r****o
发帖数: 105 | 1 PVDF(Polyvinylidene fluoride) 膜 和硝酸纤维素(nitrocellulose)
膜都具有孔状结构，通过疏水作用把蛋白质固定起来。问题是要使蛋白质
转移到孔状结构里面，需要孔状结构里面充满缓冲液才行。一般的水溶液
根本无法直接充满这些孔状结构，需要先用有机溶剂浸泡，然后逐步置换
成最后的转膜缓冲液。
硝酸纤维素膜疏水性不是很强，所以在转膜缓冲液里加甲醇就可以了。
PVDF疏水性很强，所以一定要先用纯甲醇浸泡十秒钟，然后趁其未干时，
马上再用水和转膜缓冲液浸泡，进行置换。
PVDF的优点是机械性能好，比较耐磨损。 |
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s*****3
发帖数: 41 | 2 Colloids Surf B Biointerfaces. 2014 Jan 1;113:176-81. doi: 10.1016/j.
colsurfb.2013.09.007. Epub 2013 Sep 12.
Membrane surface functionalization via theophylline derivative coating and
streptavidin immobilization.
http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0927776513005
另外，有人用 streptavidin包被 PVDF平板来做elispot么 ？ streptavidin能很好地
coat PVDF membrane么 ？
谢谢 |
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p***k
发帖数: 6 | 3 PVDF will relase HF in certain organic solvents and in base. the conjugated
double bonds lead to deep color even at very low concentration. Certain
Solef PVDF grades have branch chain structures and are more stable than
others. |
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f***r
发帖数: 204 | 4 还在与PVDF战斗中，再次请教有经验的虾们：
终于看到了条带，但是巨多非特异带，比我要的带都强得多。在网上查到多家western系
统的trouble shooting，里面提到的好几条关于high background的建议让我大开眼界，
又困惑非常，因为矛盾很多：
1. 关于tween的使用：有一家建议blocking之后才用tween，否则tween会stick to the
membrane and cause high noise；但很多常规方法都没有提到这一点。
2. 关于blocking reagents和ab incubation buffer：有说dry milk能reduce
sensitivity，所以如果只用在二抗incubation就能很好降低noise，但也有很多全程用dr
y milk的，也有说dry milk与tween联合使用会提高noise的；有说BSA会造成高背景的，
也有说用BSA可以获得理想信噪比的……
3. 关于ponceau s染色：这次为确证transfer有效，用了ponceau s染色，但发现有资料
说ponceau s就算洗干净也会 |
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e**e
发帖数: 16 | 5
much
It does not matter if you use NC or PVDF although I like NC from S&S.
PS staining did give some background when it was not rinsed enough. If you use
heavily diluted PS and rinse with 10X TBS for short time, it is very easy to
get rid of it with no loss of protein.
Skim milk is working fine in most cases and cheap, so we love to use it and so
far no problems.
