t****p
发帖数: 1504 | 1 topo cloning kit两年前还很好用。我们实验室有半年左右克隆出现问题，后来我买了
promega，qiagen的做对比，invitrogen的topo相比之下一塌糊涂。
坚决与invitrogen交涉，询问有没有人反映类似的问题，invitrogen断然否认，反复几
次之后我也放弃了。两个月前，隔壁实验室也偶热提起说topo克隆很困难，我让她用
promega的，解决。
由于克隆做不出来，我们实验室在那半年反复定kit，短期内invitrogen的销量可能反
而增加。对顾客反映问题如此消极对待，真的很差劲,公司可能反而会为销量增加沾沾
自喜。
版上如果有遇到topo不好用的，也写信反映一下。如果多人反映还不解决，那就在哪里
曝光一下它。
提供试剂的公司产品不稳定是非常严重的问题，浪费一大批人的时间。 |
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T**********t
发帖数: 1604 | 2 Lonza的预制胶可以在invitrogen的box里跑，比invitrogen的便宜30%左右。效果么，
没invitrogen的好，但是也OK了。
自己配胶我们用的都是bio-rad的mini protean的系统，不过它和invitrogen的胶盒不
兼容，得用bio-rad自己的盒子。
对了，lonza的预制胶也能在bio-rad的胶盒里跑。 |
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s****l
发帖数: 10462 | 3 【 以下文字转载自 Working 讨论区,原文如下 】
发信人: stlstl (射天狼), 信区: Working
标 题: Invitrogen
发信站: The unknown SPACE (Mon May 19 20:42:25 2003) WWW-POST
有人在invitrogen工作吗? 我可不可以问你一个问题? 如果是在Frederick, MD site的话
就更好了.
多谢. |
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s****l
发帖数: 10462 | 4 【 以下文字转载自 Working 讨论区,原文如下 】
发信人: stlstl (射天狼), 信区: Working
标 题: Invitrogen
发信站: The unknown SPACE (Mon May 19 20:42:25 2003) WWW-POST
有人在invitrogen工作吗? 我可不可以问你一个问题? 如果是在Frederick, MD site的话
就更好了.
多谢. |
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M****e
发帖数: 70 | 5 http://invitrogen.custhelp.com
i find this one is pretty helpful. maybe you need to sign up
using your email. and that is easy, thus you can ask the tech
service questions. you can find many answers to whatever we
have discussed here, and sth is specific to the Invitrogen
products. |
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t*****z
发帖数: 1598 | 6 喜欢Fermentas的酶。RE都换成FastDigest格式的，全部缓冲液通用，和其他修饰酶也
可以通用，做什么都不用换缓冲液，而且连loading dye也给你加好了，非常适合我这
种懒人。T4连接酶，号称室温五分钟（我没试过这么短的）。
克隆载体方面Fermentas有个pJET，便宜又好用，传统的平端T4连接，但是效率很高，
我每次只连15-30分钟，就长出很多克隆。阳性率100%，假阳性率0%，我有时甚至都可
以省下筛选这一步，直接养菌抽质粒了。美中不足的是载体上的常见的酶切位点少了点
。与之相比的QIAGEN的pDrive，也挺好用，但是阳性率不是那么高，。每次还是不得不
挑那么四五个菌落来做PCR鉴定。Invitrogen的TOPO TA载体们，我们实验室和隔壁实验
室用起来都很不顺利，我现在弃之不用。
Invitrogen的Gateway载体们，虽然贵，没办法，只能买他们的，感觉Gateway这么方便
的东西还是只此一家。效率不高，有时会出问题，但是勉强够用了。我曾自己试图构建
类似于pDONR的载体，失败，原因复杂，一言难尽。不喜欢NTI，宁可用最土的BioEdit |
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r****r
发帖数: 379 | 7 规模大了以后，Invitrogen雇佣了一大批GE的完全不懂生物技术的人管理公司，内部的
技术管理出了许多问题，有些产品的QC也出问题，他们内部用起来抱怨也很多。
其实大家反应的也基本属实，我认识invitrogen market部门的，他们叫卖的东西不是
cloning products，大部分算是二线品牌吧，谈不上最好，RT－PCR system还不错，我
一直用，但现在也不用了，贵，不划算。 |
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t******r
发帖数: 8600 | 8 Invitrogen has some good stuff, like Topo, etc. But, most of its products
have very poor quality, I guess they
are getting too big and there are tons of garbage startups sequeeze their
poor products onto their shelf.
BAD!!!
