l*u
发帖数: 17 | 1 【 以下文字转载自 ZJU 讨论区 】
【 原文由 leu 所发表 】
我爱那匹小马...
据说诗人匆匆在一条suicidal 的way上,
然而又时时提醒自己不要轻易放弃...
Here is one of my favorite poems:
Stopping by Woods on a Snowy Evening
--Robert Frost
Whose woods these are I think I know.
His house is in the village, though;
He will not see me stopping here
To watch his woods fill up with snow.
My little horse must think it queer
To stop without a farmhouse near
Between the woods and frozen lake
The darkest evening of the year.
He gives his harness bells a shake
To as... 阅读全帖 |
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n**t
发帖数: 45 | 2 【 以下文字转载自 Biology 讨论区,原文如下 】
发信人: royluo ( 罗马情结), 信区: Biology
标 题: 从纯化到星辰---CSH蛋白质纯化课侧记（十）
发信站: Unknown Space - 未名空间 (Wed May 11 20:43:26 2005) WWW-POST
本文献给YL
（十） 永远的转录因子
第一个模块的实验结束以后，我们进入第二个模块的实验。这个实验的指导教授叫Al Courey。
这个模块的实验主要是要从Hela细胞里纯化AP-1。AP-1是一种很重要的sequence specific转录因
子，在很多生理过程里都有作用。AP-1其实不是一种均一的蛋白质，实际上一种二聚体结构，要么
是Jun-Jun 或者是Jun-Fos dimer。Jun和Fos都是alpha helix的结构。Helix的一边有很多Leu,和
另一个helix形成Leucine Zipper的结构，而helix另一边就是碱性的氨基酸居多，所以可以和DNA
结合。这个转录因子看起来就象一双筷子夹着DNA。
sequence spec |
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wh
发帖数: 141625 | 3 【 以下文字转载自 Connecticut 讨论区 】
发信人: wh (wh), 信区: Connecticut
标 题: 2013耶鲁春晚：70后的知道郭峰和《让世界充满爱》吗？
发信站: BBS 未名空间站 (Sun Mar 3 20:07:24 2013, 美东)
今年学校的春晚明星阵容强大，本地节目见弱。开头炮的是人大附中管乐团的《春节序
曲》——人大附中管乐团很有名吗？年轻稚嫩的脸庞充满朝气，就是有点拘谨规矩。
（注：以下的好照片都是学生会的Andrew Leu拍的，更多照片请见网页：
http://www.andrewleu.com/acssy-2013-event-coverage/
坏照片都是我拍的。）
接着的时装秀+校园爱情故事演绎得别出心裁。青春的装束把人带回校园时光：
实验室的白大褂也走上T型舞台；“我要毕业”更是道出广大留学生的强烈心声：
文艺帅哥终不敌富贵公子和时髦的Gangnam style。美女散尽，蓦然回首，初恋抱着
teddy bear站在灯火阑珊处。
以往几年大放光彩的强哥、欢哥等本地歌手今年受含糊的混响影响，效果不佳。布朗大
学的小品《赤壁》... 阅读全帖 |
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wh
发帖数: 141625 | 4 【 以下文字转载自 Connecticut 讨论区 】
发信人: wh (wh), 信区: Connecticut
标 题: 2013耶鲁春晚：70后的知道郭峰和《让世界充满爱》吗？
发信站: BBS 未名空间站 (Sun Mar 3 20:07:24 2013, 美东)
今年学校的春晚明星阵容强大，本地节目见弱。开头炮的是人大附中管乐团的《春节序
曲》——人大附中管乐团很有名吗？年轻稚嫩的脸庞充满朝气，就是有点拘谨规矩。
（注：以下的好照片都是学生会的Andrew Leu拍的，更多照片请见网页：
http://www.andrewleu.com/acssy-2013-event-coverage/
坏照片都是我拍的。）
接着的时装秀+校园爱情故事演绎得别出心裁。青春的装束把人带回校园时光：
实验室的白大褂也走上T型舞台；“我要毕业”更是道出广大留学生的强烈心声：
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w***7
发帖数: 1637 | 5 bless
你朋友的小孩实在哪儿被确诊的？这个病非常稀有，国内居然有人知道，很奇怪。
这个病是由于lysosome 里面一种叫acid alpha-glucosidase 突变引起的。除了你所说
的ERT外，吃protein-enriched nutrition with supplementation of Ala and leu 也
会有治疗效果。 |
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c*******e
发帖数: 4642 | 6 也就是早上发现新做的放在老板实验台上的一排培养基被污染了。。粉红色的colony，
专业的描述是convex, smooth, large, pink colony。应该不是我们的酵母，因为Leu-
。此时为侦探片。
我跟小黑妞用手机text老板请示，老板说，朕身体不适，疑似stomach flu，卿家自己
搞定。。。于是我们在显微镜下看了,很巨大的size,round-shaped,中间一点红。更加
确定不是我们的酵母，疑似细菌。yeast lab最讨厌细菌污染。。。而小黑妞项目就是
build knock-out collection。伊已经在风中摇曳，想象着要重做多少了。。。此时为
恐怖片，请大家自行想象黑妞尖叫的效果。
后来我们就谷狗到底是啥，pink, round-shaped,bacteria...最后查出来个neisseria.
