b****r
发帖数: 17995 | 1 说错的地方大家指教
这个人第一个找到了TLR4 和Lps的关系，让Yale几个做免疫多年的人极不爽。yale的innate
immunity在一代宗师Charles Janeway的带领下出了一群牛人，进去的faculty自动就是
HHMI， Toll like receptor 家族里另外几个的配体都是Yale做出来的。话说TLR4其实
Janeway和他的天才俄国博后Medzhitov先做出来的，beutler的文章是98年出的，
Janeway 97年就发了文章，只可惜他并没有找到TLR4的配体，只是强行dimerize 俩
TLR4constitutively激活了TLR4和下游的反应。
Beutler做出这玩意后，就开始加入innate immunity这个小圈子。圈子里的会议那时候
主要还是Yale那一派把持，说怎么个不是正儿八经innate immunity的家伙到我们这里
招摇来了？据说在那些年很是给他穿了几年小鞋。不过这哥们虽然用的是这种奇怪的招
数，但是功利实在太深厚，钱实在太多，接下来的东西一篇一篇出，Yale免疫那几个
HHMI拍马都赶不上。
这次这哥们竟然靠i... 阅读全帖 |
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b****r
发帖数: 17995 | 2 就是说C57天生俩TLR4 copy都有突变，所以C57老鼠对TLR4的配体Lps比较不敏感 |
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c******a
发帖数: 267 | 3 I think the mouse line with tlr4 mutation is C3H/HeJ line, not C57/BL6 mice.
I did all my endotoxic experiments using LPS on C57/BL6 mice, how come they
are TLR4 deficient? |
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b****r
发帖数: 17995 | 4 Science. 1998 Dec 11;282(5396):2085-8.
Defective LPS signaling in C3H/HeJ and C57BL/10ScCr mice: mutations in Tlr4
gene.
Poltorak A, He X, Smirnova I, Liu MY, Van Huffel C, Du X, Birdwell D, Alejos
E, Silva M, Galanos C, Freudenberg M, Ricciardi-Castagnoli P, Layton B,
Beutler B.
Source
Howard Hughes Medical Institute and the Department of Internal Medicine,
University of Texas Southwestern Medical Center, Dallas, TX 75235-9050, USA.
mice.
they |
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s*********y
发帖数: 387 | 5 MAKE SENSE. BL6 CELLS RESPOND TO LPS WAY BETTER THAN BALB/C
mice.
they |
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l**h
发帖数: 998 | 6 我发现本版出现了军版风格, 对事实一知半解，不求甚解, 讲起故事来添油加醋, 仿佛
亲身经历，以爆"内幕八卦"为荣
Defective LPS Signaling in C3H/HeJ and C57BL/10ScCr Mice: Mutations in Tlr4
Gene
我们隔壁实验室大批地用C57BL/6研究TLR4 pathway, 不知道跟C57BL/10ScCr有什么关
系.
军版的业余军迷好忽悠. 咱们这里都是内行, 说话最好讲点credit. |
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e**r
发帖数: 1144 | 7 前些天听weil cornell 的一个老太太作报告
说到 很久以前 有一个品系的老鼠在两个不同地方养的 对LPS反应不一样
当时全世界n多lab都在找哪里不同
是不是就是这个？
Tlr4
Alejos
USA.
