s********9
发帖数: 4395 | 1 管网找到答案啦～～
How often can the Sonic Skin Cleansing System be used?
The Clarisonic Sonic Skin Cleansing System is gentle enough to be used
twice a day and should be used as part of your daily skin care routine.
我是长痘痘的皮肤，现在用了不错，每天1－2次，一般都是2次。 |
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y****2
发帖数: 11909 | 2 对付地里的老鼠用超声波蛮管用的，amazon 上有很多款，MM可以仔细挑一下，我没怎
么仔细研究买了这款 Gartrol Solar Mole Repellent Repel Mole, Voles, Gopher,
Mice and Rats, Rodent Sonic Repeller Pest Control，效果还是有的，当时买的时
候review没有这么差，年底的时候差评进去很多。
去年的一小块红薯地里放了两个，除了最远的地方被老鼠钻了个洞，红薯被吃掉几口外
，其他的红薯安然无恙，是这么多年来最丰收的一年：）不过对这个产品所号称的“It
prodcues a sonic pulse of approximately 400Hz every 30 seconds and provides
up to 7,000 square feet of coverage. ”，我觉得大打折扣，我那一小块红薯地最
多150square feet，还是有老鼠敢来偷袭，所以不推荐我买的这款：） |
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l******m
发帖数: 31446 | 3 又是一北京的乐队。
http://i.xiami.com/idealgarden/profile?spm=a1z1s.6659513.0.0.sY
理想后花园乐队，【喊音乐】厂牌旗下乐队。2010年，成立（组建）于北京。
主唱/张一然
吉他/白雪川
吉他/张冲
贝斯/史洪任
鼓手/陈宏海
像乐队名字一样，五个二十几岁极富想象力与创造力的青年，用他们对音乐独到的理解
和执着的信念构建着属于他们自己的自由花园。但他们坦诚表示，乐队名字并无特殊含
义。
关于创作：
他们注重歌词和旋律的表达， 并试图在传承正统中国摇滚音乐的同时，打破传统的音
乐格局，创造出独树一帜、不拘一格的独立音乐风格。
在国内音乐创作环境深受国外文化影响下，创作出好的中文作品也成了他们最原始的动
机。始终坚持以中文作词，已经成为了他们的重要特色，也充分表明了他们坚定的音乐
立场。
关于作品：
在他们的作品中，你会听到他们时而含蓄内敛，时而活力张扬，时而忧郁狂暴，时而又
充满了嘲讽批判的复杂情绪。这种复合多变的特质，似乎也正暗合了当下处在剧烈变革
下迅速成长起来的新一代人特有的精神状态。
他们是一群勇敢的理想主义者，用最直... 阅读全帖 |
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I*y
发帖数: 1024 | 4 Cold Check It
12345...103
Band: the Jesus Lizard
Crap/Not Crap?
NOT CRAP
333 votes
CRAP
25 votes
Band: Melvins
Melvins
NOT CRAP
302 votes
CRAP
36 votes
Band: Shellac
Shellac?
not crap
297 votes
crap
27 votes
Band: Nirvana
Nirvana?
not crap
280 votes
crap
53 votes
Nutball: Neil Young
Nutball: Neil Young
Not Crap
275 votes
Crap
22 votes
Band: Fugazi
Fugazi?
NOT CRAP
254 votes
CRAP
32 votes
Band: Silkworm
Silkworm
Not Crap
224 votes
Crap
32 votes
Band: Minutemen
Minutemen?
Not crap.
207 votes
Crap.... 阅读全帖 |
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p*********3
发帖数: 2039 | 5 http://en.wikipedia.org/wiki/Nurse_with_Wound_list
Agitation Free, German rock group.
Pekka Airaksinen, Finnish musician and member of the group Sperm (see below).
Airway, project of Joe Potts as part of the Los Angeles Free Music Society
collective.
Albrecht/d. German artist with ties to the Fluxus scene. He has worked with
Joseph Beuys and Throbbing Gristle (see below).
Alcatraz, German rock group.
Älgarnas Trädgård, Swedish rock group.