.......然后2个人想到老板抱病，且污染在他台面上。。。此时为伦理片- -
后来老板text问是啥，我们只好汇报 convex, smooth, large, pink colony, might
be bacteria contaminat |
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wh
发帖数: 141625 | 7 【 以下文字转载自 Connecticut 讨论区 】
发信人: wh (wh), 信区: Connecticut
标 题: 2013耶鲁春晚：70后的知道郭峰和《让世界充满爱》吗？
发信站: BBS 未名空间站 (Sun Mar 3 20:07:24 2013, 美东)
今年学校的春晚明星阵容强大，本地节目见弱。开头炮的是人大附中管乐团的《春节序
曲》——人大附中管乐团很有名吗？年轻稚嫩的脸庞充满朝气，就是有点拘谨规矩。
（注：以下的好照片都是学生会的Andrew Leu拍的，更多照片请见网页：
http://www.andrewleu.com/acssy-2013-event-coverage/
坏照片都是我拍的。）
接着的时装秀+校园爱情故事演绎得别出心裁。青春的装束把人带回校园时光：
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文艺帅哥终不敌富贵公子和时髦的Gangnam style。美女散尽，蓦然回首，初恋抱着
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r****o
发帖数: 105 | 8 本文献给YL
（十） 永远的转录因子
第一个模块的实验结束以后，我们进入第二个模块的实验。这个实验的指导教授叫Al Courey。
这个模块的实验主要是要从Hela细胞里纯化AP-1。AP-1是一种很重要的sequence specific转录因
子，在很多生理过程里都有作用。AP-1其实不是一种均一的蛋白质，实际上一种二聚体结构，要么
是Jun-Jun 或者是Jun-Fos dimer。Jun和Fos都是alpha helix的结构。Helix的一边有很多Leu,和
另一个helix形成Leucine Zipper的结构，而helix另一边就是碱性的氨基酸居多，所以可以和DNA
结合。这个转录因子看起来就象一双筷子夹着DNA。
sequence specific转录因子是极其重要的一类蛋白质，真核生物的基因有5~10%是用来编码
这种蛋白的。这个模块涉及的一些实验是最经典的一些分离转录因子的方法，所以很有用。
怎么才能分离纯化呢？首先要确定要纯化什么因子，换句话说就是要决定纯化跟什么特异DNA
序列相结合的转录因子。决定了这个，才能有一个活性检测系 |
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T**********t
发帖数: 1604 | 9 谢谢，那就是这两个：
Ile: 131.000
Leu: 131.000
也都不在末端啊。 |
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o****u
发帖数: 214 | 10 一般的商业性特异蛋白酶识别序列都是在酶切位点前方的。
比如Factor Xa是: xxxLEGR/xxxx
有没有人知道有什么酶具有酶切位点后方特异性的？
比如xxxx/LEU(某个序列)xxx |
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h**********r
发帖数: 671 | 11 酵母做的少，e. coli做得多点。所以就有问题了。用的基本上是商业化的质粒，pESC-
leu.
问题是看不出来翻译起始位点ATG，而且多种版本的manual上面不提这个问题.不像E.
coli的pET系列,要么在NdeI要么在NcoI.
