i******m
发帖数: 495 | 1 I use Qiagen maxi and it works perfect.
BTW, I use QIAGEN not Qiafilter |
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E****A
发帖数: 184 | 2 没用过promega，但用过qiagen和invitrogen的，发现qiagen的kit提出来的rna都特别
漂亮 |
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s******y
发帖数: 28562 | 4 EZ BioResearch 的柱子是可以和qiagen 的混用的。
我们用过，效率其实比qiagen的还稍微高一些。
kit |
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r******y
发帖数: 21907 | 6 我们用macherey-nagel的，一德国公司，column buffer都可以单独定，也适用qiagen
的buffer,已经弃qiagen了。
kit |
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w********a
发帖数: 324 | 7 一直以来的一个问题：
PCR产物如果用Qiagen kit切胶提纯后，再作为Template,用Neb的Q5或者Phusion继续做
PCR （尤其条带比较长的时候），经常做不出来。打电话问了一下Neb的technician。
他们说他们也发现了这个问题
。他们觉得可能是Qiagen kit提纯后，最后的elute里面有某种inhibitor影响了后续
PCR的反应。但是他们也没有想出有效的办法来解决这个问题。
不知道版上的牛牛们有没有遇到类似的问题？是怎么解决的？另外，有别的公司的Gel
extraction kit会避免这个问题吗？
多谢！ |
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l****e
发帖数: 157 | 8 用了很多年Qiagen的DNA miniprep, midiprep, PCR purification, and gel
extraction kits。最近才发现有其他公司的替代产品，比如Zymo 和 Purelink，要比
Qiagen便宜很多。哪位用过的给个意见？质量上是否一样可靠？谢谢先！ |
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D**A
发帖数: 311 | 9 Qiagen 质量最好，yield也最高，其他的也凑合。但是如果你要用提的dna做生化实验
，还是建议Qiagen. |
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s*******w
发帖数: 1879 | 10 我觉得如果是作为一个reagent的reference什么的可以用，这也算contribution啊。但
是大吹特吹就比较难了，除非你能找到qiagen的人给你写推荐信。 |
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d*****r
发帖数: 2583 | 11 ☆─────────────────────────────────────☆
Genemo (猜猜) 于 (Wed Jan 7 17:20:41 2009) 提到:
用Qiagen miniprep kit抽质粒
质粒大小 11.4kb
最后几乎没有产物
不知道是没有挂到柱子上还是挂太紧洗不下来了
不过很奇怪
不知道大家有没有遇到过
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CAMS (computer aided manufacturing system) 于 (Wed Jan 7 17:24:36 2009) 提到:
kit里面的各种溶液按照要求配好了吗？
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ppri (小地主) 于 (Wed Jan 7 17:29:26 2009) 提到:
恩，洗柱那一步的酒精加了吗?
11.4kb 大小是肯定没问题。
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iNGOR (葛大爷| 少灌水，多学习 |
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C*******e
发帖数: 4348 | 12 Qiagen Mini Prep很好用
可是Midi Kit我用过很多次了，没有哪次能成功的
提出来的量如果计算ng DNA/ml culture的话比Mini Kit少了近10倍啊
搞得我还不如Mini提好多，然后乙醇沉淀呢
可是每次看到有Midi Kit放在那里闲置，又会觉得是不是该物尽其用
版上经常用Midi Kit的来说说有没有什么trick？
我是严格按照protocol做的 |
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R*****w
发帖数: 447 | 13 mini你也用P1,P2,P3的吗？
QIAGEN有种QuickLyse Miniprep Kit比这种快多了。我强烈推荐这种Mini kit。 |
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r*****m
发帖数: 231 | 14 P3不放冰箱没关系，但用成N3就肯定不行。。。
难道你们整个实验室都没这个常识？
另外mini和midi其实根本没有可比性，column构造差太远了吧。。。不能因为都是
qiagen出的kit就拿来比吧。。。 |
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s******s
发帖数: 13035 | 15 1.首先你要保证你大瓶摇出来的菌和小摇出来的有一样多的质粒，
用大摇的菌取出来小抽一下看看？
2.不放心iso-pro沉淀的时候－70放一个小时先
3.强烈建议用50ml falcon tube做收集离心，干净，pellet清楚
注意速度不要超过6k，可以时间延长一些
Qiagen的Midi简直是最好的plasmid kit, 质粒绝对干净。以前实验
室做transgenic fly, 只有这个做出来的质粒打embryo不会有很高的
致死率 |
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s********n
发帖数: 2939 | 16 我用的是QIAGEN Plasmid Plus Midi Kit，效果很好，P3不用放4度，最后用100-200
ul的EB洗脱，low copy的质粒可以得到大概300-600 ng/ul，不用浓缩。 |
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s********n
发帖数: 2939 | 17 Protocol比较简单，不用沉淀浓缩。具体的你可以查一下Qiagen的manual。 |
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s*****g
发帖数: 7857 | 18 N久以前提过植物蛋白.因为植物有细胞壁.比动物细胞难以破壁.因而要加BUffer在研玻里
磨/破壁, 然后再用纱布过滤掉胞壁等物质.再提蛋白或核酸.