合作发展 |
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b****r
发帖数: 17995 | 8 说错的地方大家指教
这个人第一个找到了TLR4 和Lps的关系，让Yale几个做免疫多年的人极不爽。yale的innate
immunity在一代宗师Charles Janeway的带领下出了一群牛人，进去的faculty自动就是
HHMI， Toll like receptor 家族里另外几个的配体都是Yale做出来的。话说TLR4其实
Janeway和他的天才俄国博后Medzhitov先做出来的，beutler的文章是98年出的，
Janeway 97年就发了文章，只可惜他并没有找到TLR4的配体，只是强行dimerize 俩
TLR4constitutively激活了TLR4和下游的反应。
Beutler做出这玩意后，就开始加入innate immunity这个小圈子。圈子里的会议那时候
主要还是Yale那一派把持，说怎么个不是正儿八经innate immunity的家伙到我们这里
招摇来了？据说在那些年很是给他穿了几年小鞋。不过这哥们虽然用的是这种奇怪的招
数，但是功利实在太深厚，钱实在太多，接下来的东西一篇一篇出，Yale免疫那几个
HHMI拍马都赶不上。
这次这哥们竟然靠i... 阅读全帖 |
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b****r
发帖数: 17995 | 9 就是说C57天生俩TLR4 copy都有突变，所以C57/10ScCr老鼠对TLR4的配体Lps比较不敏感 |
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c******a
发帖数: 267 | 10 I think the mouse line with tlr4 mutation is C3H/HeJ line, not C57/BL6 mice.
I did all my endotoxic experiments using LPS on C57/BL6 mice, how come they
are TLR4 deficient? |
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b****r
发帖数: 17995 | 11 Science. 1998 Dec 11;282(5396):2085-8.
Defective LPS signaling in C3H/HeJ and C57BL/10ScCr mice: mutations in Tlr4
gene.
Poltorak A, He X, Smirnova I, Liu MY, Van Huffel C, Du X, Birdwell D, Alejos
E, Silva M, Galanos C, Freudenberg M, Ricciardi-Castagnoli P, Layton B,
Beutler B.
Source
Howard Hughes Medical Institute and the Department of Internal Medicine,
University of Texas Southwestern Medical Center, Dallas, TX 75235-9050, USA.
mice.
they |
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s*********y
发帖数: 387 | 12 MAKE SENSE. BL6 CELLS RESPOND TO LPS WAY BETTER THAN BALB/C
mice.
they |
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l**h
发帖数: 998 | 13 我发现本版出现了军版风格, 对事实一知半解，不求甚解, 讲起故事来添油加醋, 仿佛
亲身经历，以爆"内幕八卦"为荣
Defective LPS Signaling in C3H/HeJ and C57BL/10ScCr Mice: Mutations in Tlr4
Gene
我们隔壁实验室大批地用C57BL/6研究TLR4 pathway, 不知道跟C57BL/10ScCr有什么关
系.
军版的业余军迷好忽悠. 咱们这里都是内行, 说话最好讲点credit. |
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e**r
发帖数: 1144 | 14 前些天听weil cornell 的一个老太太作报告
说到 很久以前 有一个品系的老鼠在两个不同地方养的 对LPS反应不一样
当时全世界n多lab都在找哪里不同
是不是就是这个？
Tlr4
Alejos
USA.
合作发展 |
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S***a
发帖数: 257 | 15 我默认你说的NFkB是p65吧。
phospho-p65在cst上我查了一下，只有Ser468和Ser536这两个位点的磷酸化抗体。
Ser468-P的功能我不太清楚，但是Ser536-P的功能应该很多研究，而且以前我用过这个
抗体很强，我觉得3033应该不错。在Raw细胞上用LPS刺激以后15分钟到一个小时应该都
很强。
其实你要检测NFkB激活，最经典的应该是检测IkB的磷酸化和降解。
如果你都检测不到，你应该查一下你的刺激是否有效（是不是刺激源放太久坏了）或是
细胞出了什么问题 （mycoplasma污染之类的）。
good luck! |
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W****C
发帖数: 1937 | 16 主要是怎么提高细胞的viability，分离过程（我用MACS去除其他细胞)有哪些trick？
激活的方法比较多， LPS, IgM, IL4, PMA...怎么激活最好？ |
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W****C
发帖数: 1937 | 17
谢谢楼上的。 肯定是加血清的啦， 而且要加超低IGG的血清。
应该是连续完成的， FACS鉴定可以同时做（用CD45R).
