由买买提看人间百态

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全部话题 - 话题: nunc
1 (共1页)
S**I
发帖数: 15689
1
You can try H-4 Nunc-pro-tunc reinstatement, which might get your H-4 status
back retroactively. To do this, you need a really good immigration lawyer
who at least has done this successfully in the past. I posted two links for
your reference:
http://www.immigration.com/sample-cases/h-4-visa/h-4-nunc-pro-t
http://www.murthy.com/2012/03/30/murthy-success-story-h-4-nunc-

发帖数: 1
2
谢谢!太专业了!这个正是我们准备做的:先走nunc pro tunc,不行回国签h1b或者h4。
1)你知道我们除了nunc pro tunc之外 还有别的申诉途径吗?有律师说起过问学校看
能不能extend opt。或者reinstate?
2)如果回国签h1b还是h4比较好
3)起诉弄错的律师对申诉和签证有没有帮助?
谢啦!


: 向移民局递交一个nunc pro tunc申请,看看能不能改。这是碰运气的,移民局
不一定

: 要批,因为错不是他们犯的。

: 移民局不批,或者你们不想等那么久也无所谓,出境去签H1B签证就行了。

x****6
发帖数: 4339
3
西风最流逼的古典艺术作品,压根就不是献给世人的,要么是献给逝者(比如安魂曲)
,要么就是献给神祇(各种宗教画)。
Adeste fideles læti triumphantes,
Venite, venite in Bethlehem.
Natum videte
Regem angelorum:
Venite adoremus (3×)
Dominum.
Deum de Deo, lumen de lumine
Gestant puellæ viscera
Deum verum, genitum non factum.
Venite adoremus (3×)
Dominum.
Cantet nunc io, chorus angelorum;
Cantet nunc aula cælestium,
Gloria, gloria in excelsis Deo,
Venite adoremus (3×)
Dominum.
Ergo qui natus die hodierna.
Jesu, tibi sit gloria,
Patris æte... 阅读全帖
J**S
发帖数: 25790
4
I-94错误,会有麻烦,你一定要赶快弄好。
不过我提醒一下,如果是入关他们写错了,是他们的责任,我觉得,你去CBP;
File nunc pro tunc 到USCIS,是自己在申请H1B的时候,申请材料,自己的错误,不
是他们的错误,你可以File nunc pro tunc 到USCIS,纠正自己的错误。。
如果你不能自己解决,我觉得你可能需要律师帮忙。

发帖数: 1
5
来自主题: History版 - 子虚乌有的赫梯帝国
赫梯从《旧约》中寥寥数行的传说摇身一变成冶金技术高度发达,战车纵横驰骋,威震
中东西亚几百年的军事帝国,仅仅是一百多年前的事情,也就是说在三千年时间内整个
中东并未有过任何有关赫梯的历史记载。赫梯为什么会在一夜之间出现在世界历史的版
图上,跟赫梯身上的“印欧人建立的第一个文明古国”的标签有很大关系。印欧语系,
印欧人等概念的提出本身就是为英国殖民印度背书,政治意义远大于历史学术意义。西
方历史中的赫梯是冶铁的发明者,是人类第一份和平协议《卡迭什和约》的缔约方,塑
造赫梯这样一个古国可以则为“印欧民族”的历史添上浓墨重彩的一笔。
赫梯历史的重构完全依靠20世纪初古城哈图沙遗址的发现和从中发掘出土的多达三万块
的楔形文字泥板。刚出土的时候这些文字无人能读,破解的过程则颇为传奇。一位捷克
学者首先从密码般的楔形文字中找出了一句被他突然读懂的话——“现在吃面包喝水”
。令人乍舌的是在西方历史学家眼中,死亡两千年以上的楔形文字的读音似乎不存在任
何问题,这位捷克学者先用拉丁字母标注发音,然后在“印欧语系”的各种语言中寻找
