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C*****5
发帖数: 8812 | 2 看A股这走势，明天YTD估计就成正的了。再等几天看看，反正206也快到了。到时候再
看看SDS要怎么处理吧。 |
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h*******n
发帖数: 8906 | 3 拉倒吧 作为上海人对你的天天房产证行为艺术实在是表示汗颜
你的操作就更艺术了 满仓sds的时候金大妈苦劝不听 现在说你接盘高位权重股又不听
你就等着不停割肉吧 |
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l*w
发帖数: 567 | 5 SDS 应该是安全的。
总会赚钱的。
S&P再高，还能高到哪儿去。
它在高一点，我也准备烧一点。 |
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B*******n
发帖数: 20645 | 8 诗人加了些SDS＠１８。８２不怕一万，就怕万一。
拿，顺便把KMI清了一半＠１８。８ |
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S*********g
发帖数: 24893 | 9 ALL IN SDS!!!!!!!!!!!!!!!!
NOW!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!
2800% profit in 2 weeks!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!
THE TIME IS NOW!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!
FUCK!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!
YOU WILL GET SO RICH!!!!!!!!!
in PROF XXR we believe |
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M****e
发帖数: 70 | 11 throw in a couple of points:
when you run an SDS-PAGE, you try to fractinate the protein
by the matrix of acrylamide. so the qualities of both the
gel and the samples are important to determine migration.
basically, do not use gels that have been stored for a long
time, use fresh AP and high-quality of acrylamide to make a
PAGE gel, giving long time for the bottom separation gel to
polymerize; or, just buy a commercial gel from BioRad, either
non-gradient or gradient (this one seems to be better |
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l*******u
发帖数: 14 | 12 The interaction between streptavidin and biotin is as strong as a covalent
bond and can not be broken by SDS boiling. |
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l******e
发帖数: 14 | 13 困扰很久了，请教大家：
两个蛋白，一大一小，如果大的紧紧抓住小的的，在正常的SDS胶上无法分开，那么其
显示的条带大小是相当于两个蛋白相加还是和比大蛋白略小（小的拽着大的往前跑）呢
？ |
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j*******8
发帖数: 933 | 14 Thank you for your reply!
But we can't use 1% triton. because the PSD fraction is not sollulable in 1%
triton.
anyway, it's good to know that 1% SDS is not goog for IP. thank you! |
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a***e
发帖数: 1010 | 15 Gene Bio-application LTD has a kit to remove bound SDS
#pds010 |
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m****m
发帖数: 395 | 17 都是叫我用KIT啊。。我看了前辈们的PROTOCOL，不是用KCL，就是用硫酸铵 除SDS，就
是没把KCL的量写清楚。。。
前辈们都走了，苦啊。。。 |
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m****m
发帖数: 395 | 18 看到一篇文章说SDS可以让蛋白达到一种中间结构状态，以帮助其最终的折叠。
有没有这种事？ |
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F******y
发帖数: 1988 | 19 刚试了一次Tris-Tricine SDS-PAGE先跑了一下protein marker
效果不好，想直接贴图上来，继续向大家征求建议。 |
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i*********t
发帖数: 78 | 20 add SDS in trnasfer buffer. |
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e********r
发帖数: 147 | 21 最近在用Co-IP的方法检测细菌细胞内的蛋白磷酸化水平（32P标记）。最后洗完
Protein-A agarose后，加2 X SDS上样缓冲液，如果直接吸一是太粘吸不出来，另外这
样的缓冲液里也没蛋白信号（文献上说37度处理5 min，试过不行，难道beads用的不一
样？）。如果100度煮5 min倒是能把蛋白从protein-A agarose上分离下来，但预实验
表明100度处理大概会使50%的磷酸化蛋白信号消失。请问做体内蛋白磷酸化检测的朋友
，还有别的什么着数可以用吗？ |
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Z******5
发帖数: 435 | 22 我们一般都是跑完后把内外液混到一起，下次做外液用。内液每次都用新的。
如果是重要实验，全部用新的。
其实就是点甘氨酸，Tris，SDS，都很便宜。最主要的是不用去调pH，配制非常方便，
1L 5X 的就可以用五六次实验。 |
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J**Z
发帖数: 105 | 23 To detect a 250KD protein, what concentration of SDS-PAGE gel should I run?
Do I need a stacking gel? If yes, what concentration?
Thank you so much! |
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s******y
发帖数: 220 | 24 如果不dialyze的话，有别的方法吗？
查了一下，好像sds在的话，浓度高或者低都会影响bradford assay，我们用的这个
assay。
有别的办法吗？
测浓度做定量的WB。
谢谢。 |
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y******8
发帖数: 1764 | 25 If only SDS and salts, measure the OD 280. Make sure using the same buffer
as blank. A rough way. |
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l******a
发帖数: 3339 | 26 detergent compatible BCA assay?不知道对于SDS浓度比较高的情况work不work。 |
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h*******o
发帖数: 4884 | 27 Biorad Protein assay, compatible with 0.1% SDS. |
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s******s
发帖数: 13035 | 28 嗯，这个是标准。用过所谓的sds-compatible kit, 叫啥RC-DC一类的，
ms第一步就是TCA precipitation |
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s******y
发帖数: 28562 | 29 啊？那这个kit岂不是耍赖皮么？都把蛋白沉淀了重新溶解，那还算什么
sds-compatible？ |
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A******d
发帖数: 571 | 30 倒是准确，不过工作量大了点。
不能就bradford,用含sds的buffer作blank吗？ |
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s******y
发帖数: 28562 | 31 工作量不大啊！不就是跑个胶染个色么。最多５个小时就更搞定。
bradford也必须做标准曲线的。
大部分市面上卖的bradford kit 不能用在超过0.1% SDS的场合 |
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y********g
发帖数: 22 | 32 BCA assay can tolerate SDS<5% |
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s******y
发帖数: 28562 | 33 http://www.piercenet.com/browse.cfm?fldID=02020104
Substances compatible with the Thermo Scientific Coomassie Plus Protein
Assay. The following is a short list of compatible substances and their
concentrations that the BCA Protein Assay can tolerate. For a more complete
list please refer to the instruction booklet for the product or view our
Table of Compatible Substances for a comparison of substance compatibilities
among several different protein assay methods.
