正自己
就说过:“皇考升遐之日,大臣承旨者,惟隆科多一人”,可见并没有马齐。

http://www.ourjg.com/bbs/simple/?t8972.html
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[稽古右文·康雍梦华] -> 九州清晏 -> 转载-雍正即位真相-作者温相 [打印本页]
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maudlin 2012-02-07 19:15
转载-雍正即位真相-作者温相
作者认为雍正非正统继位,内容很多,只选取了部分,我正统和非正统继位说都看了不
少,倾向于非正常继位一点,觉得这篇分析得似乎更有道理,或说更符合我个人思考逻
辑,编辑得比较乱,请大家谅解。大家若有兴趣可去网上搜索
3.胤禵悄然... 阅读全帖
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来自主题: Military版 - 法治社会,依法治国
谟拉比法典全文(来自网络) (2011-08-05 12:48:18)转载▼标签: 文化 分类: 历
史的天空

《汉穆拉比法典》是目前所知的世界上第一部比较完整的成文法典。法典竭力维护不平
等的社会等级制度和奴隶主贵族的利益,比较全面地反映了古巴比伦社会的情况。法典
分为序言、正文和结语三部分。正文共有282条,内容包括诉讼程序、保护私产、租佃
、债务、高利贷和婚姻家庭等。
《汉谟拉比法典》(英文名称:The Code of Hammurabi),1700年出于巴比伦;
它刻在一根高225米,上周长165米,底部周长190米的黑色玄武岩柱上,共3500行,正
文有282条内容,用阿卡德语写成。它是世界上最古老、最完整的法典。是汉谟拉比为
了向神明显示自己的功绩而纂集的。
古巴比伦王国第六代王汉谟拉比,约在公元前1792~前1750年在位,因统一两河
流域与颁行法典的历史活动而著称。对内推行缓和阶级矛盾、加强王权和发展经济措施
,抑制债务奴隶制,使其在长期对外用兵中有相对稳定的后方,促成国家繁荣,巴比伦
城变为西亚最大政治、经济、文化中心。根据社会经济形势与阶级等级关系的状况,在
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标 题: 没有深夜痛哭过 不足以谈人生(zt)
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国军老兵冲水喝下故乡土:没有深夜痛哭过 不足以谈人生
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“我是踩着尸体上船的”高秉涵说。
十多万人在金门的海滩上等船,来了两艘,每艘最多一艘能装一万人。他13岁,拖
着一根棍子,瘸着腿站在人群里,他不知道这是哪儿,也不知道要去哪儿,他离开山东
老家逃难6个月了,他妈妈说,跟着人流走,要活下去。
天亮的时候登陆艇靠岸,人像海水一样往上冲,刚开始没有一个能进去,全都卡在
门口,“挤不进去就往下踩呀,就这么踩着人上满了”
他肩膀一沉,身后有个兵拿枪托往下拼命压小孩子的肩膀,准备踩着他上船,一个
军官一枪把士兵从他肩上打下来,救了他,“我上了船两只脚都没有鞋子了,鞋子老早
就掉了,踩的都是人,都没有走路,是被推上去了。你不走都不行。”
船要关门,门还卡着很多人,关的时候,有的人从颈部一下切掉了,有的人是切断
一条腿,比起那个场面,孩子更害... 阅读全帖
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“我是踩... 阅读全帖
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2017年7月28日,中共中央党校旗下《学习时报》在头版刊登整版文章《习近平总书记
的成长之路》表示,“习近平总书记这个党中央的核心、全党的核心,是在红色基因传
承中成长起来的,是在艰难曲折困境中磨砺出来的,是在复杂国际斗争中历练起来的,
是在极其丰富的革命实践中确立起来的,这个核心在共产党员和亿万人民群众中是最“
走心”的,真正是众望所归、人心所向。”全文如下。
2017年7月26日至27日,中共省部级主要领导干部“学习习近平总书记重要讲话精神,
迎接党的十九大”专题研讨班在北京举行。图为中共总书记习近平在开班式上发表讲话
(图源:新华社)
一个国家、一个政党,领导核心至关重要。在强国强军新征程上,在民族复兴关键当口
,确立和维护习近平总书记这个党中央的核心、全党的核心,关乎旗帜道路方向,关乎
党运国脉军魂。因此,必须把忠诚核心、拥戴核心、维护核心作为最大的政治,融入血
