F*K
发帖数: 608 | 1 同时构建一个基因的3个truncation mutant，
mini prep做出来都挺好，序列也都正确
可是只有一个能maxi prep出来，其他两个重复了几遍，都提不出DNA
百思不得其解，请板上的各位同修指点一下。不胜感谢！ |
|
r*****m
发帖数: 231 | 2 这个问题可能有很多原因的。。。
你的inoculate source？
提不出plasmid DNA的maxi culture OD多少？ |
|
h******y
发帖数: 1374 | 3 Invitrogen PureLink HiPure Plasmid Filter Midi⁄Maxi Kit |
|
m**h
发帖数: 381 | 4 需要一些BAC DNA标记做FISH。
maxi prep了好几次，
用了nucleobind和qiagen－large construct kit,
结果都不理想，yield非常非常底，
请教版上大侠们，
有什么好的kit可以推荐吗？
大提BAC yield底，有什么需要注意的吗？
谢谢 ！！ |
|
m******e
发帖数: 18 | 5 我用的CLONTECH的NucleoBond Maxi Kit 提的BAC 和 YAC DNA 做FISH 探针。产量是很
低，BAC得到大约100ug，YAC是从yeast里提的，大约50ug. BAC通常几百个Kb,低拷贝，
说明书上建议1200ml culture.1ug DNA 可以标记2个玻片，50ug够用几次了。 |
|
z*******9
发帖数: 112 | 6 今天实验室打扫，不知从哪个犄角旮旯里翻出一个几乎没用的QIAGEN Plasmid Plus
Maxi Kit，看了看他的简介，貌似真够省时间的，我也想试试，
有没有用过的同修可以科普一下他的坏处，或者要注意的，
谢谢 |
|
|
w*******y
发帖数: 60932 | 8 8.5-quart is a very nice size and for $19.99, you can't beat it
Newegg
Maxi-Matic MST-800V Elite Gourmet 8.5-qt Stainless Steel Slow Cooker
$19.99 with code EMCKJJF49
shipped
|
|
|
w*******y
发帖数: 60932 | 10 Amazon
Not in stock now, but can be ordered for future delivery
2-pack 18-count Stayfree Ultra Thin Pads, Regular with Wings (36-total)
$4.76 - 30% off code FAVBRAND
= $3.33
28-count Stayfree Maxi Pads, Overnight with Wings:
http://www.amazon.com/Stayfree-Overnight-Wings-28-Count-Package
$3.99- 30% off code FAVBRAND
= $2.79
|
|
|
p**g
发帖数: 4595 | 12 其实我就头一下使劲了，后面一宫缩maxie自己往外拱的。。。催产药太猛了 |
|
m*******w
发帖数: 378 | 13 hehe, big cong~~! 你和maxie都太厉害了！ |
|
b***e
发帖数: 1419 | 14 /*
Transform the array:
1 -> -1
0 -> 1
Then find max sum for substring (consecutive).
Spent 10 min coding and 2 min posting.
*/
var LR = function(a) {
for (var i = 0; i < a.length; i++) {
a[i] = a[i]? -1: 1;
}
console.log(a);
var L = a.length - 1;
var R = L;
var maxL = L;
var maxR = R;
var maxI = a[L];
var max = maxI;
for (var i = a.length - 2; i >= 0; i--) {
L = i;
if (maxI > 0) {
maxI += a[i];
} else {
R = L;
... 阅读全帖 |
|
m***n
发帖数: 2154 | 15 在stackoverflow上看到一个算法。。不知道对不对
bool numberSearch(int[][] arr, int value, int minX, int maxX, int minY, int
maxY)
if (minX == maxX and minY == maxY and arr[minX,minY] != value)
return false
if (arr[minX,minY] > value) return false; // Early exits if the value can't
be in
if (arr[maxX,maxY] < value) return false; // this subrange at all.