收细胞后是用来测药效的（cytotoxicity， CTG ASSAY).
刺激Bcell增殖的时候最好专一性好， 大概是因为LPS，PMA也刺激其他免疫细胞 （eg.
T)，我看别人基本都是跟IL4, IGM同时用的。 |
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T****i
发帖数: 15191 | 18 我说的是用老鼠screen 的一般情况，不是说所有的。Bruce Beutler 还是比一般人聪
明了。至少他用TNF水平做表型，他screen 到的gene基本可以确定跟对LPS 的response
有关。 用老鼠screen 的，一般没有太好的办法，因为很难设计方法做selection，只
能brute force screen。好的genetic screen，并不一定说工作量很小，都是
selection, 那有点勉为其难。而是说得到的gene要有功能相关性，最好在一个pathway
，这才说明你的design 很tight, 对后续的研究而言，你也知道在什么方向上。不好的
genetic screen，比如很多人做ENU-induced mutagenesis，然后看老鼠是不是shaky，
等等，你找到的基因可能功能上差者十万八千里。这样做，和偶然发现spontaneous
mutation没什么区别，只不过在时间上更集中而已。所以，phenotypes are not
created equal。好的phenotype (或reporter) 是好的genetic scre... 阅读全帖 |
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f******s
发帖数: 115 | 19 牵强么？我一个reviewer就是揪着这点 别的都没啥实质性意见
我在想能不能通过解释不同细菌组分可能释放的时间不一样，比如lps肯定先释放并且
接触细胞，这样tlr4可以再第一天开始就被化合物抑制；最后可能才是细菌single
stand RNA,这样能解释为什么识别ssRNA的tlr8为什么会在第7天被化合物抑制 这样激
活受体的时间也不一样
say
for |
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L*****t
发帖数: 56 | 20 摘自北京青少年科技创新大赛学生科技创新项目
http://www.student.gov.cn/byscc/gonggao/images/2012/4/18/24826B
高致病性禽流感病毒RNA聚合酶PA亚基N段蛋白的表达,纯化及小分子抑制剂的筛选
小麦膨胀素基因EXPA6的克隆及表达分析
金属光泽羽毛的扫描电子显微镜观察及x射线能谱分析
黄瓜根系的光形态建成
控剪应力微流装置评价JGC-2抗炎及抗损伤修复的实验研究
凉血活血胶囊对咪喹莫特诱导小鼠银屑病样模型IL-23/IL-17炎症轴的调节作用
蘑菇凝集素增强乙肝蛋白疫苗效果的研究
竹荪多糖免疫刺激及抗肿瘤机制效应初探
草莓病原菌的分离与鉴定
小麦赤霉素信号途径相关MYB基因的克隆与表达分析
ApoA-Ⅰ对小鼠LPS诱导3D14 表达的影响
最后那个居然是初三学生的大作，我跪了 |
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n***3
发帖数: 663 | 21 For functionality determination of macrophages, you can stimulate the cells
with Toll-like receptor agonists (e.g. LPS). The stimulated macrophages will
release TNF and IL-6. Also, macrophages are known to engulf foreign
pathogens, you might want to also verify their engulfing ability by using
certain bacteria.
It really depends on how far you want to go and how satisfied the reviewers
would be.
Good luck!
T
such
macrophage |
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o**d
发帖数: 3080 | 22 不光是T／B细胞，也要考虑到macrophage or DC。
For T/B cell, isolate T/b from spleen and stimulate them with CD3/CD28 for T
cell, IgM/LPS/CD40 etc for B cell. Look at proliferation and some cytokines
production (IL-2/IFN-g for T cells), will give your some ideas.
For antibody titer, get sera form mice and do ELISA for IgM/IgG/IgA, etc.
For mf or DC, try use TLRs ligands to stimulate them and look at cytokines
production (ELISA or qPCR).
