C*******e
发帖数: 4348 | 1 纯化的蛋白看起来好像跟DnaJ结合成了complex
Gel Filtration上单峰洗脱
下来是目标蛋白还有DnaJ (~37 kDa)
有没有什么trick可以去除DnaJ?
先谢过 |
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C*******e
发帖数: 4348 | 2 先谢过
不过这个是去除DnaK的
我很久以前就拜读过这篇文章并且用过5 mM ATP的trick
这次也有用5 mM ATP外加Mg++的trick，
GroEL/ES的问题是解决了
但还有37 kDa左右可能是DnaJ也可能是GrpE的杂带 |
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b******n
发帖数: 4225 | 3 嗯，一般DnaK和DnaJ是一起的，用ATP/Mg++也许见效
实在不行试试denatured soluble protein或者glycerol等偏方
而GroEL用ATP/Mg++比较好解决 |
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b******s
发帖数: 1089 | 4 既然这几天谈到了Zhu Jian-kang，Deng XW和Dong XN。我们可以从他们开始谈起。
如前所述，我没有大家喜闻乐见的8卦素材，所以基本上我这里只是列出他们从学生
时代起的publication等，大家可以看到他们如何在career上有个大的跳跃。
Zhu Jian-Kang
教育背景
Beijing Agricultural University B.S. 1987 Soils & Ag. Chem
University of California, Riverside M.S. 1990 Botany
Purdue University PhD. 1993 Plant Physiology
Rockefeller University Post-Doc 1994 Molecular Biology
博士老板属于中牛，但是看Zhu的访谈，应该对他很欣赏，对他的事业应该很有帮助。
Zhu薄厚只做了一年，而且没有文章。应该是在开山老怪Nam-Hai Chua那里做的。
职位：
2010-Present Professor of Horticulture and Bioche... 阅读全帖 |
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b******s
发帖数: 1089 | 5 (1)
既然这几天谈到了Zhu Jian-kang，Deng XW和Dong XN。我们可以从他们开始谈起。
如前所述，我没有大家喜闻乐见的8卦素材，所以基本上我这里只是列出他们从学生
时代起的publication等，大家可以看到他们如何在career上有个大的跳跃。
Zhu Jian-Kang
教育背景
Beijing Agricultural University B.S. 1987 Soils & Ag. Chem
University of California, Riverside M.S. 1990 Botany
Purdue University PhD. 1993 Plant Physiology
Rockefeller University Post-Doc 1994 Molecular Biology
博士老板属于中牛，但是看Zhu的访谈，应该对他很欣赏，对他的事业应该很有帮助。
Zhu薄厚只做了一年，而且没有文章。应该是在开山老怪Nam-Hai Chua那里做的。
职位：
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b******n
发帖数: 4225 | 6 有没有取一些柱介质跟2X loading buffer混合之后跑电泳
如果在柱介质中看到大量目的蛋白，说明你的蛋白可能堵在柱子里面了
elution buffer需要添加高浓度蛋白变性剂才能elute下来
40kd的小带可能是molecular chaperone DnaJ |
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