我是不是把带有ATG的ORF放在多克隆位点就行了？我亚克隆的片段自己有终止密码子，
在此之前也有tag,所以不需要载体的tag。而且载体的tag正好在C端。当然转录方向还
是要看的。
包子伺候！
多谢啊！ |
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T****O
发帖数: 407 | 12 Usually you want to replace an AA because it's critical in your hypothesis.
Therefore, any perturbation would generate significant consequences. And
you want that significance to be as large as it could be theoretically
allowed. Mutating Leu to Ala is of the general practice. "Ala Scan",
remember? You could swap on Ala in replace of anything. The only exception
is Ala itself, which you should replace with Gly.
Now, it's important to notice the word "general". In many cases, simply
replacin... 阅读全帖 |
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m****e
发帖数: 489 | 13 Universal primers for fluorescent labelling of PCR fragments—an efficient
and cost-effective approach to genotyping by fluorescence
Molecular Ecology Resources
Volume 12, Issue 3, pages 456–463, May 2012
Leukemia. 2012 Mar 19. doi: 10.1038/leu.2012.74. [Epub ahead of print]
Newly described activating JAK3 mutations in T-cell acute lymphoblastic
leukemia.
Many Thanks! Please send to a********[email protected] |
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h**********r
发帖数: 671 | 14 直接把你的AA序列发给公司，像genscript.然后就可以拿到quote,保含cia,gc content
， mRNA二级结构，这一步是free的。
再决定要合成不。
avoid after initiating met: vla, lys, leu, tyr, arg, phe ,trp
best codons in e. coli: ala (gcg), gly (ggc, ggu)
也可以看看老paper:
Expression of Mammalian Cytochromes P450 in Yeast
Expression of Eukaryotic Cytochromes P450 in E. coli
虽然讲的是p450,有些策略还是可以借鉴的。
可以看下新的paper:
Design Parameters to Control Synthetic Gene Expression in Escherichia coli
Kudla, G. et al. Coding-sequence determinants of gene expression in
Escheri... 阅读全帖 |
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m****e
发帖数: 489 | 15 Leukemia. 2011 Apr;25(4):671-80. doi: 10.1038/leu.2010.309. Epub 2011 Jan 21.
Targeted next-generation sequencing detects point mutations, insertions,
deletions and balanced chromosomal rearrangements as well as identifies
novel leukemia-specific fusion genes in a single procedure.
Grossmann V1, Kohlmann A, Klein HU, Schindela S, Schnittger S, Dicker F,
Dugas M, Kern W, Haferlach T, Haferlach C.
Author information
pls send to [email protected]
(function(){try{var s,a,i,j,r,c,l,b=document.getElem... 阅读全帖 |
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r**a
发帖数: 121 | 16 好象LeuRS是TORC1的Leu sensor应该是没有什么问题，但是那个cell paper的机理解释
，好象不说公认，但是很多人认为是不对的－－估计为了发cell硬弄了机理。反而是那
个mol cell实在一点，但是那个只说了那个结构域结合，具体怎么sense的，没有说。
当然，这只是一个sensing的途径，还有别的途径，这是肯定的。 |
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h**********r
发帖数: 671 | 17 在pACYC质粒上吧。
Rosetta(DE3) This is a BL21 derivative designed to enhance the expression of
eukaryotic proteins that contain codons rarely used in E. coli. These
strains supply tRNA genes for AGG/AGA (Arg), AUA (Ile), CUA (Leu), CCC (Pro)
and GGA (Gly) on a ColE1 compatible chloramphenicol-resistant plasmid. Thus
the Rosetta strains provide for "universal" translation which is otherwise
limited by the codon usage of E. coli.
Available from Novagen |
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S*********e
发帖数: 127 | 18 Inclusion of Strep-tag II in design of antigen receptors for T-cell
immunotherapy. Nature Biotechnology (2016)
doi:10.1038/nbt.3461
Chimeric antigen receptor-modified T cells derived from defined CD8+ and CD4
+ subsets confer superior antitumor reactivity in vivo. Leukemia (15
September 2015) | doi:10.1038/leu.2015.247
THanks, |
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b******y
发帖数: 627 | 20 借问：
我合成了一个30aa的多肽，其中一个位置是X（＝20aa中的任意一个）。不知能否用MS
定量每一个aa在该位置的丰度。当然，Ile and Leu can't be distinguished.
