g*******f
发帖数: 427 | 1 I think macrophage activation and subpopulation is still deserved to be
studied, especially in the context of special disease or physiological
condition, such as the classically activated and alternative activated
macrophage in adipogenesis and insulin resistence. I just read a paper about
a new Foxp3 positive macrophage which display immunosuppressive activity.
Actually macrophage is one of the most heterogeneous cell population. I
think how the different phenoytpe of macrophage is differentiat... 阅读全帖 |
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a*******g
发帖数: 33 | 2 Hello. I work with a line of myeloid cell specific gene KO mice recombined
by LysM-Cre. Boss would like to know the KO efficiency in adipose
macrophages. In stromal vascular cells from adipose tissue, CD11b magnetic
beads were used to seperate macrophages. Surprisingly, the CD11b negative
group showed a pure monocyte/macrophage group judged from morphology in Diff
quick stained slides, while the positive population included more
neutrophils.Anyone has similar adipose tissue macrophage seperation... 阅读全帖 |
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p****e
发帖数: 105 | 3 上来问问各位生物同学，实在没有办法了。最近试验发现小鼠皮下注射后一些lipids能
很好的留在淋巴结里，主要是macrophage的uptake，初步试验似乎是albumin和这些
lipids高度亲和，将它们带至淋巴结，但是albumin是如何转运这些lipids到
macrophage的呢？如果是nonspecific cell membrane insertion, 似乎淋巴结里其他
的细胞（B，T，Cells）因该也会分一杯羹。我的问题是：一般说来，lipids或者是
fatty acids是如何被lymph node macrophage 捕获的？有没有cell-surface receptor
在macrophage细胞表面？多谢，我不是学生物的。 |
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s********n
发帖数: 248 | 4 我实验需要培养B6和一种mutant老鼠的Bone marrow macrophage,然后比较细胞的对LPS
,IFN beta， gamma等stimuli的反应区别，以及antigen presentation to CD4+ T
cell，nitro oxide production还有phagocytosis的区别。
我原来的protocol就是把bone marrow放在有M-CSF（L-Cell media）的media里养6-7天
，replate以后就用。后来隔壁实验室的老教授说，你这样养7天，得到的细胞其实更接
近于monocyte,还需要把细胞在no-M-CSF media里养2-3天，才能得到real macrophage
。可是我在文献中查不到这种说法的依据。
我老板原来是做T cell的，也不太清楚这个问题。
大家谁做过Macrophage啊？是不是如这个老师说的？还是说不同实验目的，培养方法也
不一样？
多谢了先！ |
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p****x
发帖数: 4260 | 5 【 以下文字转载自 Notice 讨论区 】
发信人: deliver (自动发信系统), 信区:
标 题: phynix 封 Macrophage 在 Money 版
发信站: BBS 未名空间站自动发信系统 (Tue Dec 28 19:59:34 2010)
【此篇文章是由自动发信系统所张贴】
由于 Macrophage 在 Money 版的 置底版规严禁referral 行为，
被暂时取消在本版的发文权力 14 天。
版主:phynix
Tue Dec 28 19:59:10 2010 |
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w*****n
发帖数: 310 | 6 我用的Macrophage细胞系为Raw,想看看Macrophage细胞在IL-6的作用下M1 and M2分化
。染色总是不好。想求助一个在Raw细胞work的protocol. |
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a*******g
发帖数: 162 | 7 最近发现我做的GENE有可能和M2 MACROPHAGE有关系，请问有什么好的MODEL可以说明我
这个GENE在M2 MACROPHAGE里的功能。用了CHITIN MODEL，但是觉得CHITIN很INDIRECT
。多谢！ |
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f*******e
发帖数: 109 | 8 T细胞，NK细胞的记忆一直有人研究。macrophage有哪方面的记忆功能？通常
macrophage是固有免疫细胞的。
【 在 hardest (hardest) 的大作中提到: 】 |
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z*y
发帖数: 84 | 9 你说的是bone marrow derived macrophages吗？如果是，可以用0.02%EDTA in PBS来
detach细胞，在4度5-10 min，然后用cell lifter or scraper把细胞刮下来。不知道
你培养这些macrophages的时候用的什么medium，我是用含10% L cell supernatants,
5% horse serum 和10% 胎牛血清的DMEM （0-7天），然后5% L cell supernatants, 5
% horse serum 和10% 胎牛血清的DMEM （7-10天）。或者你可以直接加GM-CSF，但是
我不知道浓度，也没这样做过。如果用普通medium几个小时也许可以，长时间肯定不行
。 |
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x*****a
发帖数: 972 | 10 CD31在macrophage也有大量表达。如果看Murine macrophage，F4/80是个比较接受的
marker，但是F4/80在有些dendritic cell或者monocyte上也有表达，所以F4/80是个不
完全纯粹的marker。
CD34是个stem cell/progenitor cell的marker，如果是非常成熟的endothelial cells
，是不太表达这个的，你染出来的可能是较为后期的endothelial progenitor cell。
其实vWF就是最好的了，既然染出来了，就可以了啊。VE那个当然也行。 |
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D*a
发帖数: 6830 | 11 多谢多谢～
一个reviewer让我们做vWF，我们做了，被拒了，换到另一家，说vWF不够好，让换个 T
_T
macrophage那个其实我们本来也跟免疫没啥联系吧，他让做immune cell，我们才想是
不是可以做做macrophage。
不过整体还是挺正面的回复，所以只能从了他了吧。。。
cells |
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l******n
发帖数: 298 | 12 刚看见，，，，
内皮细胞肯定是cd31,这个用confocal做吧，我的是别人做的，肯定是不好做，挑点好
结果就行了，别跟他们较劲。
macrophage经典的还是F4/80,老鼠就是这个，moma-2也不错哦。cd68好像用人多一点，
cd11b就不是很清楚，与分化有关但是不是特异macrophage marker.
