W**S
发帖数: 275 | 1 今天悲摧了，generate了一批LENTIVIRUS，结果PURO SELECT之后CELL都死了，这次着
急，没做MIDI PREP，直接用MINIPREP的PLASMID做的TRANSFECTION, PLASMID的质量不
是太好，浓度很低，260/230不太好，同一批用MIDIPREP GENERATE的VIRUS没问题。请
问LENTIVIRUS不WORK会是因为PLASMID的质量不好吗？以前也用MINIPREP的PLASMID做过
，没问题。多谢！ |
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W**S
发帖数: 275 | 2 多谢！看来要做个MIDIPREP，这次MINIPREP的完全不WORK,CELL死光光了。 |
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C*****h
发帖数: 926 | 3 miniprep的DNA质量，再怎么也不会太差。
我的经验是，我用miniprep做的virus，比midiprep的要高。
我现在一直就是用miniprep的DNA，做virus，没有出现过问题。 |
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b**********8
发帖数: 349 | 4
是一样的，我们一直使用的sigma 的 PLKO.1-puro-shRNA 质粒，我现在每次都是从师
姐留给我的那管质粒中取一点出来做转化然后midiprep。 |
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l******g
发帖数: 1145 | 5 最近有促销，价钱比Qiagen便宜不少，还送一堆东西，有点心动啊。
但就怕不好用，回头被老板骂TAT
顺便问问他家的fast digest的内切酶怎么样？现在有12罐常用酶200刀的白菜价，但也
怕不好用啊～～ |
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h**********r
发帖数: 671 | 6 12罐常用酶真的是200刀吗？它这个不标价，非要先submit。
你老板管的可真细致 |
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j****x
发帖数: 1704 | 7 分子克隆这块的Kit挺靠谱，很多相比qiagen/roche的更方便省事，质量也很好很稳定
。FastDigest值得推荐，价格也基本和传统酶持平了。
需要上细胞和动物的，那还是qiagen的呗，花钱买个心安。 |
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l******g
发帖数: 1145 | 8 今天vender show拿到的报价，据他家的rep说是去年多出来的库存，要尽快处理掉。
我老板的RO1刚到期了，所以⋯⋯哈哈⋯⋯ |
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l******g
发帖数: 1145 | 9 FastDigest是挺好，唯一有点闹心的是和现在用的NEB的buffer不一样，没法一起用。
要是建新实验室的话，真的是很好的选择。
我准备买个midi的kit试试看，要是好用的话，又能省1／3的钱，挺划算的。
多谢～ |
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h**********r
发帖数: 671 | 10 它家online system怎么这么烂啊？
非要先submit order,
然后等email，还没收到
然后这边小白催着我回信用卡。
NND～～
打客服，占线
我们这边订点破烂玩意儿，先发email儿给老板request
request完了之后，等approve
再找小白订或者拿卡～～ |
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g*********3
发帖数: 177 | 11 Yes. It is highly possible that my DNA quality is bad.
So I redo the midiprep of plxsh this week and do digestion to run gel---
check quality.
It is good.
The insert may be bad because it is digested and gel purified.
But I don't understand why the Gus positive doesn't give any result.
Thanks for your advice. |
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b**********8
发帖数: 349 | 12 我以前也碰到过这个问题，你那个产量低的vector是什么？
我曾经碰到两个质粒，一个是基于pECE的表达质粒，另一个是用pMir-reporter 做的一
个基因的3‘UTR报告基因质粒，这两个质粒做midiprep的产量每次最多只有30ug，换感
受态都不行，老板还总以为是我自己的问题，后来换了别的人提，也是同样的问题 |
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l****e
发帖数: 157 | 13 用了很多年Qiagen的DNA miniprep, midiprep, PCR purification, and gel
extraction kits。最近才发现有其他公司的替代产品，比如Zymo 和 Purelink，要比
Qiagen便宜很多。哪位用过的给个意见？质量上是否一样可靠？谢谢先！ |
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