多谢！ |
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l****y
发帖数: 398 | 21 不好弄，离子化效率不一样，而且有些质量接近，
如果UPLC能分开就好办，不过估计也不好分，
[在 bearbaby (小熊) 的大作中提到：]
:借问：
:我合成了一个30aa的多肽，其中一个位置是X（＝20aa中的任意一个）。不知能否用MS
:定量每一个aa在该位置的丰度。当然，Ile and Leu can't be distinguished.
:多谢！ |
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k********s
发帖数: 320 | 22 1. If you use external lockmass (lockspray)- which gives you better accuracy
than internal lockmass, then you don't need to recalibrate.
2. If you don't use lockmass but rather use Leu or other reference standards
to adjust Veff, and if the change of Veff is very small, then you don't
need to recalibrate - according to Water's engineer. However, based on my
experience, fresh calibration does give you improved accuracy - not dramatic though.
3. What is your RMS from calibration?
4. What's the acc |
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l******1
发帖数: 178 | 23 小弟有一个很简单的反应一直不work，请教一下各位有机大牛们。
反应很简单，就是cystine或者cystine的甲酯与邻苯二甲酸酐反应成邻苯二甲酰亚
胺。因为我们组用tert-leu做过同样的反应用来做配体，效果不错。我现在用cystine
起始做一个小的合成。可是反应一直不太好，请教了组里其他人。使用Dean-Stark条件
甲苯回流分水。做了好几次，时间短到1.5小时，长到18小时都试了。但是分离出来的
产品基本大量都还是邻苯二甲酸酐。用cystine甲酯效果也不好。
请教一下同样做过类似反应的大牛，这个反应需要注意些什么？拜谢了。。 |
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wh
发帖数: 141625 | 24 【 以下文字转载自 Connecticut 讨论区 】
发信人: wh (wh), 信区: Connecticut
标 题: 2013耶鲁春晚：70后的知道郭峰和《让世界充满爱》吗？
发信站: BBS 未名空间站 (Sun Mar 3 20:07:24 2013, 美东)
今年学校的春晚明星阵容强大，本地节目见弱。开头炮的是人大附中管乐团的《春节序
曲》——人大附中管乐团很有名吗？年轻稚嫩的脸庞充满朝气，就是有点拘谨规矩。
（注：以下的好照片都是学生会的Andrew Leu拍的，更多照片请见网页：
http://www.andrewleu.com/acssy-2013-event-coverage/
坏照片都是我拍的。）
接着的时装秀+校园爱情故事演绎得别出心裁。青春的装束把人带回校园时光：
实验室的白大褂也走上T型舞台；“我要毕业”更是道出广大留学生的强烈心声：
文艺帅哥终不敌富贵公子和时髦的Gangnam style。美女散尽，蓦然回首，初恋抱着
teddy bear站在灯火阑珊处。
以往几年大放光彩的强哥、欢哥等本地歌手今年受含糊的混响影响，效果不佳。布朗大
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wh
发帖数: 141625 | 25 【 以下文字转载自 Connecticut 讨论区 】
发信人: wh (wh), 信区: Connecticut
标 题: 2013耶鲁春晚：70后的知道郭峰和《让世界充满爱》吗？
发信站: BBS 未名空间站 (Sun Mar 3 20:07:24 2013, 美东)
今年学校的春晚明星阵容强大，本地节目见弱。开头炮的是人大附中管乐团的《春节序
曲》——人大附中管乐团很有名吗？年轻稚嫩的脸庞充满朝气，就是有点拘谨规矩。
（注：以下的好照片都是学生会的Andrew Leu拍的，更多照片请见网页：
http://www.andrewleu.com/acssy-2013-event-coverage/
坏照片都是我拍的。）
接着的时装秀+校园爱情故事演绎得别出心裁。青春的装束把人带回校园时光：
实验室的白大褂也走上T型舞台；“我要毕业”更是道出广大留学生的强烈心声：
