b****o
发帖数: 806 | 1 想买 Life Technologies 的 Gibco FBS 16000-044 ， 但是网站价格很高， https://
www.lifetechnologies.com/order/catalog/product/16000044 当地的销售又不给多
少折扣 （牛X哄哄的）。 因为需要的比较多，如果哪位能提供比较好的折扣，我从你
处买，谢谢。 - 我在费城 |
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k***g
发帖数: 4904 | 3 Just copied a few of the many emails I got. This happend all the time and it
's unbelievable that there was a guy who did not even know it.
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c********n
发帖数: 225 | 4 实验流程第二步：
2. Transfection
更新前
2-1 NLS-NgAgo expressing plasmid is extracted with Wizard® Plus SV
Minipreps DNA Purification System (Promega), and is adjusted to 100 ng/μl
in 0.5x TE buffer (5 mM Tris-HCl, 0.5 mM EDTA，pH 8.0).
2-2 5’-phosphorylated ssDNA guides are dissolved to 100 ng/μl in 0.5x TE
buffer (PH 8.0). For each well of a 24-well plate, 200-250 ng NLS-NgAgo
plasmid and 100-300 ng guidesare diluted in 50 μl Opti-MEM (Gibco); 1.25 μ
l lipofectamine 2000 is diluted in 50 μl Opti-MEM.... 阅读全帖 |
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c********n
发帖数: 225 | 5 实验流程第一步：
1. Cell culture
更新前
293T cells are maintained in high-glucose DMEM (HyClone) supplemented with
10% FBS (HyClone) and penicillin/streptomycin at 37°C with 5% CO2
incubation. Cells are seeded to 24-well plate (Costar) with 60% confluence 8
hours before transfection. Thirty minutes before
transfection, cells are washed twice with PBS and medium is changed to high-
glucose DMEM medium containing 2% FBS.
更新后
293T cells are maintained in high-glucose DMEM (Gibco) supplemented with 10%
FBS (Gi... 阅读全帖 |
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i***s
发帖数: 39120 | 6 韩春雨实验室所在的四层老楼新安装上智能门。
韩春雨论文中的关键实验环节。
韩春雨瘦了，一位接近他的人说，最近韩春雨经常做实验到凌晨两三点钟。
他的实验室在河北科技大学一座四层老楼里，红色的外墙伏满了爬墙虎，韩春雨在这一待就是10年。今年5月2日，一篇关于新基因编辑技术NgAgo的论文在国际顶级期刊《自然·生物技术》（Nature Biotechnology）在线发表（后在该刊第34册7月号纸质版发表），作者是河北科技大学副教授韩春雨领衔的课题组。发表后，不仅他个人，连他所在的实验室，都获得了前所未有的关注。为了安全，学校不得不给实验楼安装上刷卡入内的智能门，还布了摄像头。