Should be good for the first run screening. |
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n***3
发帖数: 663 | 23 Eur J Immunol. 2013 Feb 12. doi: 10.1002/eji.201243187. [Epub ahead of print]
The protein kinase PKR is critical for LPS-induced iNOS production but
dispensable for inflammasome activation in macrophages.
Please send the paper to e*********[email protected]
Thanks so much!! |
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s****9
发帖数: 932 | 24 1. 首先，sub-lethal irradiation意味着低剂量的照射，并且没有完全的去除
Hematopoietic stem cells，照射完了以后，老鼠还能够存活,所以才称为sub－lethal。
2. 对于低剂量的照射，还会剩下那些细胞和你的老鼠strain还有照射的dosage关系很
大。Generally，最容易去掉的是B细胞和Naive T cells，还有neutrophil。Memory T
cells, dendritic cells,Macrophage， especially tissue resident DCs and
macrophages are relatively resistant to irradiation.
3. 对于这种低剂量的照射，in addition to hematopoeitic system,它对于
intestinal integrity损伤也很严重。所以，经常的，大家做BM chimera要小剂量多次
照射，就是要减少肠道的伤害。你可以想象的肠道的损伤会导致bacteria leakage
into blood cir... 阅读全帖 |
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s********n
发帖数: 248 | 25 update：
我上周四按照板上的建议，把CFSE浓度降低到0.5uM,10^7cell/ml室温label 8分钟。
昨天取popliteal LN FACS了一下，所有老鼠的都有很多的OTI细胞，也有很好的
proliferation，在wt/ht/mt里边proliferation的区别也看到了。
估计是我之前用的CFSE浓度太高了，T细胞CFSE label以后都死光了。
真心感谢版上大家的帮忙！
需要比较WT和MT的dendritic cell antigen presentation的差异，因为MT的老鼠本书T
/B细胞和wt有差异,所以把老鼠breed 到RAG deficient background里。
实验是这样设计的，把OTI/OTII （2-5×10^6 cell/mouse） 细胞通过静脉注射打进老
鼠体内，一天以后footpad注射OVA+LPS. 再过72小时harvest popliteal lymph node，
看OTI/OTII增殖情况。因为是RAG deficient 老鼠，所以做tail vein injection前没
有irradiate老... 阅读全帖 |
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s********n
发帖数: 248 | 26 我染了CD8/CD4，也没有看到CD8/CD4+ T cells。 我给了100ug/footpad OVA +1ug/
footpad LPS.
我打了5*10^6 cells. |
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d****i
发帖数: 2346 | 27 我用LPS刺激细胞，一直检测不到p65的乙酰化。查文献说p65乙酰化是NF-kB激活的必要
步骤。。。。。
请大牛指点！谢谢！ |
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n***3
发帖数: 663 | 28 Immunopharmacol Immunotoxicol. 2012 Feb;34(1):56-65. doi: 10.3109/08923973.
2011.574704. Epub 2011 Jun 24.
WNT/β-catenin pathway is modulated in asthma patients and LPS-stimulated
RAW264.7 macrophage cell line.