All 7-70, see Ritual All 770 (below)
Alter... 阅读全帖 |
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发帖数: 1 | 6 how does barry beat his future self?
did Iris died?
whose funeral was it?
will ollie save william? will he kill adrian?
al ghul vs. al ghul, sonic vs. sonic.
wonder who will fight slade and boomerang.
all is happening this week, exicited!! |
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r******s
发帖数: 3662 | 7 methanol-sonication 2 minutes-acetone-sonication 2minutes, repeat 3 times. |
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g**o
发帖数: 3033 | 10 台下没反应倒是情有可原。她唱的歌歌名是‘declare independence'，估计
很多人不见得听到调子就能对上号，然后她说的是tibet，有很多人可能也不
知道是西藏。所以有网友抗议她玩弄了观众，因为她没有把挑衅表达得更直白。
估计她反场后还是热烈掌声结束的。
还不如韩国女运动员举个牌子，“长白山是我们的”。
bjork这把实在不给自己长面子。这不是free tibet那种演出，立场摆明了，
明买明卖，开个唱玩这套属于夹带私货，玩观众，也对不住主办单位。
sonic youth也参加过free tibet的演出，前几年也到北京，上海演出，
没闹什么乱子，看他们blog中间游玩还挺尽兴的。不管sonic youth在西藏
问题立场，起码这几个人还是随和的人，到你国家了能去了解沟通，这样对人对己
都好。
999 |
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g**o
发帖数: 3033 | 11 哈哈，多谢，一查果然是有新专辑了。
sonic nurse的时候，我看过他们，非常非常好。
pearl jam太贵了，而且坐太远了，要我就不去。
sonic youth这个是小场子吗？多少钱？ |
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r*********e
发帖数: 29495 | 12 Music Heaven 美好的回忆
音乐天堂1~36的目录 Music Heaven Vol.1~Vol.362007-04-16 14:01Music Heaven Vol
.1
1 Everything I Do, I Do It For You - Bryan Adams
2 Pretty Woman - Ronan
3 Windflowers - Seals & Crofts
4 Rush Rush - Paula Abdul
5 I'd Love You To Want Me - Lobo
6 Black Or White - Michael Jackson
7 Tears In Heaven - Eric Clapton
8 Save The Best For Last - Vanessa Williams
9 Seasons In The Sun - Terry Jacks
... 阅读全帖 |
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r***u
发帖数: 1272 | 13 总的来说，DoTA是一个文化包容性很强的游戏，而且DOTA中文版翻译的还是非常非常好
的~~~
（既然这么多人看。。lz顺征人交流魔兽对战，是1v1对战喔）
后文会出现的一些常用缩写：
War3:warcraft 3 魔兽争霸3
RA：red alert 红色警戒系列
SC: star craft 星际争霸
CoD:call of duty 使命召唤
还有一些游戏的名称在文中会有注释。
好了，正文：
关于Dota和一些游戏中的GRE词汇
A字头
Abaddon ：DOTA中地狱领主的名字。本意为地狱，恶魔。是圣经里的亚玻伦 (地狱的
使者)。
abomination：war3中的憎恶。abominate痛恨，憎恶。
aegis：immortal aegis 不朽盾，同时aegis是汉化版的作者。在RA2中也有神盾巡洋
舰 AEGIS Cruiser。
acolyte：侍僧,教士的助手。war3中Undead的农民。
alacrity：blade of alacrity 欢欣之刃。alacrity还有敏捷之意，所以它加敏捷属
性就... 阅读全帖 |
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t******n
发帖数: 2939 | 14 ☆─────────────────────────────────────☆
thirdman (三蛮子) 于 (Wed Sep 18 01:37:36 2013, 美东) 提到:
中秋将至，水版举办吃月饼活动。
活动时间截止到2013年09月22日00时
活动内容：写一写有关中秋节、月亮的诗句、写愿望、写祝福。
活动规则：1、在此活动期间回复的都将得到一个包子作为奖励。
2、每个ID只能领取一次。
谢谢大家对水版的支持和厚爱！
☆─────────────────────────────────────☆
jinselan (景色) 于 (Wed Sep 18 02:00:59 2013, 美东) 提到:
海上生明月,天涯共此时。
中秋快乐！
☆─────────────────────────────────────☆
WuPeifu (两湖巡阅使、讨贼联军总司令吴佩孚) 于 (Wed Sep 18 02:45:43 2013, 美东) 提到:
秦时明月汉时关，
万里长征人未还。
☆────────────────────────... 阅读全帖 |
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f**********r
发帖数: 18251 | 15 【 以下文字转载自 Military 讨论区 】
发信人: ultraiso (goodman), 信区: Military
标 题: 美国众议院武装联席会主席谴责大陆高超音速导弹载具试射