The bad stuff I have used recently:
Stbl2 & 6
DNA ligase
Cre recombinase
RE enzymes
...
...
For cloning, NEB products are the most reliable. |
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A**E
发帖数: 191 | 9 For enzymes NEB is always the first choice.
However, Invitrogen's TOPO cloning kit is very convenient indeed. And
efficiency is quite high in my hands. |
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s********n
发帖数: 2939 | 10 我只用Invitrogen的pre-casted agarose gels, PAGEs, SDS-PAGEs, clonases，TOPO
和competent cells，除了TOPO都还不错，其他的就不知道了。TOPO（pET & Gateway）
的效率比较低。 |
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H*****e
发帖数: 120 | 11 I have many samples for microarray. Try to save some money. Core charge me
for $600 for Affi-chip but only $400 for invitrogen MEEBO chip. In fact, I
was told that MEEBO is better even less people use it. Any one has any
suggestion?
Thanks! |
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i*********0
发帖数: 915 | 13 used before. no difference between the invitrogen one and the fermentas,
sigma ones. |
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a**v
发帖数: 406 | 14 You can buy cast and spacers from Invitrogen and pour your own gel. |
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m******5
发帖数: 1383 | 15 I am doing southern blot using these system listed combined
invitrogen iblot system + Roche Dig labeling + IRDYE 800 southern blot
Now the problem is , I got unwashable high back ground under either 700 and
800 spectrum
Could anyone en-light me a bit on what is going on in my system? |
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i*****i
发帖数: 154 | 16 Invitrogen的GFP抗体(A11122)识别EGFP不错，不知道是否可以用来检测AcGFP以及
ZsGreen1融合的蛋白？ |
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d****d
发帖数: 214 | 18 I have not used Neon for a while, but I think 50% survival rate would be
reasonable to expect. Of course you'll need to optimize the voltage,
duration time, and number of pulses.
Our neighbor lab and I changed the tips and buffers ten times less
frequently than suggested by Invitrogen and it still works well. I guess the
company is counting on the consumables for hefty profits. Also we requested
a lot more (free) buffers at the time we purchased the machine.
The main advantage for electroporatio... 阅读全帖 |
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l**********1
发帖数: 5204 | 19 Re:
sunnyday
please send mail or Fax to
AP Sumiyama K. the corresponding author for
paper:
//www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/20219670
ask for his help about your above questions.
his lab:
//sayer.lab.nig.ac.jp/~sumiyama/index-e.html
or
//www.nig.ac.jp/section/saitou/saitou-e.html
or
//sayer.lab.nig.ac.jp/index-e.html
You can also ask him for sending this one:
pT2AL200R150G
by Fedex
of course you told him your US side Fedex receive account number and your side pays
all transportation charge.
... 阅读全帖 |
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g******t
发帖数: 230 | 20 抗体最重要，对好的抗体， Dynabeads 也就是锦上添花。对某些抗体，Dynal 的
binding 非常弱，结果还不如agarose beads (in my opinion, invitrogen oversold
it)。
不知道你有没有试过mix agarose A and G. |
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w******d
发帖数: 46 | 21 Anybody used this cloning kit from Invitrogen? I am trying to persuade my
boss to get the 3-fragment one, but it's not cheap (>$2000) and my boss is a
cheap one.
If you used it, what you like it? Doesn it worth the money?