韩春雨有两间研究室在三楼走廊的尽头。在接待过一波又一波记者，甚至有长江学者来访的房间里，一张白色纸片嵌在插座缝里，上面写着“Arrival of the Argonautes 1.0T and 2.0 Smart! （Ago1.0T和2.0Smart版本的到来！）”，后缀为两个笑脸。实验室在等NgAgo优化版2.0尽快问世。
但NgAgo1.0仍然摇摇欲坠。由于多个实验室无法重复实验，被认为可以超越时兴的CRISPR... 阅读全帖 |
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C**********e
发帖数: 23303 | 7 由此可见华人本性的丑陋
华人想保留一些技术秘密有多末难
生物界简直是一群精神病嘛
令人难以想象
看篇论文就想重复试验
真是脑子烂掉了
谁会把关键技术放在论文里？
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在韩春雨的舆论风波逐渐发酵之时，8月8日，韩春雨向非盈利性质粒共享信息库
Addgene提交新版的详细实验方法，并补充了数项应当注意的问题。
中国青年报·中青在线记者在Addgene网站中看到，新版实验方法分为细胞培养、
质粒/gDNA 共转染、基因组提取三个部分，一些实验细节与其在《自然-生命科学》中
发表的论文有所不同。
据 “科学美国人”中文版《环球科学》的微信公众号“科普圈”介绍，新实验步
骤有几处改变，其中包括“血清品牌由Hyclone 变更为Gibco”，“溶解和稀释质粒及
gDNA 的缓冲液变更为水（pH 8.0）”，“建议在质粒/gDNA共转染的8小时、12小时或
24小时后，补转一次gDNA（旧版方法中只提及了‘24小时’）”等内容。
此外，韩春雨还在新版实验方法中列出了4项注意事项，其中包括“NgAgo/gDNA 系
统对细胞中胞内菌和支原体感染敏感，在实验... 阅读全帖 |
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w*******e
发帖数: 15912 | 8 哥不懂生物，还请各位千老们给哥指点迷津
http://news.ifeng.com/a/20160810/49751762_0.shtml
论文被疑造假 韩春雨公开详细实验方法
2016年08月10日 11:29
来源：中青在线
3434人参与 240评论
原标题：韩春雨公开详细实验方法
中青在线讯（中国青年报·中青在线记者叶雨婷）在韩春雨的舆论风波逐渐发酵之时，
8月8日，韩春雨向非盈利性质粒共享信息库Addgene提交新版的详细实验方法，并补充
了数项应当注意的问题。
中国青年报·中青在线记者在Addgene网站中看到，新版实验方法分为细胞培养、质粒/
gDNA 共转染、基因组提取三个部分，一些实验细节与其在《自然-生命科学》中发表的
论文有所不同。
据“科学美国人”中文版《环球科学》的微信公众号“科普圈”介绍，新实验步骤有几
处改变，其中包括“血清品牌由Hyclone 变更为Gibco”，“溶解和稀释质粒及gDNA 的
缓冲液变更为水（pH 8.0）”，“建议在质粒/gDNA共转染的8小时、12小时或24小时后
，补转一次gDNA（旧版方法中只提及了‘24小时’）”等内容。
此外... 阅读全帖 |
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C**********e
发帖数: 23303 | 9 韩春雨终于被海外千老逼得交待了技术秘密
韩国丹麦摘桃
由此可见华人本性的丑陋
华人想保留一些技术秘密有多末难
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在韩春雨的舆论风波逐渐发酵之时，8月8日，韩春雨向非盈利性质粒共享信息库
Addgene提交新版的详细实验方法，并补充了数项应当注意的问题。
中国青年报·中青在线记者在Addgene网站中看到，新版实验方法分为细胞培养、
质粒/gDNA 共转染、基因组提取三个部分，一些实验细节与其在《自然-生命科学》中
发表的论文有所不同。
据 “科学美国人”中文版《环球科学》的微信公众号“科普圈”介绍，新实验步
骤有几处改变，其中包括“血清品牌由Hyclone 变更为Gibco”，“溶解和稀释质粒及
gDNA 的缓冲液变更为水（pH 8.0）”，“建议在质粒/gDNA共转染的8小时、12小时或
24小时后，补转一次gDNA（旧版方法中只提及了‘24小时’）”等内容。
此外，韩春雨还在新版实验方法中列出了4项注意事项，其中包括“NgAgo/gDNA 系