int nextX = (minX + maxX) / 2
int nextY = (minY + maxY) / 2
if (arr[nextX,nextY] == value)
{
print nextX,nextY
return true
}
else if (arr[nextX,nextY... 阅读全帖 |
|
p*****2
发帖数: 21240 | 16
object test6 extends App {
val sc=new Scanner(System.in)
val n=sc.nextInt
val m=sc.nextInt
val mat=new Array[String](n)
val start=System.currentTimeMillis()
for(i<-0 until n) mat(i)=sc.next()
def check(i:Int, j:Int, k:Int, l:Int):Boolean={
val minX=math.min(i,k)
val maxX=math.max(i,k)
val minY=math.min(j,l)
val maxY=math.max(j,l)
var minR=true
var maxR=true
var minC=true
var maxC=true
... 阅读全帖 |
|
c*******4
发帖数: 51 | 17 忘了是怎么样的了，这个是重新写的，想法大概是这样，没检查过，可能有问题，再交
流吧
struct Node{
int val;
vector next;
};
int r(Node * root, int counter)
{
if(root->next.size()==0) return counter;
int maxi=counter;
for(int i=0; inext.size(); i++)
{
if(root->next[i]->val==root->val+1)
maxi=max(maxi, r(root->next[i], counter++));
else
maxi=max(maxi, r(root->next[i], 1));
}
return maxi;
}
int result(Node * root)
{
if(!root) return 0;
return r(root... 阅读全帖 |
|
m***j
发帖数: 9290 | 18 好了，终于回来了，完全不知道自己的嘴在哪里了。
中午正好不能吃饭，可以减肥了。
说说早上。
早上还是和平时一样，7点多一点去帮人家遛狗。当时拉了4只，两只大的（LILY/MAXI
），两只小的。因为其中一只（LILY）过去曾经有不良记录，已经被认定是不PEOPLE
FRIENDLY和DOG FRIENDLY的，所以左手拉着这一只，右手拉着剩下3只。刚一开门，右
手里面的那只大（MAXI）的就冲了出门。当时我都晕了，不知道怎么LEASH就脱手了。
也没多想，就拎着剩下3只追了出去。跑的那只，其实倒是没走远，就在前院转圈。我
当然就试图去踩地上拖着的LEASH了。就在刚踩住或者是刚要踩住那一刹那，LILY就发
彪了，冲过去虚咬了MAXI一下，MAXI立刻就完全变了嘴脸，直接和LILY咬到了一起，这
时候其他的狗一见这个阵势，就纷纷开始呐喊助威，一时间，整条街的狗都开始狂沸。
我当时手上还拉着LILY的LEASH，所以本能的就把她往一边拉，但是同时又怕MAXI再跑
了，所以脚上还踩着MAXI的LEASH。所以怎么分，也没法把两个狗完全分开。
这时候，我的朋友也付着拐杖出来了，但是门没关好，又 |
|
s*******f
发帖数: 1114 | 19 //1.Given an array, find the longest subarray which the sum of the subarray
//less or equal then the given MaxSum
//int[] FindMaxSumArray(int[] array, int maxsum)
//can only deal with all positive, or all negative
void FindMaxSumArray(int *in, int len, int *out, int maxsum){
if (!in || len < 1 || !out)
return 0;
int i = 0;
int j = 0;
int sum = 0;
int maxi = 0;
int maxj = 0;
while(j < len){
sum += in[j];
if (sum > maxsum){
if (j - i ... 阅读全帖 |
|
k***t
发帖数: 276 | 20 网上看到的真题。自己写了一个答案，还算简洁，但对时间复杂度和不满意。
抛砖引玉吧。哪位来个O(n)的解？
boolean maxji (int a[], int N, int *resi, int *resj) {
int i, j, previ, maxdist, maxi;
if (!a || (N < 2) || !resi || !resj) return FALSE;
j = N-1;
while((a[j] <= a[0]) && (j != 0)) --j;
previ = 0; maxi = 0; maxdist = j - 0;
for (i = 1; i < (N-maxdist-1); ++i) {
if (a[i] >= a[previ]) continue;
previ = i; j = N-1;
while((a[j] <= a[i]) && (j != i)) --j;
if ((j - i) > maxdist) {
m... 阅读全帖 |
|
k***t
发帖数: 276 | 21 The main part should be functional correct. It passed my test cases. There
might be boundary cases to cover though, not sure.