Thanks! |
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j****x
发帖数: 1704 | 22 想构建一个单载体诱导表达系统single-vector Tet-inducible lentivector，类似
clonetech的Tet-One system（据称是目前唯一的商品化载体），但是手头的载体系统
都是基于Invitrogen的pLenti系列的，不太想再换clonetech的kit了。
不知道有没有人基于pLenti载体构建过这种single-vector Tet-on系统，或者知道是否
可以在Addgene上找到类似的质粒。理论上讲，合成Tet-one上个那段包含Tet-on-3G以
及pTRE3GS-MCS的cassette然后置换掉pLenti载体上相应的区域即可。如果有人有经验可
以指点，非常感谢！ |
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a********u
发帖数: 325 | 24 在invitrogen网站上查只有一次性塑料的可以自己灌胶的板，打电话问他们，也是说只
有这种。哪位高手知道有没有哪个公司卖能像biorad的那种可以反复使用的玻璃板来灌
胶的？
多谢了。 |
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d*****r
发帖数: 39446 | 25 【此篇文章是由自动发信系统所张贴】
invitrogen 由于某些原因被本俱乐部的管理员删除, 特此通知. |
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p********e
发帖数: 61 | 26 看了大家的回帖，很受感动。大家确实给了很多宝贵意见（只有一个例外）。总结一下
大家的意见和我的想法。
1. 如何真正实现供货，后勤，销售和市场营销等
这个我确实考虑了很多。我觉得基本上都搞定了。不过我还没有正是开始，不知道到时
会不会有新的问题产生。有一位有经验的大哥告诉我：遇到问题学会去解决就是了，你
们做科研难道不是每天都在解决新问题吗？我觉得这位大哥很在理，也很感激他。
2. 中国进货质量
生物试剂和电子产品一样，其实大多数都是中国生产。只不过贴了Invitrogen, Sigma
之类的标而已。我要做的都不是什么前沿试剂，都是常用的试剂，制造方法十分成熟。
比如单克隆抗体，Marker, Plasmid kit等，能有什么质量问题？大家去查一查AbCam的
单抗，看一看TDS,你会发现很多都与国内的某些小公司一模一样，原因在于它们来自于
国内的公司，只不过贴了AbCam的标而已。
关键还是在于我们对供货商的质控。我其实已经有很多供货商了。我本人以及一些朋友
正在做测试。如果过关我们才会贴到我网站上。（这就是为什么我网站上只有产品类别
而暂时还没有产品的原因）
不过如... 阅读全帖 |
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C*I
发帖数: 4736 | 27 一直在误导，现在还在误导。 说说明corona virus 不可以从蝙蝠直接传染给人，必须
经过一个中间宿体性的其它动物才能传染给人。所以，病毒发生后，就故意误导全国人
民去海鲜市场找证据，找其它野生动物的麻烦。 而且还是病毒所去找的，找完了还装
模做样化验呀，分离呀什么的。最后把责任全部推给了海鲜市场的动物。可是那种动物
，一直不敢说，说了其它相关已经在人就会去早那种动物监测。 所以压根不说，打马
虎眼。
事实上，早在2013 年，就是这个武汉病毒研究所，已经从来自云南的蝙蝠身上所携带
的corona virus中分离出第一株蝙蝠SARS类似样的冠状病毒的活病毒，其中就包含了类
似于S类型的基因。从而证实这株病毒能够使其接受和SARS病毒相同的受体，并能够感
染人的细胞。对此新发现，武汉病毒所还把它以武汉病毒研究所的英文简称命名“WIV1
”，以彰显这一发现的重要价值和属于自己第一个发现的巨大研究成果。这个成果刊载
于2013年11月的《自然》杂志。
就是说，从云南弄回来的这种蝙蝠所携带的类似于sars的 corona virus， 可以不经过
其它受体/宿体，而直接传染给人。 他们... 阅读全帖 |
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C*I
发帖数: 4736 | 28 一直在误导，现在还在误导。 说说明corona virus 不可以从蝙蝠直接传染给人，必须
经过一个中间宿体性的其它动物才能传染给人。所以，病毒发生后，就故意误导全国人
民去海鲜市场找证据，找其它野生动物的麻烦。 而且还是病毒所去找的，找完了还装
模做样化验呀，分离呀什么的。最后把责任全部推给了海鲜市场的动物。可是那种动物
，一直不敢说，说了其它相关已经在人就会去早那种动物监测。 所以压根不说，打马
虎眼。
事实上，早在2013 年，就是这个武汉病毒研究所，已经从来自云南的蝙蝠身上所携带
的corona virus中分离出第一株蝙蝠SARS类似样的冠状病毒的活病毒，其中就包含了类
似于S类型的基因。从而证实这株病毒能够使其接受和SARS病毒相同的受体，并能够感
染人的细胞。对此新发现，武汉病毒所还把它以武汉病毒研究所的英文简称命名“WIV1
”，以彰显这一发现的重要价值和属于自己第一个发现的巨大研究成果。这个成果刊载
于2013年11月的《自然》杂志。
就是说，从云南弄回来的这种蝙蝠所携带的类似于sars的 corona virus， 可以不经过
其它受体/宿体，而直接传染给人。 他们... 阅读全帖 |
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C*I
发帖数: 4736 | 29 Published: 30 October 2013
Isolation and characterization of a bat SARS-like coronavirus that uses the
ACE2 receptor
Xing-Yi Ge, Jia-Lu Li, Xing-Lou Yang, Aleksei A. Chmura, Guangjian Zhu,
Jonathan H. Epstein, Jonna K. Mazet, Ben Hu, Wei Zhang, Cheng Peng, Yu-Ji
Zhang, Chu-Ming Luo, Bing Tan, Ning Wang, Yan Zhu, Gary Crameri, Shu-Yi
Zhang, Lin-Fa Wang, Peter Daszak & Zheng-Li Shi
Nature volume 503, pages535–538(2013)Cite this article
Abstract
The 2002–3 pandemic caused by severe acute respirator... 阅读全帖 |