发信站: BBS 未名空间站 (Tue Jan 14 13:28:37 2014, 美东)
http://armedservices.house.gov/index.cfm/press-releases?Content
Jan 13 2014
Committee Members React to Chinese Hyper Sonic Missile Test
McKeon, Forbes and Rogers weigh in
Washington, D.C. - House Armed Services Committee Chairman Howard P. "Buck"
McKeon, Rep. Randy Forbes (VA) and Rep. Mike Rogers (AL) issued the
following statement after learning of a Chi... 阅读全帖 |
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z***i
发帖数: 8285 | 16 算哭诉不算谴责吧。。
【 以下文字转载自 Military 讨论区 】
发信人: ultraiso (goodman), 信区: Military
标 题: 美国众议院武装联席会主席谴责大陆高超音速导弹载具试射
发信站: BBS 未名空间站 (Tue Jan 14 13:28:37 2014, 美东)
http://armedservices.house.gov/index.cfm/press-releases?Content
Jan 13 2014
Committee Members React to Chinese Hyper Sonic Missile Test
McKeon, Forbes and Rogers weigh in
Washington, D.C. - House Armed Services Committee Chairman Howard P. "Buck"
McKeon, Rep. Randy Forbes (VA) and Rep. Mike Rogers (AL) issued the
following statement after learn... 阅读全帖 |
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a***e
发帖数: 27968 | 17 红二真是营养好
[在 sonice (老好人) 的大作中提到：]
：据资料习总一米八
：【 在 sonice (老好人) 的大作中提到: 】
：........... |
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A*********e
发帖数: 4361 | 18 发信人: amweston (volleyball), 信区: Music
标 题: 好文章, 怎样录歌 (ZZ)
发信站: BBS 未名空间站 (Sun Sep 17 21:46:50 2006)
希望别人都可以网上听到自己翻唱的歌。怎样录下自己翻唱的歌，然后保存在网上，别
人点击就可以听到。
共 3 条
软件方面，主要用到cooledit，以下简称ce。还有几个插件。
cooledit pro 2.0（带汉化，注册机）
BBE Sonic Maximizer
Ultrafunk3（带汉化）Wave3.0效果包
下载地址：去网上搜一下吧.我这里也没有,呵呵。安装部分的说明：
ce的安装狠简单，一路next就可以了。安装完主程序后，运行汉化程序汉化。然后把
Cool.Edit.Pro.v2.0.KEY.SN.zip解压缩，里面有注册机cep2reg。复制到ce的安装目录
，运行，输入注册码。注册码在 nfo文档里，为了方便大家找我就直接贴出来行了：
Name: Peter Quistgard
Serial #: 200-00-37YQOQ7L
用这个注册后软件就没有限制了。而且是汉化... 阅读全帖 |
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a*****s
发帖数: 2663 | 19 COMCAST整一个温水煮青蛙，从N年前五十块（digital voice+internet）一点点涨，每
次promotion一过不通知就狂涨，然后就是说可以给你降，但是得下个billing cycle，
方正已经涨的那一两个月就能多收你五六十，然后还降不到以前的level，贵个5到10块
。每次都玩这个伎俩，甚至俺搬家都玩这套。更不用提，当初introduction 的$
250rebate压根没拿到。今天看到下个月104块，打电话无数遍，能给最好的“
promotion”就是降到85左右一个月。实在是让我出离愤怒了，决定试试sonic的fusion
。希望sonic不要让俺太失望，现在有点担心11000 wire feet有点太远。 |
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y**b
发帖数: 10166 | 21 不要删，体积很小，属于系统文件，被保护。
如果一定要删除，可以先关掉system restore。【 在 sonic (sonic) 的大作中提到: 】 |
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w*****r
发帖数: 239 | 22 never ya，偶做sonication是为了破细胞取蛋白，能长可不是偶的要求，
你的细菌是G+还是G-？用osmotic shock试试，我不知道这招对真核细胞好不好使，
而且对细菌也有影响，不过显然真核细胞不如细菌抗折腾，而且osmotic shock
只破细菌的细胞壁，破完不马上震荡培养还是能活一不分的，
假如你就是想把细菌分出来培养，不妨用sonication，不破那么狠就是了，
然后用平板，给点LB什么的，反正是你宿主细胞不长的media，试试看能不能筛出来
偶也不懂你的东东，仅供参考 |
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w*****r
发帖数: 239 | 23 stir well, dip the tip fully in the cell suspend, use medium output,
a little foam is ok, don't be too nervous. I have done it hundreds of
times, protein is much tougher than you thing.