To get better specificity and less background, you may incubate with 1Ab as
less as it works at 4C o/n, also for the 2Ab. If you use |
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w******y
发帖数: 2504 | 6 The PVDF WB membrane was first probed with several different antibodies and
stripped between each probing, then it was stored in TBST. Yesterday, I
tried to probe for another target protein, seems like this old membrane dose
not work any more even if I probed with the antibody that worked on this
membrane. Any suggestions for this situation? Thanks. |
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s******y
发帖数: 28562 | 7 MCE (mixed cellulose ester) 是给含蛋白的溶液用的
NYLON, PTFE, PVDF 都不能用在含蛋白的溶液上，具体要用哪一种要看你
是不是要过滤有机溶剂,如过只是一般的水溶液而且不含蛋白，那么随便哪个都行。 |
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x*******i
发帖数: 32 | 8 Hello Expert:
PVDF will become yellowish if it contacts with NaOH solution for a long time
. A deeper yellow will be obtained under high temperature, such as 90 degree
and five minutes. Any expert can explain? |
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d****n
发帖数: 237 | 9 我现在已经将N, N-dimethylaminoethyl methacrylate (DMAEMA)
接枝到PVDF上，本来是想把它溶到一种溶剂中，然后刮膜。但是现
在遇到了麻烦：我一共试了NMP,DMF，DMSO和DMAc，但是在大约10%
的浓度时候都是形成了凝胶，（共聚物接枝量经元素分析大约12%），
太低是根本形成不了膜。
各位给个意见，谢了先。 |
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x*******i
发帖数: 32 | 10 Hello Expert:
PVDF will become yellowish if it contacts with NaOH solution for a long time
. A deeper yellow will be obtained under high temperature, such as 90 degree
and five minutes. Any expert can explain? |
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g*o
发帖数: 769 | 11 今天又试了下，终于转成了，不过具体原因还是不清楚
1. 换了海绵 （not likely the reason）
2. 倒掉了soak海绵的old transfer buffer，用了新buffer （not likely the reason)
3. 用了新裁的一块硝酸纤维素膜，和一张MeOH浸泡过的PVDF （maybe this is the
reason)
4. 和小胖分用不同电源，减少干扰的机会
回楼上，电源的可能性不大，原因：
1. 我用同一个电源跑胶就好好的，电源本身不该有问题
2. 昨天发现没转好，换小胖的reused buffer又转了1hr，一点改善都没有。而可以确
定，那一个小时肯定没有接触不良或电源断开之类的情况
怀疑膜可能是之前转膜失败的祸根：
昨天尽管转的很失败，还是把两块膜都1st ab过夜了，今早发现一块膜惨白（毫无任何
marker），另一块有透明感但边缘也有少许惨白的部分（弱而fussy的marker）。后者
做完了显影，脏脏的没有任何用处。前者惨白的膜就丢在PBST里，后来发现它也变的有
通透感，只中间还残余点惨白的部分，后来整块膜都变通透感，更像... 阅读全帖 |
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b******n
发帖数: 4225 | 12 1. 抗体的选择
对于国内的大多数实验室来讲，做western blot实验选择抗体是个头疼的问题。原因很
简单，买进口抗体捉襟见肘，买国产抗体得需要大无畏的勇气，对于我所在的兰州地区