统对细胞中胞内菌和支原体感染敏感，在实验前要仔细确认所使用的细胞株未被污染或
污染已被彻底清... 阅读全帖 |
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Z**********g
发帖数: 14173 | 10 【 以下文字转载自 Returnee 讨论区 】
发信人: wayofflying (小破熊), 信区: Returnee
标 题: 长江学者舍百万年薪陷30万贪污 海归搞科研酿双输苦果
发信站: BBS 未名空间站 (Fri Jun 2 08:55:37 2017, 美东)
长江学者舍百万年薪陷30万贪污 海归搞科研酿双输苦果
2017年05月06日 09:40
听报道
T中
长江学者陈哲宇因涉嫌套取和私分科研经费问题身陷囹圄。旧办法严管，新办法松绑，
政策能否落地有待观察
news 浙江大学原副校长褚健被羁押三年多后，于2017年1月18日“刑满释放”，该案因
涉及科研经费使用、科研成果产权认定以及科技型企业股权转让等问题而广受科技界关
注。
《财新周刊》 文| 财新实习记者 孙良滋
在被刑事拘留的前几天，山东大学长江学者陈哲宇，刚刚拒绝了另一所著名大学百
万年薪的教授职位邀请。面对多1倍的薪水，陈哲宇丝毫没犹豫，“这不是百八十万的
事情”。
几天后，2015年10月29日下午，陈哲宇家人接到济南市天桥区检察院的电话，被告
知陈哲宇涉嫌共同贪污，金额约二三十万元。直到家人给陈... 阅读全帖 |
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C*I
发帖数: 4736 | 11 一直在误导，现在还在误导。 说说明corona virus 不可以从蝙蝠直接传染给人，必须
经过一个中间宿体性的其它动物才能传染给人。所以，病毒发生后，就故意误导全国人
民去海鲜市场找证据，找其它野生动物的麻烦。 而且还是病毒所去找的，找完了还装
模做样化验呀，分离呀什么的。最后把责任全部推给了海鲜市场的动物。可是那种动物
，一直不敢说，说了其它相关已经在人就会去早那种动物监测。 所以压根不说，打马
虎眼。
事实上，早在2013 年，就是这个武汉病毒研究所，已经从来自云南的蝙蝠身上所携带
的corona virus中分离出第一株蝙蝠SARS类似样的冠状病毒的活病毒，其中就包含了类
似于S类型的基因。从而证实这株病毒能够使其接受和SARS病毒相同的受体，并能够感
染人的细胞。对此新发现，武汉病毒所还把它以武汉病毒研究所的英文简称命名“WIV1
”，以彰显这一发现的重要价值和属于自己第一个发现的巨大研究成果。这个成果刊载
于2013年11月的《自然》杂志。
就是说，从云南弄回来的这种蝙蝠所携带的类似于sars的 corona virus， 可以不经过
其它受体/宿体，而直接传染给人。 他们... 阅读全帖 |
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C*I
发帖数: 4736 | 12 一直在误导，现在还在误导。 说说明corona virus 不可以从蝙蝠直接传染给人，必须
经过一个中间宿体性的其它动物才能传染给人。所以，病毒发生后，就故意误导全国人
民去海鲜市场找证据，找其它野生动物的麻烦。 而且还是病毒所去找的，找完了还装
模做样化验呀，分离呀什么的。最后把责任全部推给了海鲜市场的动物。可是那种动物
，一直不敢说，说了其它相关已经在人就会去早那种动物监测。 所以压根不说，打马
虎眼。
事实上，早在2013 年，就是这个武汉病毒研究所，已经从来自云南的蝙蝠身上所携带
的corona virus中分离出第一株蝙蝠SARS类似样的冠状病毒的活病毒，其中就包含了类
似于S类型的基因。从而证实这株病毒能够使其接受和SARS病毒相同的受体，并能够感
染人的细胞。对此新发现，武汉病毒所还把它以武汉病毒研究所的英文简称命名“WIV1
”，以彰显这一发现的重要价值和属于自己第一个发现的巨大研究成果。这个成果刊载
于2013年11月的《自然》杂志。
就是说，从云南弄回来的这种蝙蝠所携带的类似于sars的 corona virus， 可以不经过
其它受体/宿体，而直接传染给人。 他们... 阅读全帖 |
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C*I
发帖数: 4736 | 13 Published: 30 October 2013
Isolation and characterization of a bat SARS-like coronavirus that uses the