Stefanie Dimmeler,做了不少cd31,你看看她有没有相关的cd31.把他的文章引用上，美
国的话做内皮我知道有douglas losordo,他应该也有相关的文章。
祝福好运。 |
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d****i
发帖数: 2346 | 13 谢谢楼上几位！
1. 我要做peritoneal macrophage和splenocytes的bancteria killing。
2. 我是从mouse分离细胞后，把splenocyte (2x10^6)和bacteria混合在1.5mL的tube里
面，然后
放在37C培养箱30min。然后1500rpm离心，结果发现要么没有沉淀，要么在下一步洗去
bacteria的时候细胞沉淀就没有了。很郁闷！本来应该是这一步离心之后细胞形成
pellet，细菌在上清，去除上清就可以去除细菌了。
3. 做过的同学你们是怎么做的？
4. 后面还要用macrophage做同样的实验，这一步不能继续了，不知道怎么改进。
非常感谢！如果哪位手里有详细的protocol恳请能分享一下。 |
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r*********t
发帖数: 15 | 14 想IF 染老鼠肺里的cd11b monocytes 和 m1 macrophages,找了很长时间，也没有发现
好的标记. cd11b 还好，F4/80 ,Cd206 染了到处都是，可能是肺里的macrophages 太
多了。 我该用cd68 和 iNos 吗，请各位大牛出个点子。 |
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c********e
发帖数: 598 | 15 You are looking for Macrophages in the lung. Why not using FACS to look at
the phenotypic markers (you mentioned some above) of lung Macrophages in
your system?
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r*********t
发帖数: 15 | 16 已经做了Facs.但还想在IF中显示 cd11b monocyte 和m1 macrophages. CD11b 和 iNos
都不能排除neutrophil,F4/80 不好，stain 了大多数肺细胞，不知道还有什么好的
monocyte/macrophage marker 可以用于老鼠肺，cd68 在肺里怎样？
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p*******i
发帖数: 141 | 17 杂志：International Journal of Biological Macromolecules
标题：Macrophage activation stimulated by a polysaccharide from Nostoc
commune Vauch
有意者请短信息 简单用英文介绍一下背景，这样可以转发给主编。最后还须看主编的
意向。 |
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h*******n
发帖数: 2052 | 18 请问peritoneal macrophage怎么进一步纯化呀？数的时候很多大大小小的细胞， 貌似
很不纯啊 |
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s**x
发帖数: 138 | 19 我曾经做过这个。macrophage很大，小的是红细胞。所以，你再打开腹膜腔的时候，
注意不要损伤到血管。而且，macro是贴壁的。红细胞不贴壁。你可以多用PBS洗几次。
据说，用水短时间洗一下(after 贴壁)， 红细胞会很快裂解。而macro不会。 |
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w***a
发帖数: 4361 | 20 可以trypsin处理几分钟，然后PBS wash就行了。
macrophage贴壁很紧的，只能用scraper刮。 |
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a*****g
发帖数: 543 | 21 应该还要加RANKL
LPS
macrophage |
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s****9
发帖数: 932 | 22 Are you sure?