的实验者而言，感触尤深。在 这五年的western blot实验历程里，我先后用过进口抗
体，进口抗体国内分装包装，国产抗体，质量良莠不齐。
进口抗体一般不会出现闪失：abcam品种全，质量过硬，但价高（3400元/100微升），
而且说是100微升，但至多能吸出来90微升；Sigma的 价最贵；比较有性价比的是CST的
抗体，现在好像是2200元/100微升，我前后用过二十几种， 1:1000的稀释比下，还没
有失过手，100微升通常能完成所有的免疫组化和western blot实验，还有一个优点是
通常量比100微升多出来10微升，唯一的不足是CST的品种实在不多。Santa的多克隆抗
体质量可以，但是选用 Santa的单抗还是有风险，估计这也是业界共识了吧。
进口抗体国内分装包装我也用过不少，呵呵，毕竟是穷人（420元/100微升），大概好
抗体的比例约为50%，如果能做出来，也存在一个问题，就是... 阅读全帖 |
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i****g
发帖数: 3896 | 13 写得比较有意思，但是不太实用，可能实验条件相差太大。precast gel比自己制的gel
效果要好很多，结果也容易重复。antibody要看运气的，呵呵。
1. 抗体的选择
对于国内的大多数实验室来讲，做western blot实验选择抗体是个头疼的问题。原因很
简单，买进口抗体捉襟见肘，买国产抗体得需要大无畏的勇气，对于我所在的兰州地区
的实验者而言，感触尤深。在 这五年的western blot实验历程里，我先后用过进口抗
体，进口抗体国内分装包装，国产抗体，质量良莠不齐。
进口抗体一般不会出现闪失：abcam品种全，质量过硬，但价高（3400元/100微升），
而且说是100微升，但至多能吸出来90微升；Sigma的 价最贵；比较有性价比的是CST的
抗体，现在好像是2200元/100微升，我前后用过二十几种， 1:1000的稀释比下，还没
有失过手，100微升通常能完成所有的免疫组化和western blot实验，还有一个优点是
通常量比100微升多出来10微升，唯一的不足是CST的品种实在不多。Santa的多克隆抗
体质量可以，但是选用 Santa的单抗还是有风险，估计这... 阅读全帖 |
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w********h
发帖数: 12367 | 14 【 以下文字转载自 Biology 讨论区 】
发信人: bulletin (bulletin), 信区: Biology
标 题: 穷人的劳斯莱斯——五年western经验谈（转）
发信站: BBS 未名空间站 (Fri Mar 2 23:29:05 2012, 美东)
1. 抗体的选择
对于国内的大多数实验室来讲，做western blot实验选择抗体是个头疼的问题。原因很
简单，买进口抗体捉襟见肘，买国产抗体得需要大无畏的勇气，对于我所在的兰州地区
的实验者而言，感触尤深。在 这五年的western blot实验历程里，我先后用过进口抗
体，进口抗体国内分装包装，国产抗体，质量良莠不齐。
进口抗体一般不会出现闪失：abcam品种全，质量过硬，但价高（3400元/100微升），
而且说是100微升，但至多能吸出来90微升；Sigma的 价最贵；比较有性价比的是CST的
抗体，现在好像是2200元/100微升，我前后用过二十几种， 1:1000的稀释比下，还没
有失过手，100微升通常能完成所有的免疫组化和western blot实验，还有一个优点是
通常量比100微升多出来10... 阅读全帖 |
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f***r
发帖数: 204 | 15 与western作战了个多月，得到本版很多热心大虾的帮助，最后经过结合多方经验，也挖
了文献出来，终于攻克乐我那个低丰度蛋白PVDF检测堡垒。fever是bench work比较弱的
，这么个小case瞎搞了一个月才搞定，但还是敝帚自珍的总结一下，牛虾们不要笑话，和
偶一样的菜菜们可以吸取俺的教训以后少走弯路。
1. 实验碰到问题，查文献很重要，我最后的关键步骤全部按照查到的方法改进，果然奏
效。动不动跑到这里来撒娇，真是偏劳各位善良的筒子了……
2. 大虾们对PVDF的总结很正确，结合力强，所以也容易提高背景，有效控制背景，主要
是尽量控制一抗的浓度，宁可用最少的一抗4度过夜，不要使用太低的稀释比。（我用的
和大部分文献建议的一样，是1:1000。）二抗在适当的浓度下，温育不要太长，室温1小
时应该足以应付general的需要。
3. 电转膜时间不要over，否则条带可能会有损失（这是偶老板说的，是否为了防止偶在
等转膜期间失踪，则不得而知:）。
4. blocking BSA没有必要用，奶粉就好，像某位大虾说的，又便宜又好用，何乐不为。
5.
tween20可以从头用到尾，但如果用 |
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s******r
发帖数: 2876 | 16 是PVDF，millipore non-fluoscence的，用intensity 7.5，背景已经很高了，
anyway，想省钱大概是不行了。
你的那种绿色的膜背景很高啊，不知道你用的是不是Nitrocellulose?