ACE2 receptor
Xing-Yi Ge, Jia-Lu Li, Xing-Lou Yang, Aleksei A. Chmura, Guangjian Zhu,
Jonathan H. Epstein, Jonna K. Mazet, Ben Hu, Wei Zhang, Cheng Peng, Yu-Ji
Zhang, Chu-Ming Luo, Bing Tan, Ning Wang, Yan Zhu, Gary Crameri, Shu-Yi
Zhang, Lin-Fa Wang, Peter Daszak & Zheng-Li Shi
Nature volume 503, pages535–538(2013)Cite this article
Abstract
The 2002–3 pandemic caused by severe acute respirator... 阅读全帖 |
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w*********g
发帖数: 30882 | 14 长江学者舍百万年薪陷30万贪污 海归搞科研酿双输苦果
2017年05月06日 09:40
听报道
T中
长江学者陈哲宇因涉嫌套取和私分科研经费问题身陷囹圄。旧办法严管，新办法松绑，
政策能否落地有待观察
news 浙江大学原副校长褚健被羁押三年多后，于2017年1月18日“刑满释放”，该案因
涉及科研经费使用、科研成果产权认定以及科技型企业股权转让等问题而广受科技界关
注。
《财新周刊》 文| 财新实习记者 孙良滋
在被刑事拘留的前几天，山东大学长江学者陈哲宇，刚刚拒绝了另一所著名大学百
万年薪的教授职位邀请。面对多1倍的薪水，陈哲宇丝毫没犹豫，“这不是百八十万的
事情”。
几天后，2015年10月29日下午，陈哲宇家人接到济南市天桥区检察院的电话，被告
知陈哲宇涉嫌共同贪污，金额约二三十万元。直到家人给陈哲宇实验室的同事打电话，
发现不是无人接听就是关机时，他们才开始相信，事情可能是真的。
比孩子还宝贝的实验室
让陈哲宇毫不犹豫拒绝百万年薪的，是他割舍不下自己亲手创建十年的神经生物实
验室，以及在这个实验室基础上成立的山东大学神经生物学系。2005年10月，山东省政
府向陈哲宇颁发... 阅读全帖 |
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H********g
发帖数: 43926 | 15 【 以下文字转载自 Military 讨论区 】
发信人: CatchGodLine (捆仙绳), 信区: Military
标 题: 韩国丹麦摘桃 韩春雨终于被海外千老逼得交待技术秘密
发信站: BBS 未名空间站 (Mon Jan 23 13:57:51 2017, 美东)
韩春雨终于被海外千老逼得交待了技术秘密
韩国丹麦摘桃
由此可见华人本性的丑陋
华人想保留一些技术秘密有多末难
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在韩春雨的舆论风波逐渐发酵之时，8月8日，韩春雨向非盈利性质粒共享信息库
Addgene提交新版的详细实验方法，并补充了数项应当注意的问题。
中国青年报·中青在线记者在Addgene网站中看到，新版实验方法分为细胞培养、
质粒/gDNA 共转染、基因组提取三个部分，一些实验细节与其在《自然-生命科学》中
发表的论文有所不同。
据 “科学美国人”中文版《环球科学》的微信公众号“科普圈”介绍，新实验步
骤有几处改变，其中包括“血清品牌由Hyclone 变更为Gibco”，“溶解和稀释质粒及
gDNA 的缓冲液变更为水（pH 8.0）”，“建议在质粒/gDN... 阅读全帖 |
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w*******s
发帖数: 1 | 16 要把fibronectin (invitrogen/gibco) 溶解在水中，最后浓度是1mg/ml，
似乎有难度，经常可以看到有一大块fibronectin无法溶解，
请问各位如何解决这个问题的？
谢谢！ |
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r****r
发帖数: 379 | 17 lipo, trizol, RT-pcr systems, stuff from Gibco and Molecular Probes