相近的词汇来破译失传3000年的赫梯语。其中 "nu" 因为长得像拉丁文'... 阅读全帖

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6
来自主题: Military版 - 我今天下载了一套24史
赫梯从《旧约》中寥寥数行的传说摇身一变成冶金技术高度发达,战车纵横驰骋,威震
中东西亚几百年的军事帝国,仅仅是一百多年前的事情,也就是说在三千年时间内整个
中东并未有过任何有关赫梯的历史记载。赫梯为什么会在一夜之间出现在世界历史的版
图上,跟赫梯身上的“印欧人建立的第一个文明古国”的标签有很大关系。印欧语系,
印欧人等概念的提出本身就是为英国殖民印度背书,政治意义远大于历史学术意义。西
方历史中的赫梯是冶铁的发明者,是人类第一份和平协议《卡迭什和约》的缔约方,塑
造赫梯这样一个古国可以则为“印欧民族”的历史添上浓墨重彩的一笔。
赫梯历史的重构完全依靠20世纪初古城哈图沙遗址的发现和从中发掘出土的多达三万块
的楔形文字泥板。刚出土的时候这些文字无人能读,破解的过程则颇为传奇。一位捷克
学者首先从密码般的楔形文字中找出了一句被他突然读懂的话——“现在吃面包喝水”
。令人乍舌的是在西方历史学家眼中,死亡两千年以上的楔形文字的读音似乎不存在任
何问题,这位捷克学者先用拉丁字母标注发音,然后在“印欧语系”的各种语言中寻找
相近的词汇来破译失传3000年的赫梯语。其中 "nu" 因为长得像拉丁文'... 阅读全帖

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7
来自主题: Military版 - dagaiku, 你要的赫梯语破译过程
赫梯历史的重构完全依靠20世纪初古城哈图沙遗址的发现和从中发掘出土的多达三万块
的楔形文字泥板。刚出土的时候这些文字无人能读,破解的过程则颇为传奇。一位捷克
学者首先从密码般的楔形文字中找出了一句被他突然读懂的话——“现在吃面包喝水”
。令人乍舌的是在西方历史学家眼中,死亡两千年以上的楔形文字的读音似乎不存在任
何问题,这位捷克学者先用拉丁字母标注发音,然后在“印欧语系”的各种语言中寻找
相近的词汇来破译失传3000年的赫梯语。其中 "nu" 因为长得像拉丁文'nunc'所以是“
现在”。“wa-atar”因为长得像water所以叫水。"e-ez-za-at-te-ni"因为长得像德文
“essen”所以叫“吃”。"e-ku-ut-te-ni"被翻译成"喝"因为和拉丁文中水"acqua"相
近。
破译“现在吃面包喝水”这句楔形文字的过程中学者分别参考了拉丁语和高地德语
的发音。这两种语言同属所谓的“印欧语系”,但二者之间的差别已经相当大,三千多
年前的赫梯语如何就结合了这两种语言共同的发音特点?
如果几万块楔形文字泥板为真,“现在吃面包喝水”这样一句再通俗不过的话语不
可能孤立地存在于... 阅读全帖
p*****g
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8
【 以下文字转载自 SanFrancisco 讨论区 】
发信人: pengpig (peng), 信区: SanFrancisco
标 题: i94过期,hib有效,请大家推荐有相关经验移民律师
发信站: BBS 未名空间站 (Sat Apr 5 20:06:26 2014, 美东)
背景:突然发现i94已经过期11个月,但h1b还有效。现在试着:
1. 到CBP(Customs and Border Protection)去争取按h1b有效期改过来;
2. File nunc pro tunc 到USCIS,试着改正
请大家推荐旧金山地区有相关经验移民律师,十分感谢!!
p*****g
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9
【 以下文字转载自 SanFrancisco 讨论区 】
发信人: pengpig (peng), 信区: SanFrancisco
标 题: i94过期,hib有效,请大家推荐有相关经验移民律师
发信站: BBS 未名空间站 (Sat Apr 5 20:06:26 2014, 美东)
背景:突然发现i94已经过期11个月,但h1b还有效。现在试着:
1. 到CBP(Customs and Border Protection)去争取按h1b有效期改过来;
2. File nunc pro tunc 到USCIS,试着改正
请大家推荐旧金山地区有相关经验移民律师,十分感谢!!