如果你不小心用错了PVDF，会导致背景非常高！
另外，最好不要用牛奶。我的经验是，要么就用牛奶里面提纯的那个casein，
那么就乖乖的用Licor 产的blocking buffer。直接用牛奶的话也很容易导致
背景很高。
在我的经验里，Licor Odessey 的灵敏度比Femto kit稍微低一点点，但是
绝对比普通的ECL强的多 |
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c*****o
发帖数: 18 | 17 谢谢回复，
一开始没考虑到这个问题，就随便用了个实验室有的MCE(mixed cellulose ester)膜的
filter，后来只要一过滤后 就没活性了，才发现这个东西 effectively binds trace
proteins, 不过貌似也不会这么强大吧，我的细菌素全吸附上去了？要这样的话 用这
个膜来提纯我要的多肽到不错。。。。
后来隔壁实验室借了个PES（polyethersulfone）膜的filter，号称 low affinity for
proteins and faster than PVDF, 结果还是一样没活性，
现在用PVDF 的在试试，
如果我的抗菌素很容易被这些膜吸收，那我浓缩 提纯很麻烦了，那些什么centricon
用来浓缩过滤的 都不能用了。。。。 |
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s******s
发帖数: 1584 | 18 好奇怪啊我从来没遇到这样的问题我觉得SemiDry转100KD以下的蛋白比Wet容易操作多
了。
我以前一直是80mM 转一个小时。如果有两块膜的话用100mM，三，四块就再加点。
你可以用两块PVDF叠放然后同时Probe看看下面一块膜上有没有，不过PVDF转穿的可能
性很小啊。 |
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t****t
发帖数: 86 | 19 我转小蛋白，看你上面建议0.1um PVDF膜。
另外bio-rad没有0.1um的膜啊。只看到whatman有
【 在 tyzhet (开吉普的金田一) 的大作中提到: 】
: 有不有推荐的 0.1um PVDF膜？ |
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M*******C
发帖数: 183 | 20 不知道在大家手上work的怎么样？买过好几种抗体。
在我手里，trouble很多啊，要么一堆杂带，没有特异带；要么背景很脏很黑，也看不
到特异带；要么带是白色的，并且结果也不是想要的。而类似的问题，我handle其他公
司的，失败率没这么高。测同一个蛋白，abcam的很好用，clean，结果正确。cell sig
的乱七八糟。trouble呢，公司都宣称在他们手里好用。
他们的western protocol是这样的，很不一般，大家觉得合理吗
Block： 5% Milk TBST （他们说不能用BSA)
一抗： 5% BSA TBST 稀释
二抗： 5% Milk TBST
平时我们要么是block/一抗都BSA. 要么是牛奶block， 一抗直接在TBST. 二抗从来只
是TBST. work的抗体总是work了。
而cell sig 的， 有的抗体，即使完全按照他们的说法，甚至他们寄来 positive ctrl
， 也不work， 而他们的positive ctrl， 我用 abcam的抗体轻易检测出。 abcam 的
问题是现在卖的太贵。而cell sig的花了钱不w... 阅读全帖 |
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z**********e
发帖数: 22064 | 21 人民日报1978年7月8日第5版
党徽上的一支笔——朝鲜访问记之七
《人民日报》代表团
………………
在战后恢复建设时期，知识分子响应党和金主席的号召，在各条战线上都贡献了自己的
力量。著名的维尼纶的发明者李升基博士，就是一个突出的例子。李升基很早就研究维
尼纶，在美帝国主义霸占的南朝鲜，因为无法购置起码的实验仪器，被迫停止了研究工
作。祖国解放战争初期，他怀着一颗为祖国服务的心，从汉城来到北方，不久就开始了
艰苦的撤退。就在他带着怀孕的妻子和五个孩子，艰难地踏上行程的时候，金主席专门
派人给他送来一辆牛车，告诉他带着孩子坐牛车走山路，比坐汽车走大路安全得多。金
主席对科学工作者的深切关怀，使李升基激动得流下泪来。一九五二年四月，在美帝飞
机疯狂轰炸之下，全国科学工作者大会在平壤牡丹峰地下剧场召开了，李升基出席了大
会，受到金主席的亲切接见。以后几年，在艰苦的战争时期和恢复建设时期，在简陋的
实验室里，李升基和他的研究集体的同志们，一直坚持维尼纶的研究工作。缺少仪器和
试剂，金主席就派人从国外买来送给他们，还指示有关同志：“研究工作需要的材料和
资金，要多少给多少。”一九五六年，维尼纶... 阅读全帖 |
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a***e
发帖数: 757 | 22 Investigation of Electrochemical Property of Graphene-oxide/Polyaniline/
PVDF Nanofibers Prepared Via Electrospinning Method Materials Science in
Semiconductor Processing
同样，请把您的职位和您的official邮箱以及个人简介站内邮件告诉我。 |
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d*****0