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P*******D
发帖数: 523 | 30 谢谢你的回复。
这些invitrogen卖的probe，我们都研究过，而且我也和invitrogen R&D联系过，
invitrogen他们承认他们的probe都不能在live cell里面定量，所以对我们的probe很
感兴趣。
我先讲一下为什么commercially available的probe不能很好的在live cell里面定量：
1.现在卖的所有的GSH或者thiol probe都是基于不可逆反应的，例如monochlorobimane
。一般按照invitrogen的protocol，加10-20 uM的probe和GSH反应，反应后，产物发出
荧光signal。这里的主要challenge是GSH的浓度非常高，一般是1-10 mM。如果是uM的
probe和mM的GSH反应，如果给足够的反应时间的话，不论你是1 mM GSH，还是10 mM
GSH，所有的probe都会被consume掉，所以得到同样的荧光output。
2. one can argue，如果GSH和probe反应足够慢的话，低浓度的GSH反应就会更慢，高
浓度GSH反应快，这样就能区分出GSH浓度... 阅读全帖 |
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r****o
发帖数: 105 | 31 IMAGE clones估计是没戏的。IMAGE 是Integrated Molecular
Analysis of Genomes and their Expression 的缩写。网址http://
image.llnl.gov. 实际上是一个EST cDNA clones library. 你可以
在invitrogen订购，http://clones.invitrogen.com/
收得倒挺全，但是序列可能会有问题，在3'端常常有错误，出现stop
codon什么的。你这个基因这么大，很难保证有完全正确的cDNA.
当然你也可以选择一些测过全长，甚至可以直接表达的clone库，
同样是http://clones.invitrogen.com. 但是这种库clone十分有限，
你要的基因不一定在里面。另外日本有个免费的克隆库，
http://www.kazusa.or.jp/huge/ , 你可以去找找。
另外，实际序列与网上序列库序列有微小的不一致，其实一点也不
奇怪。我就遇到过这种情况。建议你先问问给你clone的实验室，看
他们的意见 |
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L***s
发帖数: 133 | 33 因为要做很多形态学的东西，所以必须要染色work。
我用了GFP antibody，见上贴。试过几个，结果是Invitrogen 的rabbit anti-GFP明显
好于Aveslab的chicken GFP，invitrogen的mouse anti－GFP最差，非常弱。您感觉
Roche mouse anti-GFP和Invitrogen 的rabbit anti-GFP相比如何？
Thanks！ |
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s*****3
发帖数: 41 | 34 最近打算用free-style 293F 细胞来表达一些蛋白。 293F cells 是invitrogen公司
从293 细胞adapted的悬浮细胞。 我从invitrogen公司买了这个细胞和其相应的培养基
后， 在普通的incubator （没有shaker）里面培养，第一次复苏完全没有成功。后来
又向 invitrogen要了一管， 复苏时在 293F culture media里面加了2%的 FBS， 复苏
后很好， 但可能是因为加入 FBS的原因，大部分细胞贴壁了。 随后的培养中去掉了
FBS， 活着的细胞还是继续贴壁，游离的细胞都是死细胞 或者 不是很健康。 而且可
能是因为没有 在orbital shaker里面培养的原因， 有很多细胞团。
问一下论坛里面的前辈， 你们培养293F细胞时有什么需要注意的事项么？ 非常感谢你
们的建议：） |
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o*****d
发帖数: 11 | 35 10L左右的话，GE wave system比较方便，主要是整个cellbag是disposible的
也可以用stirred bioreactor
你可以做10x的scale up。比如 1L 到10L
CHO-S（invitrogen）的话比较皮实，1E5/mL都没太大问题
293F (invitrogen)starting conc. 3-5E5/mL
media的话，如果你不要求高密度，DMEM/F12, rpmi都可以
如果加血清的话更好
很多公司都卖serum free medium
拿CHO-S 做例子，有invitrogen, hyclone, irvineSci等等
wave cellbag不用灭菌，传统的glass flask用蒸汽就可以了
inoculation的话 上youtube看看教程吧
你们表达啥蛋白啊？ outsource是最好的选择了吧
又快又省心 |
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s***c
发帖数: 1664 | 36 哪个site？ 三年前invitrogen买了ABI，两公司合并成life tech，ABI一直reorg中，
不是很稳定， invitrogen好些 |
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n****3
发帖数: 543 | 37 最近实验室经费紧张，老板对运费开始计较起来，例如从invitrogen订两条引物10刀，
运费就要25刀。其他的试剂或耗材也类似，订太多不可能，实验室空间有限，订太少了
不划算。老板就规定攒够了再订，而且集中到那么几家，如invitrogen等
板上可能很多人都经历过订货，或自己就可直接订货，我有几个问题如下：
1） 哪些常见的大生物公司的试剂或耗材，不收运费， 或价格其实已经包含了运费；
2）哪些公司的试剂需另外付运费；
3）那些收运费的的公司是否会免运费，如果订购量大到超过一定数额就可免（我知道
订引物是这样）；
我在想是否在研究所附近租个仓库啥的先订购一些存放，等实验室有需求了，就再卖给
他们，价格都一样，但没有或很少运费，不知道是否可行，就当一个代购类似 |
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l****y
发帖数: 398 | 39 http://tools.invitrogen.com/content.cfm?