m*****y
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10
大家好,我本来是F1签证,master毕业后 (2015年初)公司给办了h1b,并且抽中了。
和老婆是在学校认识的,当时她也是F1, 2015年2月份在美国领了证,之后回国了几个
月,我3月份开始正式上班。
当时和h1b的律师提出一起办H4的时候律师说让她先签F2然后等到了美国之后再file
539转status。可能是误解了律师的意思,我理解成了要我h1b生效了才能帮她办。(F2
上面的过期日写的是2016年2月)
于是老婆就申了F2,5月份过来了,中间还出了小插曲,面签之后收到的签证是F1...之
前也没看过F2,还以为就是F1。入境的时候被关小黑屋了,问了一通之后填了一张表,
说是临时入境签证,和F2的时效一样,但是之后回国要重新签。。
然后等到了10月20左右开始填表 i-539, 把该交的材料都准备好了,进入等待期。
这段时间一直没意识到,10月1号我的H1B生效之后,我的F1也就马上实效,那她的F2也
就实效。还一直以为F2能保持到2月份,这段时间身份继续有效。。
网上显示10月26号收到了case。现在到了一月份了,她的驾照也要在2月份过期了,但
是还是没收到H4。。所以... 阅读全帖
z****g
发帖数: 3509
11
可以找律师问问nunc pro tunc,不一定会批,因为你不满足第一条The delay was due
to extraordinary circumstances beyond your control。其实也不必太慌张,转身
分如果被拒出境去签H4就能回来了。要注意不要积累unlawful presence (从去年10
月1号算起)到180天,不然触发3年bar就麻烦了。
p*****t
发帖数: 3693
12
You need to hire a competent lawyer to handle you case, read this article on
Murthy.com regarding "nunc pro tunc":
http://www.murthy.com/news/n_nunpro.html
p*****t
发帖数: 3693
13
Find a good immigration lawyer and have them file a request for nunc pro tun
for you.
y****p
发帖数: 99
14
Thanks, will file a request for nunc pro tun works in my case? Do you have
any experience ?

tun
p*****t
发帖数: 3693
15
一般这种身份过期都是通过nunc pro tun解决问题的,印度人的Murthy Law Firm在这
方面应该比较有经验,但他们的收费在同行中算挺贵的。
p*****t
发帖数: 3693
16
过期多久了?如果没超过半年理论上可以出境签回来,超过半年的话不要出境,找个好
律师帮你file nunc pro tunc.
p*****g
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17
【 以下文字转载自 SanFrancisco 讨论区 】
发信人: pengpig (peng), 信区: SanFrancisco
标 题: i94过期,hib有效,请大家推荐有相关经验移民律师
发信站: BBS 未名空间站 (Sat Apr 5 20:06:26 2014, 美东)
背景:突然发现i94已经过期11个月,但h1b还有效。现在试着:
1. 到CBP(Customs and Border Protection)去争取按h1b有效期改过来;
2. File nunc pro tunc 到USCIS,试着改正
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m*****y
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18
大家好,我本来是F1签证,master毕业后 (2015年初)公司给办了h1b,并且抽中了。
和老婆是在学校认识的,当时她也是F1, 2015年2月份在美国领了证,之后回国了几个
月,我3月份开始正式上班。
当时和h1b的律师提出一起办H4的时候律师说让她先签F2然后等到了美国之后再file
539转status。可能是误解了律师的意思,我理解成了要我h1b生效了才能帮她办。(F2
上面的过期日写的是2016年2月)
于是老婆就申了F2,5月份过来了,中间还出了小插曲,面签之后收到的签证是F1...之
前也没看过F2,还以为就是F1。入境的时候被关小黑屋了,问了一通之后填了一张表,
说是临时入境签证,和F2的时效一样,但是之后回国要重新签。。
然后等到了10月20左右开始填表 i-539, 把该交的材料都准备好了,进入等待期。
这段时间一直没意识到,10月1号我的H1B生效之后,我的F1也就马上实效,那她的F2也
就实效。还一直以为F2能保持到2月份,这段时间身份继续有效。。
网上显示10月26号收到了case。现在到了一月份了,她的驾照也要在2月份过期了,但
是还是没收到H4。。所以... 阅读全帖
z****g
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19
向移民局递交一个nunc pro tunc申请,看看能不能改。这是碰运气的,移民局不一定
要批,因为错不是他们犯的。
移民局不批,或者你们不想等那么久也无所谓,出境去签H1B签证就行了。
p*****g
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20
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发信人: pengpig (peng), 信区: SanFrancisco
标 题: i94过期,hib有效,请大家推荐有相关经验移民律师
发信站: BBS 未名空间站 (Sat Apr 5 20:06:26 2014, 美东)
背景:突然发现i94已经过期11个月,但h1b还有效。现在试着:
1. 到CBP(Customs and Border Protection)去争取按h1b有效期改过来;
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21
谢谢提醒,已经找了律师,但有了上一个律师不靠谱的经历我实在不敢把宝都压在一个
人的建议上.