Got an improved version with comparison skipping on the right side. Not an O
(n), but should be close in a normal case as lots of comparisons are indeed
skipped. For this kind of questions, if it was never seen, I would be more
than happy if I could ever reach this far in an interview:)
#include
using namespace std;
bool maxji (int a[], int N, int *resi, int *res... 阅读全帖 |
|
d*********i
发帖数: 628 | 22 厄，我觉得都不太好看；
第一件，感觉没有maxi的休闲感，做正装，又太随意，整好在中间。而且显老，看起来
有点死气沉沉，maxi dress, 我觉得要有那个飘逸的感觉，或是性感的，或是青春的。
你这件三个都不沾。推荐一下vs的maxi dress,贵一点的推荐wild fox，这家的东西明
星都在穿，一个maxi dress 200刀左右。
第二件，淘宝买的，不是我会喜欢的风格，我可能会选有图案的（我觉得你这两件maxi
dress失败就在都没有图案,floral,pattern, 或是修身的。你这也是3个都没有，然后
还没有飘逸感）。不过你的衣服看起来不透，应该对得起200人民币这个价钱。
第二件配的鞋，太。。。看着脚趾头都出来了，还是扔了吧。
写了很多，真的是诚恳的意见，请不要生气。 |
|
i******r
发帖数: 323 | 23 来自主题: Programming版 - 问个算法题 动态规划
假设N > 0
double max, curr=-1;
int maxI = -1, maxJ; //use maxI == -1 to denote that max = -infinity
int currI;
for (int i = 0; i < N; ++i) {
if (curr < 0) {
curr = 0;
currI = i;
}
curr = curr + a[i];
if (maxI < 0 || curr > max) {
maxI = currI;
maxJ = i;
max = curr;
}
}
//now maxI and maxJ is what you want
//complexity O(N) |
|
p**g
发帖数: 4595 | 24 haha...minnie would give her hat to maxie if maxie need it.
so far i didn't find anything she's not willing to give to maxie if maxie
wants it, including her favorite toys.
it's really weird she won't give her toys to other friends no matter how well they play together. but maxie is definitely an exception. |
|
发帖数: 1 | 25 原标题:中国目前还未掌握的核心技术有哪些？发人深省！
作者：宋景
来源：知乎
1、A ：半导体加工设备
基本被日本，美国霸占，看intel的最佳供应商就知道了。不同的是中国想买有些国外
设备，别人不卖。
目前蚀刻设备精度最高的是日立。其实看看英特尔的最佳供应商就知道了，一块CPU要
制造出来需要N多东西。INTEL的牛逼，离不开其供应商，有些是独家供应。其他厂商想
买都买不成。比如东丽，帝人的炭纤维，超高精密仪器，数控机床，光栅刻画机（这个
最牛的也是日立，刻画精度达到10000g/mm ），光刻机（ASML）等等，这些是美日严格
限制出口的。。分不清啥叫蚀刻机，啥叫光刻机，啥叫光栅刻画机的自己去GOOGLE。