currently, gateway is also very popular but I think people can find better
stuff than gateway system. |
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K**********e
发帖数: 188 | 19 生物基础研究到底多烧钱？
最近让lab manager做了一年的财务报告，结果还是让我很吃惊。尽管我知道自己属于
学院里给学生发补贴最高的实验
室之一，但人工费只是占据了开销的20%左右（当然，如果按照973、自然科学基金的人
工费支出比例，这还是远远超
额的了），而最大的费用花在了试剂耗材上，占到了50%以上。当然，最初建实验室买
了一批仪器，所以这一年的仪器
费用比例就比较少。
我最近在思考一个问题，就是生物基础研究到底多烧钱？在美国，对生物学科的投入非
常之巨大，他们傻吗？
目前生物基础研究作为重要的学科之一，与社会经济生活也密不可分。我们的经费主要
投入在以下几个方面：仪器、耗
材、测试、房租物业水电、人工费用（因为固定人员的工资是由学校负责，所以这个人
工主要是对学生和技术员而
言）。
这其中，人工费用等于是返还到了纳税人手中。我不知道某些经费资助部门怎么这么想
不明白，非要给人工费设定一个
这么低的阈值（不超过10%）。也许由于我自己经历的原因，我赞同给博士生博士后高
工资。大家都不是不食人间烟
火，博士生待遇在国内外的巨大差别也是我们对于缺乏吸引优秀学生竞争力的原因之一
... 阅读全帖 |
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s******r
发帖数: 2876 | 20 生物不算烧钱，不过烧掉了很多人才，
这些孩子一样聪明，本来能给国家民族做点贡献的。
生物基础研究到底多烧钱？
最近让lab manager做了一年的财务报告，结果还是让我很吃惊。尽管我知道自己属于
学院里给学生发补贴最高的实验
室之一，但人工费只是占据了开销的20%左右（当然，如果按照973、自然科学基金的人
工费支出比例，这还是远远超
额的了），而最大的费用花在了试剂耗材上，占到了50%以上。当然，最初建实验室买
了一批仪器，所以这一年的仪器
费用比例就比较少。
我最近在思考一个问题，就是生物基础研究到底多烧钱？在美国，对生物学科的投入非
常之巨大，他们傻吗？
目前生物基础研究作为重要的学科之一，与社会经济生活也密不可分。我们的经费主要
投入在以下几个方面：仪器、耗
材、测试、房租物业水电、人工费用（因为固定人员的工资是由学校负责，所以这个人
工主要是对学生和技术员而
言）。
这其中，人工费用等于是返还到了纳税人手中。我不知道某些经费资助部门怎么这么想
不明白，非要给人工费设定一个
这么低的阈值（不超过10%）。也许由于我自己经历的原因，我赞同给博士生博士后高
工资。大家都不是不食... 阅读全帖 |
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c*****i
发帖数: 1392 | 22 你是说Gibco的hybridoma SFM吧，比FBS medium还容易，Protein A or G即可 |
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l**********1
发帖数: 5204 | 26 Re LZ:
try Stem Cell line: H9 hESCs
cited from
Das B. et al. (2012)
HIF-2a Suppresses p53 to Enhance the Stemness and Regenerative
Potential of Human Embryonic Stem Cells.
Stem Cells. 30: 1685-95.
>
hESC Culture and Induction of Hypoxia
Due permissions were obtained to culture hESCs both at Department
of Medicine, Stanford University (Stem Cell Research
Oversight protocol #285, director: BD) and at Department of
Laboratory Medicine and Pathobiology, Hospital for Sick Children.