2014年6月那次回国就是问了律师说OK,然后2014年10月不回国也是问了律师的.
H1B据信上没有提到任何关于gap和时间的理由,三条理由都是关于学术背景和职务。
有位非常专业的律师建议走NPT( NUNC PRO TUNC)回溯到2014年9月,再补一张i539
COS,不知道在RFE的回复里提这个是不是可行?
v****r
发帖数: 11
22
来自主题: Immigration版 - [急!!!] H1B I94 过期
求问网上各位大大,朋友入境时没看护照过期时间,I94只给到了护照过期时间但是H1
还有大半年,已经尝试了好几个机场CBP,但是表示不是他们的过错不帮。有没有什么
好办法?有谁办过 nunc pro tunc ? 有什么律师推荐的么?
B*****l
发帖数: 1078
23
来自主题: EB23版 - 是不是out of status了?求助
your situation is rather weird. if your h1b expires on 3.31.14, you should
file your h4 to start on 4.1.14. so even if it gets approved on 5.1.14, it
should still say your h4 status started on 4.1.14.
you need to consult your lawyer, you might need something called "nunc pro
tunc", what it does is to provide a reason, to extend your H1b or H4 (not
sure) status to cover the period time when you were out of status.
B*****l
发帖数: 1078
24
来自主题: EB23版 - 是不是out of status了?求助
I suggested him to ask the lawyer and a possible worst outcome to prepare,
that is, in the case of out of status, he can file nunc pro tunc to stay in
status and "delete" the period of time when he was OOS. It is just a
suggestion,
Nothing else. USCIS makes stupid mistakes all day long. Sometimes it might
result in serious outcomes.

发帖数: 1
25
這個律師有提及過, 最安全的辦法重辦H4 extension, 要求USCIS nunc pro tunc 改正
過來。
不要拖了, 逾期居留六個月以上3年內不能入境的.
http://immigrationgirl.com/travel-when-your-passport-expires-before-your-i-797-expires/
A****r
发帖数: 10
26
我遇到过一模一样的问题。最好的情况当然是如果你能让CBP的人把I94更正到正确的
H1B到期的日期(2018年1月15日),然后用这个回复RFE。但如果CBP怎么都不改的话,
情况就比较复杂了。。需要你的律师帮助你申请一份Nunc Pro Tunc H1B。意思是指有
回溯力的H1B。如果这个H1B申请批准下来的话,它的生效日期会是2017年3月7日,就是
刚好和你错误的I94接上。
这两个建议都是个人看法,无法代替律师的专业意见。你一定要把两个选项都和律师提
出来,然后和律师商量要如何做。这个RFE感觉还是不要自己擅自回复的好。

发帖数: 1
27
来自主题: EB23版 - change of status to H4
你护照过期了,你还有身份?没有身份,哪里来的转换身份?
