h***9
发帖数: 662 | 1 先谢谢大家的答复。
报告一下进展。我后来用Not1-HF切了，杂带还是在。未切的质粒里也有同样的杂带，
证明不是酶切的问题。试了老早以前做的另一个maxi prep的质粒，同样用Not1-HF切，
那个却很干净，没有杂带。
另外，差不多同时做的mini prep的这个出问题的maxi prep质粒，也出现同样的杂带。证明不是maxi prep kit的问题。
我现在怀疑是competent cell的问题了，因为老早以前用的是公司买的，最近用的是同事做
的。准备弄点公司买来的cell,重做maxi prep. |
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n*******s
发帖数: 17267 | 2 少看了0.38， 妈的， 2.12 not1.12 -》 206.14 |
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T***c
发帖数: 17256 | 3 decision
take my talent to south beach
not1, not 2, not3....
我拿小本本记下来了
we hate cleverland
what should I do
karma is a bitch
I told u so
我以前队友不给力
watch my defence
cough
now or never
biggest game
hata的都是撸ser，鄙视你们
漏了啥没？ |
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d*****a
发帖数: 453 | 4 LBJ选骑士的可能性真的很大：
1，老妖怪波波维奇和邓肯要再搞一年，他在热火与骑士差别不大。反正都拿不了冠军。
2，今年骑士又选了一个状元。四状元在NBA也是个大噱头。未来潜力巨大，他以后不用
再挪窝，未来5到8年都可以保证竞争力，可以在家乡球队终老。反观在热火，即使三巨
头同时留下，未来三拿冠军的希望也很小。未来35岁以后为了冠军还要颠沛流离。
3，回家乡救赎。
4，当年说的Not1，not2，已经成为笑谈。离开miami是上上之选。要求顶薪只是他一石
二鸟的策略。
5，LBJ的身体已经在巅峰的末端了。他不可能再什么位置都打，选择一个职业生涯更长
的打法也是他需要考虑的因素，而骑士的配置可以让他打得更省力一点。 |
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o**4
发帖数: 35028 | 10 lebron承诺wade啥了？
party上high的那些not1, not2, not3? |
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k*******2
发帖数: 4163 | 11 LBJ决定的时间肯定影响了热火引援。
不过LBJ走了，就靠bosh，外加一个菲佣，本身也不一定有多大吸引力。
除非莱利年轻十岁，自己亲自出山，估计还行。当然如果莱利年轻十岁的话，
早就四联了，LBJ肯定不会走，而是会实现party宣言，not1,not2,not3,
not4,not5... |
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h*****n
发帖数: 2023 | 12 看了LBJ当教练的镜头，不敢相信啊，联盟没有第二人。LBJ有时候做事情过于天真，跟
受教育少有关。Decision，“NOT1， NOT 2....',最近的F4发言，当教练，一出又一出
。 |
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d**********t
发帖数: 20415 | 13 他要一辈子在克村，兢兢业业打球，哪怕没有冠军，我也不会黑他，黑他的人保守估计
会少至少一半，当然拿不到冠军会一直被某些科轮嘲笑，这个没办法。。。
情商低和心机婊一点也不矛盾，这货大嘴一张啪啪啪的事情太多，我要给克村带来冠军
，然后跑路了，我从不FLOP然后跟斗一个接一个，not1,not2,not3...结果又跑了，很
多事情本来干了也没啥，但他这既当婊子又立牌坊真是厉害，心机婊么，11年总决赛第
一回，然后跑回克村瞎折腾是第二回
冲击力和打无球也不矛盾，奥胖这种冲击力强不强，但是他霸球权么？
身体素质和中远投更是无力吐槽，看看人帮主。。。不过这样好像一下黑了两个人
和库里比三分，呵呵。。。最近蟹黄倒是刷到飞起，不过赛季三分命中率好像快生涯新
低了
走步，笑话，你也知道他就是个笑话，NBA这个商业联盟裁判怎么吹大家都懂，其实他
去Miami后走步真的少多了，倒是去年一回去，那脚步简直梦幻，季后赛都走八步了，
还带着队伍一起走 |
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b******9
发帖数: 2706 | 14 教练当然是及其重要的一环。老北京要是早点遇上个名师，那戒指真的是可以not1，
not2了。从这点上来说，他的命真是不好。 |
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s******n
发帖数: 7166 | 15 LBJ去勇士的话肯定可以not1 not2 的冠军了，这个可以有
然后多拿几个FMVP就可以在排名上面叫卖了
去穿 |
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C*****l