Please send the paper to e*********[email protected]
Thanks! |
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w**********5
发帖数: 1741 | 29 第32届安捷伦北京青少年科技创新大赛学生科技创新项目公示名单(up节选)
up:天朝的中小学生太威武了，十年内必夺诺贝尔奖，百年内一统全球。我看到了祖国
的未来与希望。up表示大学白读了，很多题目看都看不懂。某些医药学，植物学，化工
材料和工程的内容非常碉堡,部分非医药化工类异常碉堡的标红了。
各位等着被雷吧。up已经阵亡了。你们能看懂%多少呢？
小学组
序号 项目编号 项目标题 学科分类 类型 组别 成员
年级 学校名称 辅导教师 区县 获奖等级 专项奖
1 LS12012T 论翼龙骨骼结构与灭绝原因的联系 生命科学 集体项目
小学组 魏博琨 洪瑞怡 小学六年级 小学六年级 北京市东城区史家
胡同小学 北京市东城区史家胡同小学 张培华 东城区 1
10 ... 阅读全帖 |
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f**********r
发帖数: 18251 | 30 【 以下文字转载自 Military 讨论区 】
发信人: judien (Now we are one!), 信区: Military
标 题: 安捷伦！ shame on you！ (转载)
发信站: BBS 未名空间站 (Thu Dec 5 01:04:55 2013, 美东)
发信人: relic (遗迹), 信区: NewExpress
标 题: 安捷伦！ shame on you！
发信站: 水木社区 (Tue Dec 3 23:32:52 2013), 站内
引自：http://www.acfun.tv/v/ac334765
第32届安捷伦北京青少年科技创新大赛学生科技创新项目公示名单(up节选)
小学组
论翼龙骨骼结构与灭绝原因的联系 魏博琨 洪瑞怡
负压式医用手套自动佩戴装置 米尔莉 张苏潼
双轴自稳云台 钱李潜馨 小学六年级
香烟浸出液对春羽介壳虫的防治实验 肖雨涵 小学四年级
北极斯瓦尔巴德群岛朗伊尔宾I号冰川不同海拔梯度环境对北... 阅读全帖 |
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n***3
发帖数: 663 | 31 Immunopharmacol Immunotoxicol. 2012 Feb;34(1):56-65. doi: 10.3109/08923973.
2011.574704. Epub 2011 Jun 24.
WNT/β-catenin pathway is modulated in asthma patients and LPS-stimulated
RAW264.7 macrophage cell line.
Please send the paper to e*********[email protected]
Thanks so much! |
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d****i
发帖数: 2346 | 33
都没出现过信号。
我曾经LPS刺激细胞后IP/WB p65的乙酰化K310的，做不出来乙酰化信号，但是total-
p65信号很强。以前也来版上求教过，搞不懂我在那里出了问题。 |
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e**r
发帖数: 1144 | 34 感染不是会发烧么？
动物和人的反应是不一样的吗？ |
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n***w
发帖数: 2405 | 35 Toxins may affect the brain temperature regulation function. |
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z*******6
发帖数: 679 | 36 Raryyang is correct... Typical septic shock will lead to thermopenia... |
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d****i
发帖数: 2346 | 39 最简单的比如LPS刺激macrophage，一般大家都检测上清TNF等等，那么有没有细胞内适
合做western的marker？谢谢！
目前想用COX2，想问问有没有更好的。 |
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C*********u
发帖数: 811 | 40 IL6, IL8
Their mRNA levels changed a lot by LPS stimulation. |
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s*********a
发帖数: 1409 | 41 这个位置是我梦想的位置，要求的技术我基本都会。可是他们想要cancer research背
景的，我没做过cancer基因，但是做过TNF,LPS信号传导通路什么的。不是很高的职位
，就是research staff+lab manager. 我很喜欢做lab manager和bench work,所以觉得
很适合我。
现在这个老板的办公室离我实验室不远。我以前的一个熟人（中国人，聊过天，互相帮
过小忙，但是没有深交）刚离开他们实验室，大概就是因为这个才招人。
现在我很想申请，想问问哪种机会比较大些：
1。让那个熟人帮我递简历。（那个熟人说可能他们已经招到人了，但是不十分确定。
我是想不管怎么样还是试试。因为在HERC上的广告17号才贴出来。学校官网上不知道贴
多久了。人家已经说了可能已经招到了，我如果还要她帮忙递简历会不会不太好？因为
关系不是特别近那种。）
2。直接给老板写信发简历。
3。直接拿着简历去老板办公室敲门，毛遂自荐。
请问各位大拿，那种机会会大些？ |
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A******y
发帖数: 2041 | 42 I don't know, like how LPS is inserted into the outer membrane maybe. |
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d****i
发帖数: 2346 | 44 就算细菌吸附了LPS还在血液里怎么弄出来？而且败血症来得很快，到医院的时候已经
过了高峰期了。 |
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s******y
发帖数: 28562 | 45 这个方法简单粗暴，可以归入没有办法的办法吧。
如果可以不计较成本的话，是可行的。首先是用high-throughput antibody array在一
个小时之内得知到底是哪个细菌，以及哪个抗体可以结合它。然后对于病人，把血液里
的血细胞和血浆分离开来，再把血浆通过几个不同的带着抗体的filter，把细菌本身，
以及细菌的毒素（比方说LPS)都给清理掉。
成本一定低不了，但是对于军方项目，成本未必是他们关心的指标。 |
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t*******k
发帖数: 87 | 46 Is the LPS-mediated proteinuria mouse model relevant to human kidney disease?