没超过180天的话,赶快离开美国,去签一个H4回来。超过180天的话,已经要禁止入境
了,那就先别出去了,赶快找律师看看能不能搞nunc pro tunc吧
p*****g
发帖数: 41
28
背景:突然发现i94已经过期11个月,但h1b还有效。现在试着:
1. 到CBP(Customs and Border Protection)去争取按h1b有效期改过来;
2. File nunc pro tunc 到USCIS,试着改正
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z*l
发帖数: 763
29
来自主题: ClassicalMusic版 - [转载] Carmina Burana [试译]
【 以下文字转载自 ZST 讨论区 】
【 原文由 etude 所发表 】
Latin: English: 中文:
I. O Fortuna
O Fortuna O Furtune! 君不见幻兮运命
velut luna Like the moon 翻覆难定
statu variabilis, Everchanging, 或满如月
semper crescis Rising first 时亏若玦
aut decrescis; Then declining;
vita detestabilis Hateful life 生何其恶
nunc obdurat Treats us badly
c****2
发帖数: 345
30
来自主题: LeisureTime版 - 又到了听这首歌的时候
每年圣诞前就听听这首歌,西方有玛丽亚,中国有观世音菩萨。
http://v.youku.com/v_show/id_XMTM4NjgyODQ0.html
歌词:
Ave Maria,
gratia plena,
Dominus tecum,
benedicta tu in mulieribus,
et benedictus
fructus ventris tui, Jesu.
Sancta Maria,
Sancta Maria,
Maria!
Ora pro nobis nobis peccatoribus,
nunc et in hora
in hora mortis nostrae.
Amen.
Amen.
m*****n
发帖数: 7450
31
来自主题: LeisureTime版 - 一夜情
老子还听过关于猪的chant呢
The chants begin with the pigs fast asleep. They chant:
Ore-Snay, OreSnay. Snore, snore.
Ore-Snay, OreSnay. Snore, snore.
Ore-Snay, OreSnay. Snore, snore.
Ore-Snay, OreSnay. Snore, snore.
It's possible that you noticed that the pigs chant in Pig Latin. The dawn
comes, and the animals awaken. First the Rooster, then the chickens:
Coccadoodul du. Cock-a-doodle-doo.
Ego dixi: I said,
Coccadoodul du. Cock-a-doodl... 阅读全帖
G**i
发帖数: 1292
32
来自主题: LeisureTime版 - 听歌曲:般若波罗密多心经
和您一首
http://www.dailymotion.com/video/x2wj62q_barbara-bonney-laudate
Barbara Bonney声音真好听
Laudate Dominum omnes gentes,
Laudate eum,
omnes populi Quoniam confirmata est Super nos misericordia eius,
Et veritas Domini manet in aeternum.
Gloria Patri et Filio et Spiritui Sancto.
Sicut erat in principio,
et nunc,
et semper
.Et in saecula saeculorum.
Amen.
s*****e
发帖数: 5471
33
来自主题: Music版 - 【弹唱】seprose -- Ave Maria
Ave Maria有好几个版本,这个是巴赫/古诺版的。记得以前有人奔过?跟录音现学的
山寨拉丁文,最高音拼死也唱不上去差点断气,总之超级弱。大家轻拍。
Ave Maria, gratia plena, Dominus tecum.
Benedicta tu in mulieribus,
et benedictus fructus ventris tui, Iesus.
Sancta Maria, Sancta Maria, Maria,
ora pro nobis peccatoribus,
nunc et in hora, in hora mortis nostrae. Amen. Amen.
a****t
发帖数: 7049
34
来自主题: MusicPlayer版 - 奔巴赫 bwv 846 prelude
歌词:
Ave Maria, gratia plena, Dominus tecum.
Benedicta tu in mulieribus,
et benedictus fructus ventris tui, Iesus.
Sancta Maria, Sancta Maria, Maria,
ora pro nobis peccatoribus,
nunc et in hora, in hora mortis nostrae. Amen. Amen.