发帖数: 3211 | 16 not1 not2 not3 not4 not 5 not 6 not 7 |
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s******r
发帖数: 21961 | 17 梅西和lebiatch差在没有D1
如果没戏说，我要把我的天赋带到西班牙，就应该是not1。not2了 |
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s******n
发帖数: 7166 | 18 打不过就哭鼻子让联盟把格林给禁赛了啊。你认为合理，我认为是下三滥无赖
的手段。当然更加下三滥的手段是故意隐瞒韦德，自己算计好跑路抱新的更加
年轻的两条大腿，然后坑了NOT1, NOT2, NOT7的前大腿。当然你还也可以认为
是合理的。你说我带着有色眼镜，那怎么不可能就是你自己带着有色眼镜呢
这些都讨论一百遍了，还有什么新意吗 |
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s******n
发帖数: 7166 | 19 交易掉乐福换一个大腿，继续打要不LBJ持球突分要不LBJ叉腰的两种
战术的篮球，是可行的吗， 好像看起来除了躺着多拿几个银牌希望
也是不怎么大的
骑士老板多交钱换几个靠铺的侧翼队员，老板还能交得起吗，而且就算他想
交的话，球队也没有什么机会去搞来靠铺的球员了。而且就如德科沃尔龙这样
大半个赛季证明靠铺的球员，来到蟹黄的身边也都变成什么都不是了。
再加上TT和JR两个只在最后一场稍微证明了一下自己i的薪水价值之外，这两
个被蟹黄逼着老板签下的大合同，目前看还没有哪个球队有感兴趣的
最后一个可能性，学习勇士自己抽签自己培养，可是但是不过蟹黄连几个状元都
没有耐心去等待，难道还会去等待几个小罗罗不成，ring chaser 的脚步怎么能
废在几个小屁孩身上呢，人蟹黄明说了，谁谁是没有资格在球场上和我打球的
尼玛这个牛鼻
所以看来看去好像就只有D1，D2 ，D3一条路可以走了啊。 哈哈，这次蟹黄会
怎么集思广益的想出一个什么样的名号借口呢。 兄弟篮球，牌打过了，家乡篮球，
牌也打过了， 就差冠军篮球这个好牌了没有使用。
所以说如果D3 来了， not1， not2， not3 。。。。。。 你... 阅读全帖 |
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发帖数: 1 | 20 5项全能 被爆操5次
6。 6
7 7
Not1 not 2 not 6
对总决赛 5项全能 算出个73胜总亚军 |
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u***************r
发帖数: 11227 | 21 发信人： bigtwo(大二), 信区： NBA
标题： 看着现在勇士状态的起伏
发信站： BBS未名空间站(Tue Oct 31 09:45:50 2017,GMT)
看着现在勇士状态的起伏，突然觉得詹韦组合的“四年两冠”的结果也不算太差。
去年的勇士那叫一个摧枯拉朽，神挡杀神。当时觉得勇士甚至能统治十年。不过今年开
赛以来，勇士的状态并不好，并不是说没发夺冠。只是状态上确实有起伏。突然觉得夺
冠容易，卫冕难，三连冠更难。因为人都是情感动物，会有倦怠，会骄傲，人也会老化
。并不是像机器一样。当年，詹韦组合并很多人戏称“失败的组合”，因为没有达到预
期的效果“not1，not2...”，不过这个“失败的组合”目前看来也不算太差。 |
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b*******s
发帖数: 5216 | 22 not1 和 not2是stl提供的negation function，
分别用于一元和二元函数
但是更多元的怎么办？ :) 是不是有点蠢的问题？ 我知道一般性stl algorithm就是到
2元最多了，但是万一要三元函数呢？ |
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b*******s
发帖数: 5216 | 23 not1 和 not2是stl提供的negation function，
分别用于一元和二元函数
但是更多元的怎么办？ :) 是不是有点蠢的问题？ 我知道一般性stl algorithm就是到
2元最多了，但是万一要三元函数呢？ |
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b********9
发帖数: 1061 | 24 最近一直在做cloning,一个3Kb, 一个2Kb，一个8Kb，连在一起，酶切为点：pstI,
HindIII, and NotI 怎么连也连不上，已经做了2个月了，哪位大虾帮帮忙？
3Kb: pstI and Not1
2Kb: notI and HindIII
8Kb: PstI and Hind III.
多谢。 |
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r***e
发帖数: 2539 | 25 就是将修复模板（800bp）放在同一个载体上，比如px459-puro的Not1位点？
我看标准的protocol需要将修复模板线性化，这个重要吗？
先谢谢了！ |
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