脉、植入灵魂,化为坚定的信仰信念和自觉行动。而信仰上的坚定、政治上的坚守、行
动上的紧跟,最根本、最深刻的是来自内心的崇敬与爱戴。心灵上的情感认同最深沉最
真挚,也最持久最牢靠。
有一种信仰薪火相传——习近平总书记是... 阅读全帖
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来自主题: Military版 - 习近平总书记的成长之路
http://cpc.people.com.cn/n1/2017/0728/c64094-29433685.html
学习时报特约评论员
2017年07月28日07:35来源:学习时报
一个国家、一个政党,领导核心至关重要。在强国强军新征程上,在民族复兴关键当口
,确立和维护习近平总书记这个党中央的核心、全党的核心,关乎旗帜道路方向,关乎
党运国脉军魂。因此,必须把忠诚核心、拥戴核心、维护核心作为最大的政治,融入血
脉、植入灵魂,化为坚定的信仰信念和自觉行动。而信仰上的坚定、政治上的坚守、行
动上的紧跟,最根本、最深刻的是来自内心的崇敬与爱戴。心灵上的情感认同最深沉最
真挚,也最持久最牢靠。
有一种信仰薪火相传——习近平总书记是在浓郁革命氛围中成长起来的我党领袖
信仰的力量一往无前、源源不断;信仰的传承筋骨相连、生生不息。习近平总书记出生
在一个红色革命家庭,父母都是一生追随共产党、追求真理的老革命。父亲习仲勋曾是
党和国家领导人之一,13岁参加革命,18岁就组织领导了甘肃境内的“两当起义”,19
岁与刘志丹等同志创建陕甘边照金革命根据地,21岁被推选为陕甘边区苏维埃政府主席
。后来在... 阅读全帖
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来自主题: Military版 - 亡命兴安岭
任化民 蔻蔻年华 微信号 coconianhua
功能介绍
要学着去享受生活,在一个有限的下午喝着咖啡,看看一场雨之后草木怎样变绿。
“生命像条河,生活的道路越是艰险,生命的浪花越好看。”中学时,读苏联小说《钢
铁是怎样炼成的》,我在日记中写下的感想。没料到,命运真的让我的生活道路变得崎
岖艰险,大学生成了“反革命”、通缉犯,逃亡大兴安岭,过着野人般的“盲流”生活
。十年后,一九七八年才被吉林大学数学系找回落实政策。
往事不堪回首。但在大兴安岭的那段艰险的亡命生涯,却常常勾起我的回忆。这不仅是
越苦的越耐人回味,更主要的是,浑厚粗犷的大兴安岭铸就了我生命的根、生命的魂,
影响着我全部人生。就是后来我参军入伍,多次立功受奖,参加国庆观礼,登上天安门
城楼受国家领导人接见时,我都想到莽莽苍苍的大兴安岭,它是我登上天安门的主要台
阶。
在太平世道,妒忌人的坏人,他们的妒忌心只能压缩在胸内,不能释放;到了坏人当道
的动乱时代,人间正气消减,他们的妒忌心猛烈膨胀,便乘机干起原先想干不能干的各
种卑鄙的坏事来。狼要吃羊,随便都能找到借口,我无尽的灾难从我的一首小诗开始了。
一九六零年十月五日,农历... 阅读全帖
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标 题: 没有深夜痛哭过 不足以谈人生(zt)
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国军老兵冲水喝下故乡土:没有深夜痛哭过 不足以谈人生
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“我是踩着尸体上船的”高秉涵说。
十多万人在金门的海滩上等船,来了两艘,每艘最多一艘能装一万人。他13岁,拖
着一根棍子,瘸着腿站在人群里,他不知道这是哪儿,也不知道要去哪儿,他离开山东
老家逃难6个月了,他妈妈说,跟着人流走,要活下去。
天亮的时候登陆艇靠岸,人像海水一样往上冲,刚开始没有一个能进去,全都卡在
门口,“挤不进去就往下踩呀,就这么踩着人上满了”
他肩膀一沉,身后有个兵拿枪托往下拼命压小孩子的肩膀,准备踩着他上船,一个
军官一枪把士兵从他肩上打下来,救了他,“我上了船两只脚都没有鞋子了,鞋子老早
就掉了,踩的都是人,都没有走路,是被推上去了。你不走都不行。”
船要关门,门还卡着很多人,关的时候,有的人从颈部一下切掉了,有的人是切断
一条腿,比起那个场面,孩子更害... 阅读全帖
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来自主题: Talk版 - 168名觉醒世人的郑重声明
看到了斑竹的置顶声明,但似乎这里最近还有不少有关法轮功的文章,所以冒昧一贴,
在此仅请斑竹谅解,这帖意在劝善救人,谢谢
更多真相, 请到真相之光俱乐部
http://www.mitbbs.com/club_bbsdoc2/everybodydeservestruth_0.htm