嗨玛丽亚,恩惠满载,主与你共。
福于你在妇人中,
也福于你胞之果,耶稣。
圣玛丽亚,圣玛丽亚,玛丽亚,
为我们罪人们祈祷,
此刻也在我们终亡时,时。阿门。阿门。
a****t
发帖数: 7049
35
来自主题: MusicPlayer版 - 奔巴赫 bwv 846 prelude
歌词:
Ave Maria, gratia plena, Dominus tecum.
Benedicta tu in mulieribus,
et benedictus fructus ventris tui, Iesus.
Sancta Maria, Sancta Maria, Maria,
ora pro nobis peccatoribus,
nunc et in hora, in hora mortis nostrae. Amen. Amen.
嗨玛丽亚,恩惠满载,主与你共。
福于你在妇人中,
也福于你胞之果,耶稣。
圣玛丽亚,圣玛丽亚,玛丽亚,
为我们罪人们祈祷,
此刻也在我们终亡时,时。阿门。阿门。
s*****e
发帖数: 5471
36
来自主题: MusicPlayer版 - 【乐音雅意】双刨双坟新鱼种奔
许诺过,如果settings奔鳄鱼歌,我就现学一个新鱼种歌。想来想去,发鱼得鱼细斑牙
鱼都不够有挑战性,要奔就奔稀有鱼种,沙丁鱼的Ave Maria。
这首曲子(巴赫伴奏版)我见过的已经有过两个奔:
mathmath/吉他 + aptget/黑管,合奏在19楼
http://www.mitbbs.com/article_t/MusicPlayer/31310673.html
我/钢琴 + icemiaoer/小提琴,合奏在6楼
http://www.mitbbs.com/article/MusicPlayer/31324033.html
既然有双坟,就要双刨。
~~噪音版竖笛刨~~
备注:这首曲子刚好超过竖笛的音域一度。没办法只好作弊,最高的那声嘶吼是合成的。
~~惊悸版伪美声刨~~
备注:
1.正如竖笛,这首歌也刚好超过我的高音音域一度。可惜这个合成不了,只好扯破喉咙
嘶叫。请在高潮到来前做好心理准备。
2.尝试沙丁鱼的卷舌音失败,结果所有r音都像舌头抽筋。
3.学习样品疑似山寨,结果就是两重山寨叠加。养过沙丁鱼的同学请高抬贵口。
Ave Maria, gratia plena, D... 阅读全帖
c****t
发帖数: 19049
37
来自主题: SciFiction版 - 云图 英文版
THE PACIFIC JOURNAL OF ADAM EWING
Thursday, 7th November—
Beyond the Indian hamlet, upon a forlorn strand, I happened on a trail of
recent footprints.
Through rotting kelp, sea cocoa-nuts & bamboo, the tracks led me to their
maker, a White man,
his trow-zers & Pea-jacket rolled up, sporting a kempt beard & an outsized
Beaver, shoveling
& sifting the cindery sand with a teaspoon so intently that he noticed me
only after I had hailed
him from ten yards away. Thus it was, I made the acquaintance of... 阅读全帖
B*********e
发帖数: 254
38
来自主题: TrustInJesus版 - Quo Vadis? A Sermon on the Pericope Adulterae
A Sermon on the Pericope Adulterae
Bible Research > Textual Criticism > Story Of The Adulteress > Quo Vadis?
Quo Vadis?
A Sermon on the Pericope Adulterae
by Michael Marlowe, 2004
The Quo Vadis story is one of those Legends of the Saints that are well-know
n to Catholics but practically unknown to Protestants. It is an ancient lege
nd concerning Peter's martyrdom, believed to be from the second century, and
preserved in the collection of legends included in the apocryphal Acts of P
eter. George ... 阅读全帖
r****o
发帖数: 105
39
来自主题: Biology版 - Re: freezing vials exploded!
小MM被吓坏了。:-)
你LG怎么不教教你低温保存细胞的一些基本知识?
液氮渗入了小管之后,解冻的时候,液氮变为气象,
瞬间使管内压力增大700倍。所以发生爆炸。
不过你遇到的情况非常夸张,看起来液氮漏得很严重。
一般来说,只要你用非常专业的螺旋盖的低温保存管,
比如NUNC出的系列cryotubes,然后拧紧,不会出现任何
问题。
下一次再拿FREEZE DOWN的时候,注意带防护面具拉!