文艺帅哥终不敌富贵公子和时髦的Gangnam style。美女散尽，蓦然回首，初恋抱着
teddy bear站在灯火阑珊处。
以往几年大放光彩的强哥、欢哥等本地歌手今年受含糊的混响影响，效果不佳。布朗大
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y*****l
发帖数: 5997 | 26 上个月文章的中文版，仅供参考。
标题和我说得意思差不多，猫猫有总结。
tanmaomao (坛猫猫) 于 (Sat Dec 4 12:00:08 2010, 美东) 提到:
这个人的意思是铀更 volatile ，原因是
1： supply高度集中于几家大公司，且中亚开采地区本身社会不稳定
2：demand：中国喜欢搞大单采购，短期对市场扰动很强
3：没有像gold oil silver这样完善的期货交易市场缓冲突涨突跌
所以07年暴涨暴跌都很瞬间
投资黄金石油不如投资铀！
作者：Agustino Fontevecchia 发布于：2010-12-08
有一种金属缺乏关注，但能用来产生原子能，它就是铀。
来源于：福布斯中文网
最近市场波动，加上美元前景未卜，这些促使大宗商品成为人们关注的焦点。黄金、原
油甚至白银的价格不断呈现上涨的趋势，丝毫没有停顿的迹象。然而，有一种金属缺乏
关注，但能用来产生原子能，它就是铀。
铀不属于交易所交易的大宗商品，不过有两家公司，UxC咨询公司（UxC Consulting
Company）和特易公司（TradeTech）相继开发了已逐渐被业界接受... 阅读全帖 |
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y*****l
发帖数: 5997 | 27 上个月文章的中文版，仅供参考。
标题和我说得意思差不多，猫猫有总结。
tanmaomao (坛猫猫) 于 (Sat Dec 4 12:00:08 2010, 美东) 提到:
这个人的意思是铀更 volatile ，原因是
1： supply高度集中于几家大公司，且中亚开采地区本身社会不稳定
2：demand：中国喜欢搞大单采购，短期对市场扰动很强
3：没有像gold oil silver这样完善的期货交易市场缓冲突涨突跌
所以07年暴涨暴跌都很瞬间
投资黄金石油不如投资铀！
作者：Agustino Fontevecchia 发布于：2010-12-08
有一种金属缺乏关注，但能用来产生原子能，它就是铀。
来源于：福布斯中文网
最近市场波动，加上美元前景未卜，这些促使大宗商品成为人们关注的焦点。黄金、原
油甚至白银的价格不断呈现上涨的趋势，丝毫没有停顿的迹象。然而，有一种金属缺乏
关注，但能用来产生原子能，它就是铀。
铀不属于交易所交易的大宗商品，不过有两家公司，UxC咨询公司（UxC Consulting
Company）和特易公司（TradeTech）相继开发了已逐渐被业界接受... 阅读全帖 |
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wh
发帖数: 141625 | 28 今年的春晚明星阵容强大，本地节目见弱。开头炮的是人大附中管乐团的《春节序曲》
——人大附中管乐团很有名吗？年轻稚嫩的脸庞充满朝气，就是有点拘谨规矩。
（注：以下的好照片都是学生会的Andrew Leu拍的，更多照片请见网页：
http://www.andrewleu.com/acssy-2013-event-coverage/
坏照片都是我拍的。）
接着的时装秀+校园爱情故事演绎得别出心裁。青春的装束把人带回校园时光：
实验室的白大褂也走上T型舞台；“我要毕业”更是道出广大留学生的强烈心声：
文艺帅哥终不敌富贵公子和时髦的Gangnam style。美女散尽，蓦然回首，初恋抱着
teddy bear站在灯火阑珊处。
以往几年大放光彩的强哥、欢哥等本地歌手今年受含糊的混响影响，效果不佳。布朗大
学的小品《赤壁》和往年各校的小品一样极尽学生之幽默才智，但发声不够清晰，很多
精彩的台词没听明白，光注意孙尚香的胸衣了：
之后连番上场的明星阵容令人一饱眼福。虽未目睹《中国好声音》的电视，却有幸亲见
两位好声音选手莅临本地。庾澄庆组选手、年轻活泼的魏语诺笑说好声音使她的时装店
生意大好，音乐对她只... 阅读全帖 |
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i******e
发帖数: 410 | 29 u had m+ before...it's something like leu or something..can't remember le
frankly...i never know where did the weird name zst come from...
Hmmm...maybe i can postpone the ID removal for another 2 weeks...
however...the rule is rule...i have to do it regarding the reply... |
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