pageid=10642&fuseaction=appendix.browse&category=Elec_Blotting
not high man myself.
You can get the invitrogen buffer recipes from the above link.
you can also call the company for the recipe. They usually will tell u. |
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b*****e
发帖数: 6 | 40 CULTURE不好是指AB. INVITROGEN还是不错的。PACBIO很多AB过去的，抱团。
了.这个culture不好具体是指什么呢?是Invitrogen还是AB呢? |
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q*****n
发帖数: 331 | 41 同意楼上的意见。如果你只有生物的背景，没有化学合成的背景，最好的办法是找个做
Nano的lab合作。
满足下列条件的：
c. easily modified w/ targeting ligand & drugs,
只有Invitrogen的qdots (commecially available). 但是，他家的qdots
accumulate non-specifically而且不能穿越血管到达肿瘤。
前两年有不少用Invitrogen的qdots做in vivo imaging 的，但是现在再用的话恐怕很
难发文章的。因为他的缺点大家都知道了。
找个做nano的lab, 即使他们的nano particle 也有这些毛病，但是不广为人知的话，
还能发文章的。
个人感觉现在进nano已经不是好时候了。
欢迎有不同意见的一起讨论。 |
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d********n
发帖数: 68 | 44 先谢谢楼上两位。
我比较奇怪的是，像leptin，各种cytokine，IGF什么的，很多网站都卖，但是胰岛素
这个应该更常见的东西，怎么Peprotech，Invitrogen都没有。Invitrogen倒是也有卖
几十kg的，但是我要的就是毫克级而已。
我在Sigma的网站上找到我要的了。 |
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Z******5
发帖数: 435 | 45 前几天刚用invitrogen的5´ RACE System for Rapid Amplification of cDNA
Ends, Version 2.0搞定一个13kb的RACE出来。
RNA质量很重要；要是只做反转录的话，invitrogen的SuperScriptTM Ⅲ First-Strand
Synthesis System可能更好；可以考虑在3'UTR位置多设计几条Gene Specific
Primers，效果比Oligo dT应该要好很多；多设计几条nested PCR引物，进行多轮扩增。 |
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w***e
发帖数: 269 | 46 we use invitrogen system, everything is from invitrogen including buffers.
we re-use the buffers a lot, like using the same buffer for a month or
longer. But the buffer needs to be kept in the fridge or cold room. |
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S*****s
发帖数: 287 | 47 我用过 Invitrogen 的 Annexin V-Alexa488/7-AAD kit，蛮好用。为了回你这个帖我
去 Invitrogen 网站的 Fluorescence SpectraViewer 查了一下，结果贴在后面了。
RFP 的 excitation 和 7-AAD 一样，但是 emission 不一样。RFP 的 emission 是红
色而7-AAD 的 emission 是红外的，flow 机器应该能把两个分开。如果 RFP 的表达量
和细胞凋亡没关系的话更应该如此。真的想省心可以考虑 Annexin V-Alexa488 和
DAPI 一起用，这样三个颜色分得很开肯定不会有问题。 |
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C*******e
发帖数: 4348 | 48 invitrogen blue native gel与自己配的胶跑出来有差别
blue native gel的文献链接在invitrogen那个产品下面的说明里有
你可以自己去看
不过我觉得如果不是有特别需要
就是偶然跑一下的话
还是用Lammli PAGE胶的那个配方就可以了
就是配胶的时候不加SDS，跑胶的buffer里不放SDS，
样品不煮，直接加上DNA loading dye就上样
就可以了
如果你的蛋白不是high pI的话
根本不需要我后面提的那两个系统 |
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