Nature Medicine 15, 133 (2009)
doi:10.1038/nm0209-133a
信箱 [email protected]
/* */
谢谢！ |
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l********n
发帖数: 260 | 47 两年一次的中科院院士增选总是你那么令人瞩目，鉴于2011年和2013年产生的系列“事
件”，本次科学院院士增选选择了直接公布了第二轮名单。何以见得？2011年初步候选
名单77人，进入第二轮30人，最终当选9人（朱玉贤、张学敏、张明杰、李林、赵玉沛
、康乐、黄路生、舒红兵、葛均波）；2013年初步候选名单88人，第二轮没有公布，最
终当选9人（金力、赵继宗、施一公、桂建芳、高福、韩家淮、韩斌、程和平、郝杰）
。从名单上看纯临床医学背景1-2个，作物遗传昆虫~2个，纯生命科学和医学基础5-6个
；2015年实际上是直接进入第二轮名单，候选人30个。
虽然2015年生命学部院士候选人没有首轮名单，但是根据几个一级专业学会（遗传
、生化分子、细胞）推荐的名单约略可以知道部分候选人信息，这部分详见博文2015年
院士增选生命科学领域部分公示名单，不过很遗憾细胞生物学会推荐的董晨教授没能进
入第二轮，国内免疫领域董晨教授的学术水平国内应在Top3（个人觉是No.1^_^），此
次没能进入第二轮可能主要是因为回国时间短。一下是摘录清华官网对董教授的介绍：
董晨教授是世界上著名的免疫学家... 阅读全帖 |
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r**********e
发帖数: 587 | 48 读过Aviv Regev的一些文章，了解一点她的工作；因为距离她近所以坦白说接触过和她
合作的人
single-cell seq, immune response to LPS; regulatory network....
或许我自己做的很偏disease，所以对于这种pure biology/systems biology木有兴趣
，而且觉得都是鸡肋都在骗钱。搞一堆network请问对治病有啥作用？
当然MIT本来就是做pure science的地儿
以我个人小小的经验，我建议搞bioinformatics的都赶紧过来跟MD搞疾病，虽然也是忽
悠骗钱但真的是钱多，money money money money。。。。当然用到临床诊断里也是一
种成就
能。 |
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m********l
发帖数: 98 | 49 it's not an accurate explanation for the VC industry's downsizing.
top-tier VCs still make big bucks.
as an asset class, vc got too much $$ from LPs during the tech bubble.
so the market has been trimming down the investment in VCs, which certainly
impacted the recruiting.
back in 2007/2008, many VCs launched funds that focus on the cleantech space
when it became hot. so a ton of mba graduates got into cleantech vc's. that
period was the best time ever in the past 5 years for VC recruiting. |
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n**********n
发帖数: 153 | 50 如题。我是做生物的，做检测需要用Fucosamine, 2-amino-2-deoxy-guluronic acid,
2-amino-2-deoxy-mannuronic acid做标准品，都是来自细菌LPS的成分，上网上查了很
久，没有找到任何公司，我想化学版的同志们应该对这些东西更熟悉点，哪位知道哪里
能买？谢谢了！ |
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