以下是英特尔颁布的 SCQI和PQS 奖最佳供应商：
1 、SCQI奖 （英特尔用的蚀刻设备和显微镜，监测装置就是日立的）。
2、 PQS奖
可以看到一个块CPU要制造出来，需要N多设备和材料。 前十大半导体设备生产商中，
有美国企业 4 家，日本企业 5 家。
B:半导体材料
生产半导体芯片需要 19 种必须的材料，缺一不可，且大多数材料具备极高的技术壁垒
，因此半导体材料... 阅读全帖 |
|
发帖数: 1 | 26 中国目前未掌握的核心技术有哪些？ 多项大幅落后美日
近些年，中国在科技领域的进步很快，也让无数中国人深感自豪。然而，大家是
否思考过一个问题：中国目前还未掌握的核心技术有哪些？在知乎，各个领域的“大神
”给出了一些答案，结果令人震惊。这些答案比较专业，估计会有很多人看不太懂。但
简单来说就是一句话：中国还未掌握的核心技术，还有很多，绝对超出你的想象。差距
很大，中国仍需加油！
这篇文章很长，只是覆盖了冰山一角。虽然有争议，但绝对值得一读。
以下只是冰山一角。总之，如果你深入了解，全世界任何高科技产品，都离不
开美日的材料，零件，设备，美国软件第一，日本硬件第一。别看媒体上扯淡的多，这
两个谁也离不开谁。
1、A 半导体加工设备
基本被日本，美国霸占，看intel的最佳供应商就知道了。不同的是中国想买有些
国外设备，别人不卖。
目前蚀刻设备精度最高的是日立。其实看看英特尔的最佳供应商就知道了，一块
CPU要制造出来需要N多东西。INTEL的牛逼，离不开其供应商，有些是独家供应。其他
厂商想买都买不成。比如东丽，帝人的炭纤维，超高精密仪器，数控机床，光栅刻画机
（这个... 阅读全帖 |
|
h***e
发帖数: 20195 | 27 【 以下文字转载自 Fashion 讨论区 】
发信人: sarahj (sarah), 信区: Fashion
标 题: 鼓起勇气首奔-新买的Chanel XL jumbo flap
发信站: BBS 未名空间站 (Sun Jul 26 23:31:21 2009, 美东)
第一次奔,姐妹们轻拍...
Chanel Maxi Caviar flap bag,在纽约57街的店买的.本来是要买个jumbo的,但是所有
的金链子的都sold out,店员说估计12月前是不会有的了...想想我个子比较大(173cm),
所以Maxi就Maxi把.
google了介绍,说Maxi是旧款新出版,2009应广大C迷呼吁从新推出市场的,里面不象2.55
那样有2层盖子,有一个隔层和里面再一个拉链口袋.包包很大,可以放一大堆东西比如午
饭盒撒的,不过新包,还暂时有些心痛... |
|
h**6
发帖数: 4160 | 28 用力矩的算法，复杂度O(n^2)
#include
#include
#include
#include
using std::string;
using std::vector;
using stdext::hash_map;
void weightcenter(string str)
{
int n = str.size();
vector w(n);
for(int i = 0; i < n; i++) {
w[i] = str[i] - '0';
}
vector >weight(n, vector(n));
vector >torque(n, vector(n));
int maxlen=-1, maxi=-1, maxj=-1;
for(int len = 1; len <= n/2; len++) {
hash_map阅读全帖 |
|
f**********s
发帖数: 3095 | 29 你有些话我认同，有些话就是扯，挺没劲的，。
我记得你反复说妮可里奇穿好看，只有那样骨感的人穿maxi才好看，贴了一大堆的照片。
我不知道你是谁，就是感觉你太自以为是了，就说了句“这种裙子亚洲人很难穿好看吧
”。
我当时上课，回来看到跟了好多页的跟帖了，我作为楼主说话本着小心注意的态度来，
怕你们说我是不开心什么的，再加上第一次发贴，后来看到很多人就“妮可里奇”那么
瘦骨感的人穿好看，还是我这样有点“丰满”的人穿好看，争论不休，我才说了句亚洲人
很难穿好看吧？我也不认为自己骨感的人才能穿maxi......