【明慧网二零一四年一月二十八日】
郑重声明
我曾读过大法书《转法轮》。由于受中共邪党无神论的影响较深,我对《转法轮》進行
所谓的“批注”。99年“7.20”以后,我非常害怕,我把《转法轮》撕成两半后丢在厕
所里,幸好被孩子发现并把宝书收起来。后来,孩子坚修大法被单位领导叫去“谈话”
,我害怕极了,我把藏在家里的大法资料和学员修炼体会埋在坟地边上的大坑里,给大
法造成了损失。由于听信了邪党对法轮大法的造谣宣传,我说过对大法、对大法师父不
敬的话。我相信法轮大法好。在此我声明:在无知和怕心的作用下,所说、所做的对大
法、对大法师父不敬不利的言行全部作废。相信法轮大法好,支持法轮大法。今后利用
机会告诉世人大法好,弥补过错。
吴维新 2014年1月22日
郑重声明
我俩个孙女修炼法轮大法。一九九九年七·二以来,她们多... 阅读全帖
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看到了斑竹的置顶声明,但似乎这里最近还有不少有关法轮功的文章,所以冒昧一贴,
在此仅请斑竹谅解,这帖意在劝善救人,谢谢
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【明慧网二零一四年四月二十七日】
沈阳法轮功学员被绑架、骚扰情况补充
沈阳市丁丽华等法轮功学员遭绑架后续消息
黑龙江鹤岗市黄晓霞、杨兆才、许显达被绑架情况补充
河北保定市满城法轮功学员严新普被绑架
北京法轮功学员李润梅被勒索一万元取保候审
山东青岛法轮功学员张伟被绑架、勒索
两老年法轮功学员在长春北站被绑架情况补充
四川省遂宁市法轮功学员吴世珍、钟小方被绑架
新疆昌吉州龚晓娟将于4月29日10点40分遭非法庭审
四川泸州市法轮功学员赵荣贵疑近日被绑架
大连市开发区邪党人员散布谣言图迫害
广东湛江市法轮功学员刘丽被绑架到洗脑班
青岛法轮功学员袁绍华被非法开庭,妻子被电动门夹挤
河北廊坊莲庄子村法轮功学员陆文清遭非法抄家
河南新乡市多名法轮功学员被非法关押、判刑情况
河南新乡市法轮功学员王纪州、李瑞芳面临非法庭审
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“我是踩着尸体上船的”高秉涵说。
十多万人在金门的海滩上等船,来了两艘,每艘最多一艘能装一万人。他13岁,拖
着一根棍子,瘸着腿站在人群里,他不知道这是哪儿,也不知道要去哪儿,他离开山东
老家逃难6个月了,他妈妈说,跟着人流走,要活下去。
天亮的时候登陆艇靠岸,人像海水一样往上冲,刚开始没有一个能进去,全都卡在
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他肩膀一沉,身后有个兵拿枪托往下拼命压小孩子的肩膀,准备踩着他上船,一个
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就掉了,踩的都是人,都没有走路,是被推上去了。你不走都不行。”
船要关门,门还卡着很多人,关的时候,有的人从颈部一下切掉了,有的人是切断
一条腿,比起那个场面,孩子更害怕的是声音-----船刚刚离开岸,没有上船的人喊的
声音,“那就是鬼叫一样,大声叫。听不清楚,都在叫。”
有些没上船的兵,拿着枪就对着船上的人打,机枪打过来,甲板上的人死了一大片
,都是血。一个炮弹落到船上,又死了一大群人,如果是大炮弹,船就会沉了。
他躲在... 阅读全帖
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十多万人在金门的海滩上等船,来了两艘,每艘最多一艘能装一万人。他13岁,拖
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第10位:彼得洛维奇(31.21,网友票数129/760,评审团票数5/11)
1947.05.15,1999-2000年执教上海申花,2002-2003年执教北京国安,2000带队获得联
赛亚军,2002年带队获得联赛季军,2003带队获得足协杯冠军
甲 A时代最大牌的外籍教头,曾率领红星队获得1990-1991赛季欧冠冠军,因而被称为
“红星大帅”。性格火爆的彼得洛维奇堪称资源整合的大师,在当时申花阵容并不算豪
华的情况下老彼得时有高招,他将前锋卞军改造成中卫,还在锋线捉襟见肘之时将祁宏
前移,收获奇效。在2000年收获亚军之后老彼得离开上海,时隔2年入主国安,在他的
率领下国安无限接近联赛冠军,球队倒数第二轮负于大连最终于冠军擦肩而过,还在荒
谬的抽签规则下“不敌”深圳屈居第三。(by Rivaldinho)
第9位:朱广沪 (34.76,网友票数252/760,评审团票数4/11)
1949.09.25,2000-2003年执教深圳,2002年带队获得联赛亚军,2002年荣膺最佳教练