发帖数: 68029 | 23 【 以下文字转载自 Joke 讨论区 】
发信人: rl1231 (上官青青), 信区: Joke
标 题: 生物学男的一个梦（转自开心） (转载)
发信站: BBS 未名空间站 (Sat Nov 13 09:04:33 2010, 美东)
发信人: platinumegg (蛋,纯铂金的), 信区: Biology
标 题: 生物学男的一个梦（转自开心） (转载)
发信站: BBS 未名空间站 (Fri Nov 12 12:42:07 2010, 美东)
发信人: cdlqin (cdlqin), 信区: Joke
标 题: 生物学男的一个梦（转自开心）
发信站: BBS 未名空间站 (Fri Nov 12 09:00:09 2010, 美东)
房子不要很大，但是要一个很大的地下室，干什么用，待会儿再说。 大理石地砖，波
斯羊毛地毯，法国的桌子，意大利的椅子，此类物品一概杜绝，墙面，地面，桌面，全
采用PFA材料，耐酸耐碱耐高温易清扫，不用担心污渍，脏了，盐酸，烧碱，双氧水，
换着泼，刷完了，用自来水洗15遍，蒸馏水洗5遍，超纯水洗3遍。（当然是花钱雇人刷
，小姐我养细胞刷的瓶... 阅读全帖 |
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y****z
发帖数: 1606 | 24 http://www.21cbh.com/HTML/2011-9-21/wMMzA3XzM2NjIwMg.html
核心提示：由于萤石储采比下降，欧美等主要萤石消费国家和地区萤石资源枯竭，萤石
价格自去年初开始一路攀升。
这是一块没有硝烟的战场，争夺之物——“萤石”曾被人诟病为“白菜价”。
但在国家政策和萤石资源的预期下，萤石价格逐步攀升，开始引发诸多上市公司对萤石
矿的疯狂争夺。
9月15日，永太科技（002326.SZ）发布公告：公司以自有资金9800万元收购海南鑫辉矿
业有限公司（下称鑫辉矿业）70%的股权。
自今年下半年以来，这已是第三家上市公司收购萤石矿，但其间价格泡沫也油然而生。
疯狂的溢价
永太科技公告显示，鑫辉矿业注册地在海南省琼中县，注册资本3500万元。该矿业仅有
两名股东，分别是出资2800万元占比80%的胡毓前和出资700万元占比20%的胡毓广。
此次永太科技收购的就是胡毓前持有的70%股权，成交价格9800万，较净资产增值4.46
倍。鑫辉矿业拥有矿石储量为140.39万吨，氟化钙资源储量为59.23万吨。选矿厂建设
规模10万吨/年，原矿平均品位为45.41... 阅读全帖 |
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c****n
发帖数: 15245 | 25 房子不要很大，但是要一个很大的地下室，干什么用，待会儿再说。 大理石地砖，波
斯羊毛地毯，法国的桌子，意大利的椅子，此类物品一概杜绝，墙面，地面，桌面，全
采用PFA材料，耐酸耐碱耐高温易清扫，不用担心污渍，脏了，盐酸，烧碱，双氧水，
换着泼，刷完了，用自来水洗15遍，蒸馏水洗5遍，超纯水洗3遍。（当然是花钱雇人刷
，小姐我养细胞刷的瓶子表面积加起来都铺N 间房的地板了，看见国产玻璃细胞培养瓶
就感觉吃了一口臭鸭蛋。）
德国schott的试剂瓶，大中小买全套，500mL的拿来喝茶，2L的插花，100mL
以下的是佐料瓶，密封好，定量超准，还耐热冲击（这点是我最欣赏的，非常精准的工
艺。国产玻璃器皿，热冲击很容易就爆裂，拿去灭菌，十个有八个拿出来是碎的。）玻
璃的觉得重，还可以用硅化塑料的，防水不吸附，不用刷子也能洗干净。
METTLER TOLEDO的电子天平，称佐料的。Eppendorf的移液枪，Axygen的吸头
，当然是炒菜时用来加酱油和料酒的，用汤勺多不准阿，还容易撒出来。洗碗，安利洗
洁精多土啊，sigma进口分装的NP40,triton ... 阅读全帖 |
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r****1
发帖数: 2299 | 26 【 以下文字转载自 Biology 讨论区 】
发信人: platinumegg (蛋,纯铂金的), 信区: Biology
标 题: 生物学男的一个梦（转自开心） (转载)
发信站: BBS 未名空间站 (Fri Nov 12 12:42:07 2010, 美东)
发信人: cdlqin (cdlqin), 信区: Joke
标 题: 生物学男的一个梦（转自开心）
发信站: BBS 未名空间站 (Fri Nov 12 09:00:09 2010, 美东)
房子不要很大，但是要一个很大的地下室，干什么用，待会儿再说。 大理石地砖，波
斯羊毛地毯，法国的桌子，意大利的椅子，此类物品一概杜绝，墙面，地面，桌面，全
采用PFA材料，耐酸耐碱耐高温易清扫，不用担心污渍，脏了，盐酸，烧碱，双氧水，
换着泼，刷完了，用自来水洗15遍，蒸馏水洗5遍，超纯水洗3遍。（当然是花钱雇人刷
，小姐我养细胞刷的瓶子表面积加起来都铺N 间房的地板了，看见国产玻璃细胞培养瓶
就感觉吃了一口臭鸭蛋。）
德国schott的试剂瓶，大中小买全套，500mL的拿来喝茶，2L的插花，100mL
以下... 阅读全帖 |
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h****k
发帖数: 182 | 27 使用的nitrocellulose膜，但是原来的一抗总是洗不下来，使用了restore的stripping
buffer和PVDF膜的protocol但是都没有效，不知道版上有人遇到同样的问题过没？求
好的protocol.谢了。。 |
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a****c