I am not a macrophage expert. But I believed that RANKL+M-CSF turn BM cells
differentiate into osteoclast. |
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s****u
发帖数: 483 | 23 MCSF 6,7天出来的只要是贴壁的都基本上是MCs而不是monocyte了，他不信你让他去做
CD14 staining.
LPS
macrophage |
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w******h
发帖数: 47 | 24 我是参照CURRENT PROTOCOL in immuology 的方法做的，和你的protocol差不多，只不
过我用的是 M-CSF,培养7天后flow cyotmetry显示有超过98%的细胞是CD11B+F4/80+,所
以他们是MACROPHAGE,不是monocytes。 |
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i**9
发帖数: 1277 | 25 做实验要用macrophage，我们想用cell line 就选了raw。可是有个老师跟我说raw 是
differenciated cell 不能proliferate，知道的同学帮忙说一下。谢谢。 |
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f*******e
发帖数: 109 | 26 大家八卦中场休息时讨论一下Macrophage方向有哪些方向有前途？有哪些重要问题值得
研究？ |
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h*****t
发帖数: 103 | 27 我觉得macrophage记忆方面的研究，做起来可能很有意思。 |
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f*******e
发帖数: 109 | 28 我还真不认为那篇cell paper是个big deal.你能告诉我那篇文章对Macrophage领域有
多大贡献？【 在 hardest (hardest) 的大作中提到: 】 |
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h*****t
发帖数: 103 | 29 哦，那把我招过去吧，我做做macrophage的记忆。 |
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h******t
发帖数: 56 | 30 最近开始culture PBMC differentiated macrophages, 第一天用deads 分离出来的时
候cell还挺好的，都贴墅生长了,可是第二天一看很多cell凑成团,还有将近一半的cell
悬浮了.所以上来问问各位牛人,这种现象正常吗?还是我的操作有什么问题.谢谢! |
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W****C
发帖数: 1937 | 31 养macrophage要用conditional medium吧 |
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s****u
发帖数: 483 | 32 what kind of beads did you use? i suppose you are using them to isloate CD14
+ monocytes for macrophage differentiation. Otherwise, it's not suprising to
see dead T cells in your culture.
cell |
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D*a
发帖数: 6830 | 33 用在paraffin的小鼠胚胎肺组织IHC上，
microvascular/capillary 我们用了vWF，reviewer让我们重复，推荐的是CD31, CD34
或者VE-cadherin，不知道哪个公司的好用？
免疫系统完全没概念，据说可以用CD11b看macrophage，但是据说CD11b在paraffin的组
织上不管用？其他的不知道了。。。
因为有时间限制，所以想最好是不要试太久，能一次管用最好拉～
有包子滴～ |
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n***w
发帖数: 2405 | 34 起码我用的millipore hamster anti-cd31在paraffin上不好使。你可以试试BD
pharmingen的。
macrophage的话，还可以用CD45. 但是我没有做过染色。 |
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S******9
发帖数: 2837 | 35 CD31 BD
Macrophage: mac3 or F4/80 |
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n******w
发帖数: 70 | 36 vascular ECs CD31 MEC13.3鼠组织paraffin上不工作(工作了效果也不好，不会将所有
ec染上)，替代者可以是cd34（每一个batch差别比较大）, isolectin b4(效果很好，
vector lab)。
macrophage用f4/80不错，paraffin上效果挺好。
以上抗体我都用过，信息没错。
CD34 |
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w*********n
发帖数: 439 | 37 你确定是macrophage不是DC吗？皮肤里面主要是郎格罕氏细胞（皮肤的DC）
receptor |
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J******s
发帖数: 7538 | 38 There is lipid (fatty acid) binding site in albumin, and albumin can be
phagocytosed by macrophages.
http://www.annualreviews.org/doi/abs/10.1146/annurev.immunol.17
I have a question,
is the lymph node draining LN? and where are those macropages located in LN?
subcapsular sinus, medullary sinus or medullary cord?
receptor |
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p****e
发帖数: 105 | 39 是有少部分DC in lymph nodes 也uptake，但大部分都是macrophage，皮下注射2小时
后淋巴结里就有大量的lipids，所以主要可能还是lymph node draining而不是兰格汉
DC transfer. |
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p****e
发帖数: 105 | 40 多谢！会仔细看文章。
yes, they drained to draining LNs, I normally do tailbase s.c. the lipids
end up in inguinal nodes and axilliary nodes. And most of the macrophages (
stained positive for F4/80) are at subcapsular sinus.