甲A时代还没有执教过国家队的朱广沪,名声要好很多。早年的朱广沪致力于梯队建设
,在中青队和健力... 阅读全帖
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老家逃难6个月了,他妈妈说,跟着人流走,要活下去。
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☆─────────────────────────────────────☆
ikiss (爱亲) 于 (Fri Jan 4 23:55:34 2008) 提到:
莫名其妙的,看到这个名字,就喜欢上了,于是下决心找来看看。
☆─────────────────────────────────────☆
ikiss (爱亲) 于 (Fri Jan 4 23:56:06 2008) 提到:
写在前面的话:
第一、这不是小说,是个故事,所谓故事,就是以前发生的事。
第二、这个故事发生在一年前。
第三、所有人物姓名,因为种种原因,我只能用化名代替。
第四、这不是一个色情的故事。
第五、因为是写给大家看的故事,所以我尽量不用小说的修辞手法,比较粗糙,尽量尽
早更新。
我用这个名字希望大家不要误会 ,这不是色情或者情色小说,我只是尽量用简单的文
字来表述一个故事。
——每一个晚上湿的不是床单,却是枕脚;每一次做爱痛苦的不是身体,而是灵魂。
仅以此故事慰藉那些曾经不幸和痛苦的人
——方东
我想说,这个故事是依照真实来写的。
但并不是说每一件事都是真的。
而且,这个故事带有很... 阅读全帖
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十多万人在金门的海滩上等船,来了两艘,每艘最多一艘能装一万人。他13岁,拖
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军官一枪把士兵从他肩上打下来,救了他,“我上了船两只脚都没有鞋子了,鞋子老早
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李永苦偏着头,把眼睛微微眯起,他刚刚才被揭开头上的黑布“被抓到后,他被这
些人弄上一辆马车,一路颠簸看到了一处地方,天亮后又被运出了城,走了大概一刻钟
,到了眼下这个地方。
他游目四顾,这里是一个砖房,只有一个小小的窗子,而且位置开得很高,跳起来
也无法摸到,屋中十分简单,就是一张桌子和几张椅子,两面墙壁插了两支火把,毕毕
录剥的烧着,当然,还有几个人。
“你就是李永芳?”一个年轻武官坐在对面,带着一种亲和的微笑。
李永芳看看那武官,这个人他见过,正是让后金恨之入骨的登州总垩兵陈新。不过
在此处见面,就不是什么好事。他低下头盯着地面没有说话,他也说不出来。被抓到时
就被下掉了下巴,嘴巴无法闭合,口水顺着嘴角一串串的滴下。
“啧啧,原来是阿巴泰的女婿,不过本官有个坏消息给你,你的老丈人在旅顺被我
登州镇痛打,六个自管牛录夷丁只剩下不足两百人,日后在皇太极那里也是不好混的。”
李永芳还是不说话,陈新却丝毫不以为意,饶有兴致的看着李永芳,片刻后才道:
“看起来抚顺驸马和老丈人关系不太好,对丈人漠不关心,这也难怪,听说建奴女子甚
丑,耳上鼻上还要穿上银环,驸马爷看不上她也是常理。可恨阿巴泰非要... 阅读全帖
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来自主题: paladin版 - 蓝晶新作 剑的旋律4
【第十六】——挑衅
【第十七章】——乱战
【第十八章】——刺杀和诡局
【第十九章】——另外一个局了
【第二十章】——局中局

第十六话
天已经黑了,但市政厅的小会议室内仍旧灯火辉煌,一大群人正聚集在那里,
这些人大部分都上了年纪,最年轻的也有四十七、八岁。
这些老头可不简单,全都是塔伦的头面人物,跺一跺脚,整个塔伦都要颤三
颤。这座港口城市可以说完全掌握在他们的手中,其中也包括这座城市的财富,
那些地下钱庄的幕后老板就是他们,拉佩敲打的那帮尤特佬就是在帮他们工作。
此刻这些老头已经得到各自代理人的汇报,知道拉佩査帐的事,这让他们很
愤怒。
「这是挑衅,赤裸裸的挑衅!」一个秃顶老头怒不可遏地叫嚷道,他已经
七十多岁,却中气十足。
「巴斯布顿男爵,先消消气,用不着那样声嘶力竭。这里所有人都清楚,您
和宾尼派关系密切,而这次刺杀事件就是宾尼派做的,对于那个小家伙,你当然
非常痛恨。」一旁的胖老头揶揄道。
「胡说,我只不过和威尔第、皮斯波尔私交不错,他们两个人恰好是宾尼派
的成员罢了。」秃顶老头立刻否认。
「既然你不属于宾尼派,又何必这样激动?那个小子查账只是为了查案子,
起因是那起刺... 阅读全帖
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