发帖数: 339 | 28 Nitrocellulose is bad for reprobing. Try PVDF.
stripping |
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h*******n
发帖数: 2052 | 29 I am using PVDF membrane from Pierce |
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s******y
发帖数: 28562 | 30 I suggest you don't bother.
It is likely all the protein on the surface have been degraded due to
bacterial activity and other factors.
Well, however, if you are really, really,really desperate, you can try this:
wet the membrane in methanol for 5 minutes, then wash by PBS three times.
Then maybe you can try again.
Remember: if you want to keep a membrane for a long time, always dry it, and
then store at -20oC
and
dose |
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w******y
发帖数: 2504 | 31 Thanks so much, Sunnyday. |
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s******y
发帖数: 28562 | 32 Also, if you have to do this, you need to use the most sensitive detection
reagent,
such as the Western Femto detection kit from Pierce Chemical |
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j********r
发帖数: 156 | 33 不习惯用licor, 但实验室没有胶片。问楼上几个问题，
1. Are pvdf and nitrocellulose equally okay for licor?
2. 每次扫4x7的膜，选169um的分辨率，要4分多钟，这正常吗？
3. 是直接把膜从buffer里捞起来放上去，还是要把膜先弄成半干状态？
多谢！ |
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s******y
发帖数: 28562 | 34
大部分厂家的PVDF 有比较强的背景红外荧光，应该尽量避免
Nitrocellular 比较好。
正常，就是这么慢的
理论上没有区别，但是实践上，弄成全干最好。如果是湿的话，容易弄出小
气泡，扫描出来后会形成亮点。
半干的话我不放心，因为我担心湿度对荧光强度有影响。所以我一般都是
凉干过夜 |
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S*****s
发帖数: 287 | 35 Millipore 的 Immobilon-FL 是降低了背景荧光的 PVDF 膜，也是在 Li-Cor 网站上卖
的膜。对于 2 KDa 左右的小蛋白也可以用 Immobilon-PSQ，背景荧光也很低。不过我
们实验室有人曾经拿错过 Immobilon-P，杯具啊。 |
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I*****y
发帖数: 6402 | 36 1 minute per kD at the constant current of 300 mA. YOu better use PVDF
membrane, and keep the transfer buffer cold during the transfer. |
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F******y
发帖数: 1988 | 37 还想请教如下的问题
1。制胶的时间大概多久（指从把胶注入胶板到能够使用的时间）
2，请问您用的marker protein是什么（能告诉我catalogue number最好了）
3，Running 和Transferring的条件分别是什么（电流/Gel，电压/Gel,多长时间？)
4，转膜时用的那种膜（PVDF？） |
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c******y
发帖数: 148 | 38
1, 1-2hrs
2, fermentas prestained PAGE ruler google
3, Running, big gel constant 70V overnight, transferring as Tris glycine gel
4, PVDF or NC |
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s********n