只是没有用过QIAGEN的miRNeasy Mini Kit.(当时都是自己配的试剂) |
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n**********s
发帖数: 228 | 19 刚engineer了一个bluescrppit 的质粒，大约17k，用Qiagen的常规大抽试剂盒，就是
过柱子那种，结果试了几次yield都很低，只有三十来微克，不知道原因是啥，同样的
试剂盒抽14k的质粒还好好的，
变懒了，上来问问大家这种stupid的问题，怎么能提高yield？换试剂盒还是自己配试
剂抽提？ |
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n**********s
发帖数: 228 | 21 不好意思是没详细说，
是连接克隆，转化用的XL-10 gold，扩增没有什么问题，小抽都能抽到质粒，鉴定也正
确。
唯一不同的是，小抽的时候没用Qiagen的miniprep柱子，因为抽不出来，我都是用的S1
TO S3 buffer加乙醇沉淀提出来的，10k以上的质粒我基本上用后者
现在想既然扩增没问题，是不是同样的方法大抽也可行？不过柱子是不是杂质很多？以
前听人说，很久前大家用什么纱布之类的用于大抽时过滤用？ |
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n*****e
发帖数: 119 | 22 我的质粒23kb，qiagen小提大提都没有问题。但是xl-10gold细胞在我这不行，我用的
是stratagene的sure cell。
S1 |
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e*****n
发帖数: 15 | 23 哎，都博士二年级了，还问这样的问题，真不好意思
我是用qiagen blood & tissue kit 提brain tissue的DNA，~ 20 mg， handbook上面
说 brain tissue的话25mg 的DNA 产量 15 ~ 30 ug， 那理论上我应该得到12 ~ 24 ug。
但是我做了几次，最好的那次是200ul elution buffer，浓度 ~ 30 ug/ml, DNA 总量
是6 ug。
今天又做了2个sample，200 ul elution buffer，浓度只有10 ug/ml, 再用新的100ul
elution buffer, 浓度~10 ug/ml， DNA 总量大概只有3 ug。跑了一块胶，可以确定是
有DNA的。
实在想不出来是什么原因。 我disrupt tissue的时候是用23 G的needle做的，然后加
proteinase K消化了6个小时，液体很澄清，应该不会是消化的不好吧。很简单的实验
，就是做不好，哎。。。。
Sample比较珍贵，不敢再做了。。。希望大家能帮我一下啊，谢谢大家！！ |
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d****i
发帖数: 2346 | 24
QIAGEN公司里的技术支持来我们这里讲座读 kuai zhen |
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O***n
发帖数: 13127 | 25 re,
Rep for Qiagen before |
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s******y
发帖数: 28562 | 26 这个你确定么？
我以前用简单的Qiagen RNA extraction kit 的时候是不能排除掉plasmid的，
因为plasmid上没有核蛋白结合着，所以不会和蛋白一起变性沉下来。
不过因为我从来不用Trizol （窘了个窘），所以对此没有经验。 |
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z*******6
发帖数: 679 | 27 学习了，刚刚order了Qiagen的kit... 最近在做，一直用的Trizol，发现味道太大而且
提小组织感觉yield不是很好... |
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A******y
发帖数: 2041 | 28 Actuallly in my experience, it is very good at getting rid of DNA without
the DNase step. However, I still do it though. The old kit instruction (7+
year) actually tell you to do the DNase step for 30 minutes in 37C. The
new Qiagen kit told you not to do it. |
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s******s
发帖数: 55 | 29 试了很多条件，用qiagen的gel extraction试剂盒在220nm处总会有吸收峰，
absorbance强度在2.0左右 (nanodrop) 。
网上查了一下据说是盐没有除干净，但是试了两次PE wash和加PE后放置更长时间，都
没有改善。
请教有什么方法可以去掉这个220nm吸收？ |
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s*******e
发帖数: 1389 | 30 搭车问，我同时用Qiagen RNA mini kit提WT和mutant动物肠子的RNA，
已经三次了，每次mutant的RNA nanodrop 260:230<0.5 （WT 260:230>2)
这是为什么？难道mutant肠子中有特别的东西？ |
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l**********1
发帖数: 5204 | 31 next try gentleMACS™ Octo Dissociator
RUN four WT and four Mutant on the same dissociation/RNA extraction
then use Qiagen RNA mini kit
then compare WT and Mutant sample OD value
PDF link:
HTTPS//www.miltenyibiotec.com/~/media/Images/Products/Import/0002000/
IM0002018.ashx
18,600 usd/unit
or small type: gentleMACS™ Dissociator
HTTPS//www.miltenyibiotec.com/~/media/Images/Products/Import/0001600/
IM0001677.ashx
5,700 usd/unit
or contact details:
HTTPS//www.miltenyibiotec.com/en/About-u... 阅读全帖 |
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q***7
发帖数: 144 | 32 你那测出来的都是洗液(总称solvent)。后面会影响到反转录酶的活性。如果每个样品
的浓度不一样，你做qPCR时，要调成一样的浓度，这样你做反转录的每一个样品的反应
液里含有的洗液浓度就不一样。不一样的洗液浓度，抑制反转录酶的程度也不一样。这
样你最后出来的qPCR结果肯定不准确。有的样品里表达低，可能是因为洗液多而抑制了
反转录酶造成的，而不是真正的表达低。如果你同一组的样品，有的表达高，有的表达
低，一般都是这个原因造成的建议你试一试这个公司的KIT，而且还可以同时检测小RNA
。便宜又好用
