W****r
发帖数: 835 | 1 http://en.wikipedia.org/wiki/Ethidium_bromide#Health_risks
The National Toxicology Program states it is nonmutagenic in rats and mice.[
10] These results are supported by a subchronic carcinogenicity study in
mice conducted at the university of Düsseldorf where also no mutagenic
effects could be detected.[11] Ethidium bromide (Homidium brand) use in
animals to treat trypanosome infection suggests that toxicity and
mutagenicity are not high. Studies have been conducted in animals to
evaluate EtBr... 阅读全帖 |
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a******a
发帖数: 93 | 2 在做生物分子实验的过程中怎样才能100%保证胎儿的健康呢？
先声明下，我可能过于忧虑，想得太多，因为我是新手，刚开始做分子实验2年，所以
对很多东西还是了解不够深入。
情况是这样的，毕业后年纪就太大了，想在毕业前怀孕，但是目前一直在做分子实验，
多数是gene cloning, PCR, DNA & RNA extraction, 很担心吸入过有害化学物质，比
如提DNA，RNA， plasmid的时候，虽然都在fume hood里面做，但是离心什么的还是要
拿出来，过程中就会闻到chemical的味道。制胶的时候，之前一直用一个瓶子加热溶胶
和加EtBr, 可能在微波炉加热的时候上次残留的EtBr挥发了~~~
怀孕后反而不是很担心，到时候会有理由和导师说少来实验室。而且我的奖学金也不是
导师给的，估计不会特别push我。现在特别担心的是之前做的这些实验会不会已经影响
到卵细胞健康啥的，所以连备孕都不敢了。这两天也搜了很多相关帖子，多数都说防护
的好，那些有害物质吸入量少，就不会影响怀孕啥的。
但是这个量少很难定义。所以还是想上来问问比较懂这些的人。我以上说的那些实验，
如果小心操作会... 阅读全帖 |
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p*********g
发帖数: 9527 | 3 EtBr
Capable of binding to DNA, fluorescent dye, strong mutagen, but not THAT
strong. |
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J******m
发帖数: 97 | 4 不想做千年博后, 也做不了发考题. 有没有人考虑做这个patent agent? 我查了, 起薪
8万呢? 好受鼓舞. 但是那个patent bar考试要复习3个月, 估计根GRE差不多难度?
有没有人知道, 生物PhD背景加patent bar pass , 就业市场怎么样? 而且要有绿卡才
可以报名考试. 天天接触EtBr, 回家洗澡之前都不敢碰宝宝, 哪怕他饿得直叫. 觉得
好无望, 想改行了, 不知道做啥好, 原打算去读护士, 被朋友打击. 青春饭, 夜班啦,
觉得自己不合适. |
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M****e
发帖数: 70 | 7 for genomice southern, you should have very good quality DNA
and digest it completely. it is better to purify the gDNA
and remove anything that may inhibit digestion. typically,
i would digest about 10-20ug of gDNA O/N with enough enzyme
and add another shot next day. it is not suggested to add
EtBr into the gel, though i found it was fine with mine.
you should follow a good protocol that is known to work for
genomic southern. my opinion is that transfer should be very
good. after depurination a |
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g****s
发帖数: 62 | 8 记得以前讨论过。但不太会搜索旧帖子。请大家重新推荐一下。多谢。 |
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w******e
发帖数: 1187 | 9 gel star for DNA; SYBR gold for RNA |
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D*a
发帖数: 6830 | 11 看隔壁试过GelRed，不能加在胶里跑，否则根据上样量不同migration速度不同
你们是后来染色的？
我们隔壁实验室老板要求他们换掉EB，搞的他们天天跑到我们实验室来跑胶 -_-!!! |
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t**********n
发帖数: 283 | 13 A joke? I use it everyday; so far no problem at all. |
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p*******n
发帖数: 12 | 14 Syber red, then use green filter at 523nm wavelength to check the result.