if there is no activity, it means there is not, not because of
the sonication. By the way, e coli is not that tough, don't sonicate too
long, and keep all your stuff in ice during the whole procedure. As of my
experience, heating is a bigger problem than foam. |
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M*****n
发帖数: 16729 | 24 MCBJC Discussion for the week of 4/21
Sonic Hedgehog: A Morphogen and Axonal Guidance Cue
Hedgehog is probably the most well-known morphogen in embryo development. As a
multifunctional molecule involved in cell differentiation, cell proliferation
and tissue patterning, hedgehog's functions as a morphogen have been
extensively studied. However, recent studies about another morphogen - BMP
family revealed its involvement in repelling spinal cord commissural axons.
Thus the possibility that Sonic H |
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s******y
发帖数: 28562 | 25 我们需要homogenize 一批量很小的放射标志过的cultured cells,
并把chromosome DNA 打碎（好来做pulldown).
但是用sonicator 或者针头都不是很好的选择，因为sonicator 容易把样品
溅出来，而针头会有很多残留，不是很适合做quantitative analysis.
我知道有一些cell shredder的小管子是用来制备RNA sample的，可以把
细胞完全裂解。不知道有没有类似的东西可以用来裂解细胞制备总蛋白的？
有没有人知道？ 谢谢了！ |
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h**2
发帖数: 2841 | 26 我觉得你们实验室肯定有成熟的protocol，我这就给你一个我们的RIPA Whole Cell
Extracts protocol吧，用了20年应该不止了 hh
6-well为例
细胞用~1 ml chilled PBS洗一遍
加600 ul 冰PBS，用scraper刮下来，transfer to eppendorf tube
3000 rpm 4C离心3~5min，去上清
离心的同时准备RIPA buffer，我们用的是thermo scientific的Halt protease和
phosphatase inhibitor 100x cocktail
根据cell pellet大小加适量RIPA，一般35mm well的话65~120 ul差不多了，pipetting
up and down till the pellet dissolves，有的细胞蛋白或者DNA content比较高感
觉会比较粘稠，适量增加一点RIPA
拿去sonicate，break genomic DNA，program的话因sonicator而异，不过你不做ChIP
的话问题不大，每个tube s |
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t*x
发帖数: 1065 | 27 呵呵，谢谢详细的回复！
那我就用RIPA buffer试一下
不过像你说的，如果这种现象正常的话，估计换了buffer也应该差不多的趋势。:)
刚开始的时候没有用sonication，只是0.5%triton X-100 30min 冰浴裂解
后来听别人建议，加了sonication,发现跑完westernblot，结果很一致，都是处理12小
时之后，在镜下观察发现vacuole都消失差不多了，才看到lc-3II的增加
呵呵，我以为是开始时lc3-II在vacuole膜上镶嵌，没有裂解下来，而时间长了
autophagosome跟lysosome结合吞噬，lc-3II被从膜上释放出来，成为cytosolic形式才
能被我检测到呢，所以一直在找比较强的裂解膜上蛋白的方法。
你这样说，我就比较放心了，恩，非常感谢！
western |
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y******n
发帖数: 9 | 29 我做的ES cell没区别。
结果不好是Sonication不要还是PCR结果不好？
如果是Sonication, 片断太大还是太小？
还有Trpsin会不会影响了CHIP的蛋白的表达。 |
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f*********r
发帖数: 1233 | 30 这是个典型的例子，即便别人给了protocol，仍然不能重复。
几点建议：
1，DNase能不用就先不用。
2，loading buffer里先不要加bromophenol blue。或者不要加太多。至少要清亮，能
看到里面是透明还是混浊还是沉淀。
或者可以先用lysis buffer，处理完了再加浓缩的loading buffer。
3，pellet加上lysis buffer以后，不要用pipette打匀。而是直接用sonication冲击。
sonication是很强的，别说一个pellet，就是坚韧的大块骨骼肌组织，都能轻易打碎。
确认pellet被彻底打散并溶解了。
4，打碎以后离心，如果不理想可以考虑超高速离心。
5，取上清（这个时候应该一点都不粘了），加loading buffer，煮，跑胶。
6，如果条带形状扭曲，可以考虑把running buffer里面的tris含量酌情加量（2-3倍，
只要低分子量的蛋白仍然跑得开，跑不开的可以用4-20%的胶）。
7，如果还不太理想，可以考虑弃用glycin running buffer，改用taurin running
buff... 阅读全帖 |
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n***w
发帖数: 2405 | 31 趁着版上好几个问蛋白表达的问题，我也来凑个热闹，
新近表达一个蛋白，连上GST差不多116kD，昨天小试了一下，按照supernatant,
pellet的顺序，跑胶然后用gelcode
染，貌似大部分蛋白都是在pellet。
我不确定是不是真出现inclusion body了。
我没有在sonication前后留样品，所以我没法知道是不是因为sonication的缘故。
遇到过这种情况的给支支招。谢谢。 |
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n***w
发帖数: 2405 | 32 prepare samples from whole cell lysate, pre-sonication, post-sonication,
supernatant, pellet. |
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n***w
发帖数: 2405 | 33 Hi, all,
I am using Rosetta-Gami DE3 pLySs to expression my fusion protein which is
predicted as 91kDa.