Substance Compatible Conc. ... 阅读全帖 |
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o*****r
发帖数: 156 | 35 measure the intensity of the dots, similar to the band of stained SDS gel or
WB on the film.
One software is Image J. |
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s*********t
发帖数: 600 | 36 是跑好的胶还是做好待用的？
前者，泡在水里能放一两个月，温度无所谓。最好做成干胶，可以保存数年。
后者，用湿润的纸巾和保鲜膜包好放在4度，可以保存一个月。时间久了会看到一些SDS
析出。不影响使用。 |
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h**********r
发帖数: 671 | 37 定量SDS-PAGE表达的条带有什么free的软件啊？就是想看看特定的条带占总量的百分比
之类的。多谢！ |
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b**********8
发帖数: 349 | 39 谢谢回复，请问SDS溶液配置好以后能否autoclave？我怀疑黄色的东西是长菌了 |
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M********r
发帖数: 23 | 40 10%的SDS能长什么菌....太牛了这菌。。。。 |
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x********u
发帖数: 430 | 41 I have been running SDS-PAGE several times and cannot get clear band for low
molecular proteins. Any suggestions will be highly appreciated.
Attached is a gel picture I just took yesterday. (12% resolving gel and load
50 ug total E. coli cell lysate proteins). |
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x*****o
发帖数: 441 | 42 用tricine sds page好像对分子量小的蛋白效果比较好.
low
load |
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D*a
发帖数: 6830 | 43 我们也在摸条件，前几次用的16.5%的SDS-PAGE跑6KDa的蛋白。有条带但是比较粗，下
边的smear不知道是什么。
今天同时用了4-20%梯度的，梯度的明显跑的好，第一次看见marker的4kDa的带。以前
16.5%看不见这条带。
等结果出来再上来汇报汇报。 |
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w********r
发帖数: 1431 | 44 加点甘油就沉了。在外面开会记不住具体配方了。放狗搜一下吧。大概是TE6.8，甘油
，SDS,Beta-me,然后根据自己的口味dye适量 |
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n***w
发帖数: 2405 | 45 这是我们用的5x配方
For 50ml 5x
Na2HPO4 0.31M (2.22g)
Glycerol 50% (25ml)
SDS 10% (5g)
B Blue 0.005% (just little with spatula) (0.0025g)
DTT 300mM (2.3g) |
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d****i
发帖数: 2346 | 46
我用的是这个：
Stock Final 10mL 50mL
SDS 8% 0.8g 4g
Tris (pH6.8) 0.5M 0.2M 4mL 20mL
EDTA 0.5M 4mM 80uL 400uL
Glycerol 100% 50% 5mL 25mL
Bromophenol Blue 4% 0.4% 1mL 5mL
glycerol也是50%啊。是不是加点sucrose会更好。
另外，你这个还有Na2HPO4，第一次见到。 |
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v********a
发帖数: 646 | 47 我们现在都是用的invitrogen的precast胶做WB
用的BUFFER也是Invitrogen的
但是跑出来的带
每个人之间区别很大
有人也许或说样品处理不一样
但是同样的marker，不同的人，在同一块胶上跑出来却有很大差异
有些人跑出来的marker，像公司的广告一样
有些人跑出来的marker，像国内实验室时那样的熊样
请问，如何能提高蛋白质SDS-PAGE胶的分辨率呢？
求大神指点。
谢谢。 |
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v********a
发帖数: 646 | 48 各位，我各种PAGE胶都跑过，什么native PAGE, Urea PAGE， SDS-PAGE。
蛋白质电泳，我都是用的Invitrogen Gradient gel
跑电泳之前，我都是用DPBS洗洗wells
我会用一点loading buffer pre-run 10分钟
自己感觉细节都注意到了。但是就是不明白为何跑不好。
最近在分离一个RNA结合蛋白，需要很高的分辨率，才能截获目的RNA。
多谢路过解答的各位。 |
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D**A
发帖数: 311 | 49 想问一下如果sds-page silver-stained，然后再destain，之后里面的蛋白还稳定吗？
可以在4度下放多久？还可以用来跑mass spec吗？
同样的，如果是coomassie blue stained gel, 稳定度一样吗？
谢谢！ |
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r******k
发帖数: 446 | 50 小弟最近做一个蛋白的磷酸化 以为没有特异性的抗体。 只能IP total的protein 然后
用Pan-Tyr。 但是这个磷酸化总是出不来。班上有大牛说用预热的（90度以上？）SDS
loading buffer 挂下来以后直接boil再稀释10-20倍做IP。 但是有一个问题，10cm的
dish怎么也要用500ul的loading buffer scrape下来吧？ 那也无法稀释了呀？
难道先用pbs刮下来？？ 而且这个PBS是冰的把？而且还有protease inhibitor 还有
phospho-stop？ |
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