You can buy this dye in invitrogen, about $70 for 50 loadings. |
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D*a
发帖数: 6830 | 16 不是joke...一般pcr最后量都差不多，所以没什么大问题
可是如果是定量加样，隔壁实验室试过，就看出来同样的带跑不齐了。。。
另外我记得是gelred，但是你这么一说我不确定了。。。总之是什么red，我下周问问
吧。。。 |
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a****d
发帖数: 1919 | 17 the DNA loading buffer from Bioline can stain the DNA sample (good for large
sample, like PCR), in this way you don't need EB. But for small amount, I
still have to rely on EB:( |
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D*a
发帖数: 6830 | 19 请问多少钱？
看他的意思是往pcr product里面加loading buffer的时候，也就顺便染了dna？这倒是
挺省事儿的。 |
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h**e
发帖数: 29 | 20 是啊，用起来很方便的
好像是100多刀可以买6ml，很便宜 |
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c******r
发帖数: 3778 | 21 哈哈，ld是老伴的简称啊，呵呵
哦，酱紫，那真的只有一个copy啊。。。试试楼上说的，nest三轮吧。别的真的没啥好
办法了。
另外，可以中间加个probe，用qPCR做个test，看看amplification efficiency。
你看，DNA的平均分子量是330g/mol，如果100bp的product，那么平均分子量是660g/
mol。agarose gel加EtBr，100ng的DNA应该可以detect了吧？那么100ng大概合10e11个
copy的DNA double strand分子。
咱们如果assume PCR的效率是100%，那么就是那么一个copy要amplify到10e11大概需要
37个cycles。。。
如果PCR效率比较差，比如只有50%，那么需要62个cycles，所以啊，你看，最好先测一
下你的amplification efficiency。 |
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m******5
发帖数: 1383 | 22 用 preload了 EtBr的Agar胶转的，转膜用iblot系统
请问转完膜后膜在紫外下能看见条带么？
理论上似乎看不见，但也有人说能看见…… |
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a****o
发帖数: 1786 | 23 to check RNA, you should run a denature gel, either agarose+MOPS or
polyacralimide+urea. If your RNA intends to form no 2nd structure, it may
run at similar position as its DNA template. otherwise something is wrong.
Single strand DNA or RNA gives very low signal compared to the same size ds
DNA if you stain with EtBr. |
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G*******e
发帖数: 76 | 24 有人用过Blue Light Transilluminator 吗？ 看起来挺好的，不用ETBR，也不用担心
紫外线，考虑买一个。用过的同学请分享下这个好用吗，跟传统的UV
Transilluminator比？谢谢！ |
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s****s
发帖数: 16 | 25 实验碰到难题了。最近从原代细胞里提取了genomic DNA，在agarose（ETBR）胶上可以
看到很清楚的band。然后用新购买的Qiagen的Epitech Bilsulte kit作bisulite
treatment。gDNA的input量是2 ug。 一切按照protocol做和DNA clean和column收集。
260／280 ratio 是2左右。但是到最后跑胶（200ng），什么都没有见到。做了几次，
都是这样。犹豫是否继续下一步的PCR。请有经验的大侠帮trouble shooting一下。不
胜感激。 |
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D*a
发帖数: 6830 | 26 EtBr换成sybrsafe吧，味大的换成kit |
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x********e
发帖数: 35261 | 27 你想想做突变的实验要给果蝇喂多大剂量的诱变剂
而且卵巢比精子更不容易诱变
从来没听说过谁用EtBr得癌症过
提质粒时吸的那两口有机溶剂，还不如装修后的房子味道大 |
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b*******l
发帖数: 80 | 28 这些工作我都在怀孕期间做过，没有问题。其实你可以跟老板谈，把EtBr换掉，也没多
少钱，比起人工费来。图个心安。怀孕期间就是想三想四，我那时候每天把手洗的开裂
，在4度屋
里呆久了就担心。到了后期，娃胎动少了也担心，多了也担心。大家都这样。没有关系
，放宽心，多休息，你会是一个很负责任的妈妈。 |
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b*******a
发帖数: 62 | 29 想太多了。就这些分子实验你都紧张成这样，那让那么多做病毒做放射性的生物工作者
还咋活？
做一般分子实验的危害性几乎为0。所谓的有害比如etbr得看剂量有多大，配胶那么一
点点儿根本不足为虑。 |
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s****s
发帖数: 16 | 30 我们在一个基因启动子发现一个CpG island，Bisulfide sequencing证实高度甲基化。
用gel shift 检测DNMT是否和这个启动子binding：具体就是用PCR放大的启动子片断和
细胞核提取物室温下培养30 分钟，然后作native gel shift 电泳。在胶经Etbr染色后
，把shift DNA带切下来送mass spec。结果显示没有检测到任何DNMT，当然有一些其它
的核蛋白。我们的解释是：DNMT的pI ＝ 9.4，running buffer 的pH是7.4, 因此在这
种条件下DNMT是positive charge， 在胶上是往反方向跑。不知道这种介绍对不对？还
有其它的解释吗？谢谢。 |
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