I first did the expression assay and found protein expression was induced
after adding IPTG by testing the whole cell lysate. (bacteria at certain
time points, add 2X sample buffer, boil, SDS-PAGE).
Then I moved to culture more and lysed the cells using a sonicator, after
resuspending the pellet with 1x cold PBS/1% PI. After all these, I loaded
the supernatant and pellet side by side and stain... 阅读全帖 |
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s********n
发帖数: 2939 | 34 Then I moved to culture more and lysed the cells using a sonicator, after
resuspending the pellet with 1x cold PBS/1% PI. After all these, I loaded
the supernatant and pellet side by side and stained by GelCode and a bulk of
protein (I assume it was protein) was detected in the pellet part.
你有没有在supernatant中检测到你的target protein？如何检测的？WB or activity?
从你的表述你好像没有做WB。
Then I tried 1L culture and repeated the 2nd experiment. This time, I
incubated the supernatant with glutathione sepharose 4b beads an... 阅读全帖 |
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n***w
发帖数: 2405 | 35 Thank you guys.
I use PGEX2T vector so GST is on the N-terminus.
I normally do 100ml culture size. Here is how I did this:
1. small culture of the bacteria from glycerol stock O/N, about 6-8ml.
2. transfer the small culture to 100ml 2xYTA medium in the next day morning
, shaking at 300rpm, 37degrees.
3. it ususally takes about 1hr 40min - 2 hrs to have an OD600 around 0.75.
4. add IPTG (stock 100mM) 100ul to get a final concentration of 0.1mM.
5. Lower the temp to 22degrees and shake at 300 rmp... 阅读全帖 |
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C*******e
发帖数: 4348 | 36 虽然我们也用pH 8的条件做GST蛋白纯化
但是好像pH 7.4是最佳binding
tech support的人也这么说
说buffer什么的不重要
重要的是pH
你的bead会不会饱和了？
然后我还遇到过的是除了融合蛋白以外还有27 kDa的GST-tag only表达
表达的还挺多
然后跟我的融合蛋白竞争
很容易就把柱子饱和了
哦，还有一个
你提到你的蛋白是inclusion body
我没用过N-lauroylsarcosine
如果好用的话回头汇报一下哈
不过我遇到inclusion body的时候用过Pierce的B-PerII
很好使
结果大部分都变成可溶了
当然我的那个例子比较极端
光用sonication是大多数都在pellet里
用B-PerII加sonication以后大多都在上清里
我一升的e.coli居然提了快100 ug的蛋白
% |
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m******5
发帖数: 1383 | 37 sonication的设置被人改过没注意到，在dilution buffer（也就是immune
precipitation 反应的buffer）里取了一部分跑电泳，发现genomic带很清晰，smear分
子量都很大，并且很黯淡，这种情况下能在dilution buffer里紧急大功率补sonicate
一下么？非常感谢！！！！ |
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z*******a
发帖数: 175 | 38 one more ChIP person, I would avoid ChIP whenever I can.
my comments on your questions.