发帖数: 2939 | 39 我查了一下，96-well filter plates很多，但384-well的就比较少，比如这一款：
FiltrEX™ 384 Well Filter Plates with 0.45µm PVDF Membrane。我不
确定这一款filter plate能否hold住media很长时间，你可以打电话问问他们的技术支
持。
如果不行的话可以这样，先在原来的384孔板培养细胞，然后用robot pipette打散细胞
，transfer一定体积的culture到这种filter plates，再离心或者用vaccum去除media
，估计这样就可以得到比较consistent的结果。
祝你好运！
了. |
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g***1
发帖数: 24 | 40 Does anyone have experiences in western blot handling high molecular weight
(250~360 kDa) proteins? I met difficulties in transfer, thank in advance for
sharing your experiences! |
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y******8
发帖数: 1764 | 41 4-5% resolving gel and transfer buffer without methanol. |
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v***a
发帖数: 1242 | 42 without methanol是什么原理啊？ |
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i********e
发帖数: 50 | 43 I use 6% separation gel and transfer without methanol for one hour at 100 V
. My protein is 550 KDa. |
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s******r
发帖数: 2876 | 44 invirogen 有 Tis-acetate gel，据广告适合大蛋白。
Does anyone have experiences in western blot handling high molecular weight
(250~360 kDa) proteins? I met difficulties in transfer, thank in advance for
sharing your experiences! |
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i*********t
发帖数: 78 | 45 add SDS in trnasfer buffer. |
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p********t
发帖数: 411 | 46 Are you labeling Ryanoding Receptor?
V |
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p*********g
发帖数: 9527 | 47 【 以下文字转载自 Joke 讨论区 】
发信人: cdlqin (cdlqin), 信区: Joke
标 题: 生物学男的一个梦（转自开心）
发信站: BBS 未名空间站 (Fri Nov 12 09:00:09 2010, 美东)
房子不要很大，但是要一个很大的地下室，干什么用，待会儿再说。 大理石地砖，波
斯羊毛地毯，法国的桌子，意大利的椅子，此类物品一概杜绝，墙面，地面，桌面，全
采用PFA材料，耐酸耐碱耐高温易清扫，不用担心污渍，脏了，盐酸，烧碱，双氧水，
换着泼，刷完了，用自来水洗15遍，蒸馏水洗5遍，超纯水洗3遍。（当然是花钱雇人刷
，小姐我养细胞刷的瓶子表面积加起来都铺N 间房的地板了，看见国产玻璃细胞培养瓶
就感觉吃了一口臭鸭蛋。）
德国schott的试剂瓶，大中小买全套，500mL的拿来喝茶，2L的插花，100mL
以下的是佐料瓶，密封好，定量超准，还耐热冲击（这点是我最欣赏的，非常精准的工
艺。国产玻璃器皿，热冲击很容易就爆裂，拿去灭菌，十个有八个拿出来是碎的。）玻
璃的觉得重，还可以用硅化塑料的，防水不吸附，不用刷子也能洗干净。
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s******y
发帖数: 28562 | 48 你的那种绿色的膜背景很高啊，不知道你用的是不是Nitrocellulose?
如果你不小心用错了PVDF，会导致背景非常高！
另外，最好不要用牛奶。我的经验是，要么就用牛奶里面提纯的那个casein，
那么就乖乖的用Licor 产的blocking buffer。直接用牛奶的话也很容易导致
背景很高。
在我的经验里，Licor Odessey 的灵敏度比Femto kit稍微低一点点，但是
绝对比普通的ECL强的多 |
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s******y
发帖数: 28562 | 50 PVDF在我的经验中只能湿的时候用，一旦晒干就会有很强的背景荧光 |
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