http://www.greenbioresearch.com/mitotal-rnamini-using-qiagen-ki |
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p**********t
发帖数: 2636 | 33 ExoSap便宜省事。我们都是稀释10倍，每管15ul的PCR加2ul稀释后的ExoSap
然后测序。比QiaGen的column省时间多了。
ExoSap买一管才37块钱可以clean up 200个PCR |
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w********a
发帖数: 324 | 34 Qiagen kit 经常是column用完了，但是还剩很多buffer。
Miniprep kit 的column是可以单独定的。但是PCR clean-up或者Gel extraction kit
的column不能单独定。不知道大家是怎么处理的？有其他公司的column可以作为替代品
吗？
多谢！ |
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G*******a
发帖数: 414 | 35 buffer是Qiagen额外送给你多的，剩下直接扔掉就可以了。 |
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r******g
发帖数: 600 | 36 You can order columns and make the buffer on your own. All recipes are very
standard and available from Qiagen site. My homemade QF, QC, P1, P2 always
work well. |
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w********a
发帖数: 324 | 38 似乎这个公司的kit和column有些小贵啊。。
qiagen |
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r******g
发帖数: 600 | 39 我就用碱法提啊，并且还挺好用呢~ 比如我上次screen了50个克隆，你想想，要是用
qiagen柱子，这一下就要花几十块，我用old school的方法，省了不少钱，也多花不了
多少时间~ 其实我也就是帮老板省点钱呢！
我一般是确定了clone以后，再用柱子来purify for sequencing
我们实验室，也从来不要gel extraction, 我也是用的old school dialysis tubing
purification的办法~ 挺好用的，只要实验work，什么办法都是好的！
其实用old school的办法，可以搞明白到底technique是怎么work 的啊，有问题的时候
，比较容易troubleshooting！ |
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x********e
发帖数: 35261 | 40 zymo 我再也不用QIAGEN的胶回收kit了，各种问题
Gel |
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X***l
发帖数: 456 | 41 你可以试试clonetech的，我觉得比qiagen的好，至少我用从来没出过问题 |
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s******s
发帖数: 13035 | 42 我说了有20遍了，qiagen gel extraction以后，通通过一遍minElute浓缩换buffer
Gel |
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w********a
发帖数: 324 | 43 你是说搞两遍吗？一般的Qiagen gel kit搞一遍，再用MiniElute的column搞一遍？
钱啊！MiniElute kit好贵啊！ |
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H*g
发帖数: 2333 | 44 PCR产物为什么要用切胶提纯，而不直接用Qiagen PCR Purification Kit提纯？
Gel |
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M******g
发帖数: 152 | 45 Probably you got too much salt in your DNA after the qiagen gel kit.
Use PE washed twice and in each PE wash, after you add PE, let it stay for 2
-3 min before you spin. |
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x********e
发帖数: 35261 | 46 话说Tiagen是山寨版吗？我在国内用得也挺好，上QIAGEN死活有问题。 |
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H*g
发帖数: 2333 | 47 It may be due to the remaining agarose and its residues in the elution. Try
Qiagen PCR Purification Kit to purify your products. It may solve your
problem.
Gel |
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s********r
发帖数: 312 | 48 Zymo的miniprep的yield比qiagen的低20-30%，但也肯定够用了。他们的pcr和gel纯化
kit很好用，可以用很小的体积elute，做克隆非常方便。 |
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z*******9
发帖数: 112 | 49 今天实验室打扫，不知从哪个犄角旮旯里翻出一个几乎没用的QIAGEN Plasmid Plus
Maxi Kit，看了看他的简介，貌似真够省时间的，我也想试试，
有没有用过的同修可以科普一下他的坏处，或者要注意的，
谢谢 |
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b*********b
发帖数: 64 | 50 I use QIAGEN Plasmid Midi kit. 100ml culture could give about 30-50ug. I
tried Qiagen's large construct kit.But in my hand, the midi kit is much much
better than the large construct kit, and also takes much less time.The
following is the protocol I got from Qiagen.
User-Developed Protocol:
Isolation of BAC DNA using the QIAGEN® Plasmid Midi Kit
This procedure has been adapted by customers from the QIAGEN® Plasmid
Midi Kit Protocol.It has not been thoroughly tested and optimized by QIAG... 阅读全帖 |
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