0 sonication 的smear是RNA, 用RNase处理DNA is necessary
over fixed or sonicator is broken |
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v*******3
发帖数: 119 | 39 CHIP已经作了块3个月了,
全程基本自己摸索
用的是cell signal chip kit及抗体,新鲜
问题一直在:
预实验作了很多,IgG (negative control) and H3(positive control) 有显著差异,
但是其它磷酸化组蛋白与转录因子均与IgG类似或者持平或更低
2. 实验用的是 1% formadehyde固定10分钟,全程按照kit说明书来,而且适当改进重要
步骤(如 increase cross link reverse time, 减少洗得次数)
3. 用的都是全都是cell signal 抗体, 并在非 cross link情况下，用WB证实可用
4. sonication后电泳证实DNA片断200-1000 bp间,符合要求，无气泡
所以现在我自己的猜想:
1. cross link mask the epitope of antigen, resulting no antibody binding
2. 1% formadehyde is too low, should increase to 1.5 or 1.8 %(... 阅读全帖 |
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s******s
发帖数: 13035 | 40 所以我觉得有运气的因素。
做ChIP类得，sonicate成monomer, 基本上两头有个一二十bp的free dna
顶多了吧，不太会有几百。感觉上可能是因为telomere那里可能是一堆
蛋白+DNA团在一起，sonicate不开。如果是这样的话，这个PiCH可能不容
易在其他普通的chromatin上做 |
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w*********n
发帖数: 439 | 41 应该是做sonicate不够， 刚sonicate完，取５ｕｌ做ｓｉｚｅ检查的时候没发现。
CHIP做完了才发现。 |
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d****7
发帖数: 109 | 42 Based on the picture of 2% gel, there are two population in your sample,
which indicates insufficient sonication. Do a size selection to have a look
whether you can get enough material.
You might want to re-do the experiment and do a time series of sonication to
check. |
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w*********n
发帖数: 439 | 43 应该是做sonicate不够， 刚sonicate完，取５ｕｌ做ｓｉｚｅ检查的时候没发现。
CHIP做完了才发现。 |
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d****7
发帖数: 109 | 44 Based on the picture of 2% gel, there are two population in your sample,
which indicates insufficient sonication. Do a size selection to have a look
whether you can get enough material.
You might want to re-do the experiment and do a time series of sonication to
check. |
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t**********8
发帖数: 223 | 45 我想买一个enzymatic shearing的kit试试，用来替代sonication，因为我要chip的
complex太大，sonication效果很不好。但实验室另一个postdoc认为enzymatic
shearing会把dna切得太小，会miss掉很多东西，他认为这个方法只适合chromatin
modification。
很纠结，不知道是否值得一试。 |
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l*****i
发帖数: 1163 | 46 1-3是刚刚Sonication之后的DNA（冻在－80有一个星期）。条带太大，可以延长
Sonication时间么？范围窄要怎么解决？多谢！
CHIP下来的DNA太少是不是基本没救了？我用的是Millipore的CHIP Magana kit，是不
是被坑了？ |
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h*j
发帖数: 77 | 47 1。 你们co ip precleaning多长时间？ 我们实验室要3hr 在4度 rotate 是不是太长
了？
1小时足够了。
2. 加了IP lysis buffer 以后你们会用sonicator超声一下吗？ 还是就是直接放冰上
放个30-40min？
两种方法都可。如果真是associated, sonication不会有影响。直接放冰上放个30-
40min常常裂解不完全。我用1ML的胰岛素注射针抽吸10次也可。 |
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g*********3
发帖数: 177 | 48 做好chip的关键其实就是sonication+antibody。哥们，你肯定没有仔细读过manual，
如果不肯花时间，还是找个人带吧，或者问有经验的。
1. 你如果读了bioruptor的manual，发现0.1%SDS绝对起不了作用的（甚至他们有专门
卖0.1%SDS的special kit for sonication），因为0.1%太弱了。当然branson的那种
probe，0.1%够了。
2. 单纯考虑多少cycle有意义吗？293和hepg2的cycle完全不一样。不过你用0.1%可能
需要100cycle 都有可能。
3. 30seconds on？？？？你这能有好结果吗？多查查protocol，一般都是10ON+30-40
OFF
4.絮状物？你知道是什么吗？lipids！这个很常见。尤其是你的SDS不够。另外lysis
buffer/cell也不对。 |
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k*****n
发帖数: 323 | 49 try washing your Dynabeads with PBS 0.5% BSA 3 times, then incubate
antibodies in PBS-BSA for two hour. After IP, make sure resuspend beads
totally during each washing step. I never using sperm DNA. I would suggest
you using Pol II monoantibody 4H8 as positive control. Several steps are
critical for ChIP, 1, crosslinking, always using fresh FA, like 16% FA from
Thermo. for cells 15 min crosslinking with rotation would be enough, quench
with 0.125 M glycine for 1 min. 2 sonication, try Branson so... 阅读全帖 |
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