如果没有罩住整个脸的,只罩住眼睛的也行。主要是为了
保护眼睛。
s******a
发帖数: 472
40
实在不好意思,又把这个帖子顶起来。
从国内回来一个月了,一直在转我的BAC DNA,一直在失败。
我想总结一下失败的经验,并且继续求教大家:
我需要转染的细胞是Hepa 1-6,小鼠肝癌细胞,8-well plate 每孔种10000个细胞 ,
第二天转染。固定lipofectamine用量(量大毒性大),优化的主要是DNA和
lipofectamine的比例。每孔转10 ng 到数 ug之间的range都试过,没有能够work的。
用普通质粒作为阳性对照,转染效率相当高,80-90%是有的。
这篇nature method文章用lipofectamine转BAC到小鼠ES细胞,10 cm2 的碟用10 ul
lipo转150-350 ng BAC DNA(protocol在supplementary,但是有typo,写的是150-350
ug)。我和文章作者email也联系过,他们转染的效率也只有1-2%。
所以现在唯一能确定的是转BAC DNA(我的约250kb)还是比普通质粒要难很多的。目前
对于lipo2000也已经没有idea了。
我现在开始尝试电转,第一次参数不合适细胞全死... 阅读全帖
s******a
发帖数: 472
41
实在不好意思,又把这个帖子顶起来。
从国内回来一个月了,一直在转我的BAC DNA,一直在失败。
我想总结一下失败的经验,并且继续求教大家:
我需要转染的细胞是Hepa 1-6,小鼠肝癌细胞,8-well plate 每孔种10000个细胞 ,
第二天转染。固定lipofectamine用量(量大毒性大),优化的主要是DNA和
lipofectamine的比例。每孔转10 ng 到数 ug之间的range都试过,没有能够work的。
用普通质粒作为阳性对照,转染效率相当高,80-90%是有的。
这篇nature method文章用lipofectamine转BAC到小鼠ES细胞,10 cm2 的碟用10 ul
lipo转150-350 ng BAC DNA(protocol在supplementary,但是有typo,写的是150-350
ug)。我和文章作者email也联系过,他们转染的效率也只有1-2%。
所以现在唯一能确定的是转BAC DNA(我的约250kb)还是比普通质粒要难很多的。目前
对于lipo2000也已经没有idea了。
我现在开始尝试电转,第一次参数不合适细胞全死... 阅读全帖
s******a
发帖数: 472
42
不是typo,8-well Nunc plate,和ibidi差不多,做imaging用。
谢谢你的建议。
B****a
发帖数: 1526
43
We use cryovials from Nunc (Thermo Scientific, now part of FisherSci). Never
had a problem.
a*******o
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44
Nunc的Cryovial,表示很稳定
s***o
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45
贵的用Corning, Nunc的内旋冻存管
便宜的用江苏海门某作坊产的外旋冻存管
都没问题
n***3
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46
来自主题: Biology版 - 求推荐:plates for ELISA
nunc maxisorp
v***a
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47
以前一直购买的那种管子不生产了,找到一个Thermo Scientific的Nunc 15mL管,介绍
说有■Clear molded graduations on conical portion of tube from 0 to 1mL in 0
.1mL subdivisions,买来才发现上当了,根本没有(买之前还打电话给客服确认过的
)。
请问大家知道哪有卖的吗?只要有上述0.1mL的刻度并且是sterile的就可以。谢谢!
s******s
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a****d
发帖数: 1919
e***e
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50
来自主题: _Exile版 - Carmina Burana [试译]
Latin: English: 中文:
O Fortuna O Furtune! 君不见幻兮运命
velut luna Like the moon 翻覆难定
statu variabilis, Everchanging, 或满如月
semper crescis Rising first 时亏若玦
aut decrescis; Then declining;
vita detestabilis Hateful life 生何其恶
nunc obdurat Treats us badly 戏我而乐
et tunc curat Then with
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