S*********s
发帖数: 304 | 1 既然你做这么specific的实验，想必你在做protein S-glutathiolation的研究
可能的解释就是
GSH+GSH（+H2O2）->GSSG
Actin+GSSG->Actin-SSH
但有两个问题
1）你跑了Western,正常情况应该加了DTT,不应该看到modified actin
加DTT多煮煮，看看是否还在
另外，可以coincubate with IAA or IAM,do IEF，you should get more information
2) 一般来说band should go upshift, 但你看到了downshift,所以不敢肯定
这种情况时有发生
If it is really S-glutathiolation, you should go in vivo.
1)Check whether this modification happens under physiological and
pathological or drug treatment conditions.
2)Whether it is functional
Goo... 阅读全帖 |
|
S*********s
发帖数: 304 | 2 既然你做这么specific的实验，想必你在做protein S-glutathiolation的研究
可能的解释就是
GSH+GSH（+H2O2）->GSSG
Actin+GSSG->Actin-SSH
但有两个问题
1）你跑了Western,正常情况应该加了DTT,不应该看到modified actin
加DTT多煮煮，看看是否还在
另外，可以coincubate with IAA or IAM,do IEF，you should get more information
2) 一般来说band should go upshift, 但你看到了downshift,所以不敢肯定
这种情况时有发生
If it is really S-glutathiolation, you should go in vivo.
1)Check whether this modification happens under physiological and
pathological or drug treatment conditions.
2)Whether it is functional
Goo... 阅读全帖 |
|
|
C*********u
发帖数: 811 | 4 You can try to measure the GSSG/GSH ratio. |
|
S*********s
发帖数: 304 | 5 还有sunnyday说的这种可能性。
可以直接用买GSSG，sigma就有，in vitro incubate,可以exclue or confirm this
possibility.
另外，你的western band强度不一样啊，in vitro做assay,应当非常一致才对。 |
|
P*******D
发帖数: 523 | 6 请教一下大家，我们最近develop了一个能在live cell里面定量glutathione的
fluorescent probe，大家有什么建议，可以回答什么important的biological
questions？
Invitrogen卖一个叫thioltracker violet的probe，但是这个不能定量，只能定性的看
一下GSH的变化。尽管GSH probe的文章都发烂了，也没有一个能在live cell里面定量
的。
我们develop了一个probe （ThiolQuant Green）可以很好的定量细胞里面的GSH (
reduced form only)。我们把这个probe用于confocal microscope和flow cytometry，
能很好的和cell lysate GSH measurement correlate.
相比起来redox GFP or YFP，ThiolQuant Green是直接测量reduced form GSH，而不是
measure GSSG GSH ratio。我们的probe potentially和roGFP c... 阅读全帖 |
|
