a*q
发帖数: 2109 | 1 Dichroic Mirror和bandpass filter是干不同的事情的。Dichroic Mirror是用来把激
发光和荧光分开的，但是Dichroic Mirror不能完全挡住从样品反射和散射回来的激发
光（大概能挡住99％，剩下的1％足以完全超出荧光信号了），所以必需再加Bandpass
Filter（好的只能透过10^-7的激发光）。
基本上绝大多数商用机器都可以做这四种颜色，要看买的时候装了哪些激发激光（或者
用汞灯），买了哪些滤色片了。具体实现的方法有很多，一个经典的方案叫做Sedat
Filter Set（根据UCSF John Sedat的要求设计的）。这个方案用了一个四通道
Dichroic Mirror（反射上面说的每四个激发波长而且透射所有四个荧光波长），然后
有四组激发滤色片和荧光带通滤色片，可以依次对四个波长顺序成像。
http://www.chroma.com/product/complete-filter-sets/widefield-mi
在Confocal上，四个PMT同时检测是没有什么问题的，这样要是用上面的四通道
Dichroic Mirro... 阅读全帖 |
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q*z
发帖数: 13362 | 2 我google了一下滤色片有两种,
让特定波长通过的滤色片,其余反射,dichroic filter
或者反射特定波长的,其他波长通过的,dichroic mirrors
那个图,f1应该是蓝光反射滤色,f2应该是绿光通过滤色
最后红光经过f1向上走,应该是全反射. |
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s*n
发帖数: 2603 | 3 就是省了个HBO，用LED替换了，挺合理的
Dichroic啥的也是山寨不了的 |
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g***s
发帖数: 733 | 4 谢谢，你说不可以是指前面的filter会把后面的信号滤掉？我不用dichroic用bandpass
级联行么？
不过不管什么方法，包括你说得专门仪器，是不是都会有一个荧光光谱overlap的问题
？overlap部分的信号就没办法分开吧，会有crosstalk，我查了一下常用label的光谱
，好像如果同时三个或更多，大多会有很强的重叠，如果滤掉重叠部分，光强就太弱了。 |
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g***s
发帖数: 733 | 5 谢谢。对于excitation的选择，是不是要求波长长的laser也要在波长短的emission下
面，这样一个dichroic可以把信号和所有激发光完全分开？
如果是，则很难同时搞三或四个颜色，难免会有激发光在别的emission band里面。 |
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g***s
发帖数: 733 | 6 多谢，那每个荧光是不是要用bandpass filter而非dichroic mirror来分离，因为要同
时滤掉长波长和短波长的激发光背景？
有哪个商用机器可以做这个么？想了解一下内部构造。谢谢。 |
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