其实我原来看了很多宝驴的帖子，在她的帖子里也个人认为不太喜欢她穿maxi的感觉。
我认为这没什么吧？？！！！
你和jiucaihezi就是原版主还吵个不停呢，就是就我的身材丰满穿maxi不好看来的，
后来有人说你“泛酸”，你就把自己是32C，还把自己上半身的照片贴上了吧，我记得
很清楚。
我从来没自称什么＂时尚风向标＂，这是你自己在胡扯，胡搅蛮缠的。 |
|
h***9
发帖数: 662 | 30 先谢谢大家的答复。
报告一下进展。我后来用Not1-HF切了，杂带还是在。未切的质粒里也有同样的杂带，
证明不是酶切的问题。试了老早以前做的另一个maxi prep的质粒，同样用Not1-HF切，
那个却很干净，没有杂带。
另外，差不多同时做的mini prep的这个出问题的maxi prep质粒，也出现同样的杂带。证明不是maxi prep kit的问题。
我现在怀疑是competent cell的问题了，因为老早以前用的是公司买的，最近用的是同事做
的。准备弄点公司买来的cell,重做maxi prep. |
|
h*h
发帖数: 27852 | 31 【 以下文字转载自 Dreamer 讨论区 】
发信人: Dreamer (不要问我从哪里来), 信区: Dreamer
标 题: 致爱国鸡血愤青：中国尚未掌控的核心技术清单，让你了解该抵制些什么！
发信站: BBS 未名空间站 (Thu Mar 29 12:46:32 2018, 美东)
日本就是牛逼，世界第一名副其实
致爱国鸡血愤青：中国尚未掌控的核心技术清单，让你了解该抵制些什么！
2018-03-26 不读平凡书
来源：知乎/ WPR
认清自己科技水平不妨碍我们爱党爱国爱人民。
1、A ：半导体加工设备
基本被日本，美国霸占，看Intel的最佳供应商就知道了。
目前蚀刻设备精度最高的是日立。Intel离不开其供应商，有些是独家供应，其他厂商
想买都买不成。比如东丽，帝人的炭纤维，超高精密仪器，数控机床，光栅刻画机（这
个最牛的也是日立，刻画精度达到10000g/mm ），光刻机（ASML）等等，这些是美日严
格限制出口的
一个块CPU要制造出来，需要N多设备和材料。全球前十大半导体设备生产商中，有美国
企业 4 家，日本企业 5 家。
B：半导体材料
生产半导体芯片需要 19... 阅读全帖 |
|
c*********d
发帖数: 9770 | 32 2018-03-31 中华外参 中华外参 微信号 zhwc826
功能介绍
《中华外参》解析中华未来，参考社会之道！
来源：天涯论坛
编者按：
在本次中美贸易战中，我们的民族情绪膨胀到爆棚。很多人认为，我们当前经济实力已
经足够强大，出口的都是工业品，可以完全摆脱贸易规则，和老美这个农业大国“”摊
牌大干一场了！但是，任何贸易的背后，都是实业在支撑！没有实业的强大，就没有贸
易的支撑。这篇文章，可能会让我们一些人更加清醒，我们到底有没有挑战世界老大的
实力？我们的制造业和世界一流水平到底还相差多远？
1、A：半导体加工设备
基本被日本，美国霸占，看Intel的最佳供应商就知道了。
目前蚀刻设备精度最高的是日立。Intel离不开其供应商，有些是独家供应，其他厂商
想买都买不成。比如东丽，帝人的炭纤维，超高精密仪器，数控机床，光栅刻画机（这
个最牛的也是日立，刻画精度达到10000g/mm ），光刻机（ASML）等等，这些是美日严
格限制出口的
一个块CPU要制造出来，需要N多设备和材料。全球前十大半导体设备生产商中，有美国
企业 4 家，日本企业 5 家。
B：半导体材料
生产半导体芯片... 阅读全帖 |
|
发帖数: 1 | 33 Stone Cold Word
Longboat Key, Florida4m ago
AG Barr investigating a missing Twinkie is a joke.
So I am reading all these comments laughing and calling out "conspiracy
theories". It's easy to "throw shade"..... getting "shade to stick" is
another story.
I know this. A high profile prisoner, who supposedly tried to kill
himself just two weeks ago, this guy could not get near a 6 inch piece of
thread. Now that's not a "conspiracy theory".