BGO1 and H9 hESCs... 阅读全帖 |
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c*****i
发帖数: 1392 | 27 一般而言10％FBS上清可以直接用于western.其实Hybridoma培养可以用serum free
medium.比如Gibco的Hybridoma SFM. |
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b**********8
发帖数: 349 | 28 GIbco的FBS据说都涨到10000块一瓶了，是吗？ |
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d**********t
发帖数: 20415 | 29 gibco的FBS很扯淡，我们用的那个从140多涨到310+了。。。不知道是不是货源出了问题 |
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j*****y
发帖数: 121 | 31 你用的哪个培养基？
SAFC，hyclone或者Gibco的？ |
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s******s
发帖数: 13035 | 33 按理说FBS量大的话砍掉一半应该没问题。
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J********3
发帖数: 3151 | 36 杩欎釜浠ｈ喘椋庨櫓寰堝ぇ鐨勶紝鍗充娇1鐡剁粰100鍒殑浠ｈ喘璐逛篃涓嶈兘骞层
鐪熻杩欎釜044琛竻锛屽彲涔板埌璧扮鐨勶紝姣斾唬璐畨蹇冿紝浠锋牸涔熻吹
涓嶄簡澶銆br /> |
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m****a
发帖数: 270 | 37 重新看了一下paper的supplemental method， 文章里明确得说明了
5’-phosphorylated ssDNA guides are dissolved to 100 ng/μl in 0.5x TE
buffer (PH 8.0)....and are diluted in 50 μl Opti-MEM (Gibco).
这与gluestic所说的pH 6，无EDTA 完全矛盾，
事实上不加EDTA，加Mg2+ 会增加Dnase活性，让DNA更容易降解？
如果是真的，那么韩春雨就是在误导大家。如果是假的，那么gluestic就是来这里捣浑
水的。
假的可能性更大。 |
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发帖数: 1 | 38 新的实验步骤有几处更改，其中包括“血清品牌由 Hyclone 变更
为 Gibco”，“293T细胞贴壁不牢，换液时要小心操作”，“溶解和稀释质粒及
gDNA 的缓冲液变更为水（pH 8.0）
实在忍不住爆下粗口，我操，耍人也要有点诚意行吗？joshhaha，替我问候下你老婆，
等你身败名裂了，也许出于人道主义我可以出钱让你家隔壁老王照顾她一下。 |
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c********n
发帖数: 225 | 39 更新后的Note部分：
（NBT 原文里没有）
Note:
1.NgAgo/gDNA system is extremely sensitive to contamination of intracellular
bacteria (including mycoplasma) which are widespread and leave no visible
signs of presence. Carefully excluding the presence of intracellular
bacteria before performing experiments.
编者注：不能有细菌污染
2.Because Agos need magnesium, avoid EDTA when detaching and seeding cells
into the plates for transfection. Alternatively, supplementing Mg2+ to 5 mM
(may need optimization to your cell type).
编者注... 阅读全帖 |
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c********n
发帖数: 225 | 40 问题总结
1.实验材料来源（Hyclone vs Gibco的培养基，以及原文没有特别提到的“Biolab”T4
PNK）会影响可重复性吗？
HyClone以及其他 T4 PNK 供应商，你们是不是要想一想自己的问题在哪里了？
还有，ThermoFisher可要注意了，你们的Lipofectamine® 3000可能有问题！
2.原文用于plasmid和guides （DNA）的0.5xTE，更新后 改成NaOH调出来的pH8.0的水。
先不谈怎么来用NaOH调出这个稳定的没有缓冲液的pH8.0的水，如果原因是由于NgAgo对
于EDTA这么的敏感，那么原文中用到的大约0.015-0.025mM的EDTA，是怎么做出的NBT文
章中的结果的？
3.关于细菌污染问题。从新闻报道和照片上看，韩春雨老师他们做实验是经常不戴手套
的，看来他们这样做细菌污染机率会减少。所以这些重复NgAgo实验的人们，你们重复
NgAgo实验的时候，带手套了吗？你们的实验材料有没有被细菌污染呢？
4.看来Mg2+的浓度，在不同的cell type也需要optimize
5.看来ss gDNA 二次转染... 阅读全帖 |
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