LN? |
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n******r
发帖数: 9 | 41 Which bacteria and what kind of macrophages? Human or mouse? |
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a***y
发帖数: 19743 | 42 求推荐
请问有什么好的方法在macrophage或neutrophil里做RNAi？
显然，做这种都希望快，省时，容易……。
orz跪求建议啦！ |
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z*******6
发帖数: 679 | 43 in vitro哪来的neutrophil??...
macrophage是bone marrow derived?... |
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z*t
发帖数: 863 | 44 Beutler得奖，Medzhitov会不会有意见？
http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S1074761309002
Ruslan Medzhitov
This year marks the 20th anniversary of a publication (Janeway, 1989) that
in many ways revolutionized our understanding of the immune system. As part
of the proceedings of the Cold Spring Harbor Symposium on Immune Recognition
, the paper authored by the late Charles A. Janeway, Jr. was not a standard
peer-reviewed publication. In fact, Charlie used to refer to it as “the
best paper I've ... 阅读全帖 |
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p**t
发帖数: 160 | 45 Please read this paper, you are misleading others.
-----------J Innate Immun. 2012;4(5-6):424-36. doi: 10.1159/000337007. Epub
2012 Apr 4.
Lymph node macrophages.
Gray EE, Cyster JG.
Source
Howard Hughes Medical Institute and Department of Microbiology and
Immunology, University of California San Francisco, San Francisco, CA 94143-
0414, USA.
Abstract
Lymph node (LN) macrophages have long been known for their efficient uptake
of lymph-borne antigens. A convergence of studies on innate and adapti... 阅读全帖 |
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m******g
发帖数: 69 | 46 Biochem Biophys Res Commun. 2010 Aug 6;398(4):723-9. Epub 2010 Jul 17.
Adipocyte-derived microvesicles contain RNA that is transported into
macrophages and might be secreted into blood circulation.
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/20621060
这篇paper说脂肪细胞分泌的microvesicle里面的RNA可以转移到macrophages里面，然
后macrophage的adiponeticn和resistin会升高。 他们的方法是，建立一个adipocyte
系3T3-L1，然后培养，然后把adipocyte的culture centrifuge, 提取出supernatant，
然后把supernatant进行ultracentrifuge，沉淀出这种microvesicle
请问这种方法是否可行，因为这步的关键是分离提纯microvesicl... 阅读全帖 |
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O*********e
发帖数: 79 | 47 天，这个都会上首页。。
多谢wdgca的回复，我也觉得是macrophage的问题。下次用那个kit试试看
不是干透的问题，我提RNA已经有4年了，从来不用speed vacuum，都是风干的，pellet
一变透明就加TE。TE和water我都用过，做microarray的样品用nuclease-free water，
其他没那么高质量要求的时候就用TE，没发现什么区别。还有我前面说过，我同时提的
macrophage和splenocyte的RNA，后者一点问题都没有，macrophage的RNA pellet其实
还小些，但就是不溶。昨天折腾了好久，还是能看到薄薄的一片pellet飘在管子里，但
测 OD到了100ng/ul，足够一个反转录PCR了,就将就着用了。下次一定试试那个Qiagen
RNeasy Kit。也给以后要提macrophage RNA的同学提个醒，really tough pellet，要
是样品宝贵的话不要自己提，直接上kit。 |
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s****9
发帖数: 932 | 48 If they express T cell receptor (e.g. CD3 or TCRbeta), they are bona fide T
cells. You can stimulate them with plated bounded CD3/CD28 to see whether
they can proliferate, which is a function indicator for T cells.
Regarding macrophage, you could stain a few typical macrophage marker, such
as F4/80, CD11b, lysozyme M as you mentioned. The morphology of macrophage
is quite different from T cells as well.
You do not need a reference. Instead, you should add some splenic T and
macrophage as posi... 阅读全帖 |
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n***3
发帖数: 663 | 49 For functionality determination of macrophages, you can stimulate the cells
with Toll-like receptor agonists (e.g. LPS). The stimulated macrophages will
release TNF and IL-6. Also, macrophages are known to engulf foreign
pathogens, you might want to also verify their engulfing ability by using
certain bacteria.
It really depends on how far you want to go and how satisfied the reviewers
would be.
Good luck!
T
such
macrophage |
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p**t
发帖数: 160 | 50 We are talking about science here. Not necessary to comment on others.
LZ did not give much information of his experiment, so what you listed
in below is also pure speculation.
Here I attach a pic what I stained with LYVE-1 in LN,
which is also inflammatory.
The red signal is LYVE-1, blue is B cell region.
Fat should not be problem in isolating LN.
I agree with you that there might be problem of specific staining.
I assume that in the LN of his model, here might be expansion of
both macrophages ... 阅读全帖 |
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