The "shade slingers" want us to believe that this ego ... 阅读全帖 |
|
l*******b
发帖数: 2586 | 34 没看明白人家的想法。。。自己另写了一个
int maxPIII(vector &p) {
/* observation:
* maxIII = maxI + max local drop OR maxI + another maxI
*/
int lmin = INT_MAX, lmax, ldrop, rise = 0, total = 0;
for(int i = 0; i < p.size(); ++i) {
if(p[i] < lmin) {
lmin = p[i];
lmax = p[i];
ldrop = rise;
/* reset ldrop as max of local drop and previous rise */
continue;
}
... 阅读全帖 |
|
l*******b
发帖数: 2586 | 35 没看明白人家的想法。。。自己另写了一个
int maxPIII(vector &p) {
/* observation:
* maxIII = maxI + max local drop OR maxI + another maxI
*/
int lmin = INT_MAX, lmax, ldrop, rise = 0, total = 0;
for(int i = 0; i < p.size(); ++i) {
if(p[i] < lmin) {
lmin = p[i];
lmax = p[i];
ldrop = rise;
/* reset ldrop as max of local drop and previous rise */
continue;
}
... 阅读全帖 |
|
l******s
发帖数: 3045 | 36 private void rotateImage(int[,] board, int k)
{
int m = board.GetLength(0), n = board.GetLength(1);
int cycleM = m, cycleN = n;
while(cycleM > 1)
{
int oX = (m - cycleM) / 2, oY = (n - cycleN) / 2;
int[] xy = new int[2] { oX, oY };
int tmp = board[xy[0], xy[1]];
int[] nextXY = getNextXY(xy, m, n, cycleM, cycleN, k);
while(nextXY[0] != oX || nextXY[1] != oY)
{
tmp = tmp ^ board[nextXY[0], nextXY[1]] ^ (board[nextXY[0],
ne... 阅读全帖 |
|
d*********s
发帖数: 109 | 37 为尚未出世的宝宝买了各种各样的cloth diaper，其中一款是gDiaper, 不过没有买
flushable refills. 今天突发奇想，把equate(walmart brand) maxi with flexi-
wings super (medium size) 放在gDiaper (small)的防水的liner里正好。比较一下尿
不湿和maxi pads的价, maxi pad差不多是一半。 |
|
|
a******o
发帖数: 7982 | 39 推荐Chicco Keyfit 30, 比较过Chicco, Graco, Maxi cosi, B-safte.
B-Safe的角度很奇怪， 凹的太厉害。
Maxi cosi 的carry weight 比较小，只有22lb,里面感觉小一点点。但是是最轻的，有
的人比较喜欢轻点能拎起来。但是我把maxi cosi, Graco, Chicco, 三者都去掉底座，
只提篮子，就觉得差别不大了。
最后剩下Graco & Chicco 比较，Chicco的面料和做工要比graco 好，两者都是carry
weight 30lb. 最后选的chicco keyfit 30, 这个是排美国No1 的car seat, 推荐。
amamzon & target现在都有25% off, 颜色选择比较多。官网chiccousa 上有两个颜色
打折60, 最后$130下来的 |
|
|
|
f******5
发帖数: 165 | 42 开春了，更新两条裙子
1. Harold's 蓝色裙子 size 0, like new condition 100% cotton 我就穿过一次，这
个牌子我前面介绍过了，颜色很衬东方人肤色，衣服质量和做工很细致，照片里面可以
看出来除了印花布料表面还有提花，有内衬，并且都有滚边的，衣服肩带下面有专门的
内衣肩带固定的小暗扣（第三张图片），买这件的MM拿到实物绝对不会后悔的。
Ask for 10
2. TJ来的Maxi, size s, 等同于BR家的xs, 当时为了去海边玩买的，出去玩的时候穿了1-2次吧，后来再也没有穿
过了，当时一直找不到长度合适的maxi（我身高160cm， 110lb), 这件长度正好，而且
我最喜欢的一点是，前胸的衣服里面有类似运动内衣的垫片，不需要穿内衣，直接穿也
不会走光，因为我觉得maxi有时候很难找到合适的内衣搭配的说。后面有个真人，给大
家参考上身效果。
Ask for 10 |
|
G***a
发帖数: 27294 | 43 这件事就算了：）以后都不提了
烟花开始来的时候，我很喜欢她。原因很简单，我喜欢实在，痛快的人。
但是烟花今天说了一句十分不实在的话，她说紫苏说”maxi dress只适合高瘦的人穿，
blah blah，不适合丰满 blah blah”maxi dress那件事情仿佛激发了她很不开心的回忆
但是当天的事情，我记得很清楚。应该是很温馨的回忆才对。
紫苏是这样说的，烟花show的那3款maxi dress不适合胸部丰满的人，她应该买个在锁
骨部收住的款式。紫苏还特意贴了这种款式的图片。
烟花忘了么？ 烟花是否应该念点旧情？ 我要是紫苏，我都寒心。
曾经那么多次热心的指点和帮助，就算这次有点小“过“，也应该早拿往日情份抵过去
了！
我想烟花是无心。
因为经过这么长时间的观察，我认为烟花还是个实在人，只是稍微好面子，说话有点”
楞“而已，加上容易着急。
紫苏也只是好强，爱争理而已。
jm之间，谁不心知肚明？ 谁不明白谁的斤两，谁的个性？
要说底下看的，也都是明白人，聪明人。
所以以后聪明人，就都别踩别人爆点，都躲着走，绕着说，这事情就解决了
而全是烟花的不对。那个长帖我也看了，前面从头到脚一 |
|
I*****e
发帖数: 15123 | 44 我晕倒阿！那我抱着我的maxi,虽然犹如抱了个炸药包，我还是很欣慰啊。
我的maxi才买成1500块钱。。。。。hiahiahia
估计现在maxi已经3400了吧。。 |
|
n****o
发帖数: 14771 | 45 没看出胖啊关键是！就看见澎湃了！
我去年特迷maxi dress，今年又迷上maxi skirt了...还没有看见好的...
话说我觉得maxi还是在自然景观中最好看！可惜我要奔也只有室内小作坊产品... |
|
c********o
发帖数: 5484 | 46 我也特迷茫，我咋就那么凶了，哈哈~~~~
我记得你有一条黑白相间的maxi吧，很素雅的，maxi skirt也不错啊，我觉得你皮肤那
么白应该尝试
一些花色的print啦~~~~~
我觉得maxi在热带风景里最有感觉，哈哈~你赶紧穿上裙子，到海边去拍~~~~~ |
|
s***l
发帖数: 42 | 47 1.start from 3-4ml fresh overnight culture, pellet cell in 8000rpm in cold for
3min
2.resuspend in 200ul P1
3.lysis with with 400ul P2 <5min in RT
4.neutralize with 300ul P3 on ice for 5 min
5.spin down 10min at maxi spped in cold
6.supernatant to a new tube
7.add 0.75ml cold isopropanol
8.spin at maxi speed RT for 15min
9.discard supernatant, wash with 0.5ml ethanol, spin 5min maxi speed in cold
10. asirate supernatant and air dry DNA till pellet starts to turn translucent
Caution: DON'T OVER D |
|
f**u
发帖数: 346 | 48 呵呵，你这样能沉淀下来DNA才奇怪呢。DNA的酒精或者异丙醇沉淀是需要一定的盐浓度
的，常用的是0.3M NaAc。如果盐浓度不够是沉不下来的。你做Maxiprep的时候洗脱的
那一步是高盐洗脱，所以你第一遍沉淀不需要自己加盐，但是当你把沉淀溶解了以后二
次沉淀进一步纯化的时候一定要加盐才行。
另外说一句，你想把DNA里的盐完全去掉从化学上就是不可能的，磷酸骨架上的负电必
须要有正电的阳离子去中和，即使你用水去溶你的沉淀，或者用水从柱子上洗脱DNA，
都免不了有微量的盐。所以更可行的办法是找到一种和你的病毒包装实验compatible的
盐。由于Qiagen的elution buffer里的盐对于有些实验是不好的，所以有时候的确是需
要二次沉淀，不过沉淀前一定要自己调整盐浓度，一般来说加0.1体积的3M NaAc (PH 5
.2)，然后再用1体积异丙醇，或者三体积酒精沉淀。我的经验温度是不重要的。冰箱不
冰箱无所谓。
另外向Maxi这种很麻烦的，建议你离心以后把上清留着，这倒确认最后得到了DNA。另
外对于Maxi，绝对不可能看不到沉淀，你肯定能看到很大很大的沉淀才对，否则肯定是
哪... 阅读全帖 |
|
|
