x*****o
发帖数: 441 | 1 是不是不发光就不行了? 或者光强不高就是不太好了? |
|
a*q
发帖数: 2109 | 2 405 nm 激发 450 nm 荧光 （例如DAPI）
488 nm 激发 510 nm 荧光 （例如GFP，Alexa 488）
561 nm 激发 570 nm 荧光 （例如mCherry，Alexa 555）
647 nm 激发 670 nm 荧光 （例如Cy5，Alexa 647）
以上为四色同时成像的常见选择，基本没有太多Crosstalk。 |
|
b*******0
发帖数: 48 | 3 最近在做小鼠大脑切片的immunohistochemistry, 大脑是先心脏灌注PFA, 1:1 PFA :
sucrose 过夜，30% sucrose 3h.
OCT embedding. 然后cryostat 切片10um. 想染的蛋白主要是在cytoplasm。 先室温干
燥，然后extraction buffer 10 min, block 30min, Primary Ab 4oC ON. wash.
Secondary Ab . 试过Cy5 anti-rabbit, Alexa fluor 350 anti-rabbit. 好像都没有
荧光。
请问是Primary ab 浓度太低了，还是extraction buffer 不够啊。
谢谢。 |
|
s*****i
发帖数: 315 | 4 CD4的抗体很成熟，做T Cell常用到的抗体应该就行，但是注意颜色 biolegend公司的
就行
因为你做 IF，不是Flow，建议你买 biotin-conjugated primary，用srepavidin-FITC
，Cy3，Cy5， 或alexa系列的荧光染料显色 |
|
|
|
|
|
r***l
发帖数: 593 | 9 看到有不少文献说如果做multiple color的时候，可以把这两个用在一个tube里面。可
是他们的Em基本重合啊？即使Ex是不同的laser。
哪位大侠给讲讲，谢谢了！ |
|
|
f**********s
发帖数: 1415 | 11 可以, detector 是独立的
：看到有不少文献说如果做multiple color的时候，可以把这两个用在一个tube里面。
可是他们的Em基本重合啊？即使Ex是不同的laser。
： |
|
g*********s
发帖数: 350 | 12 不同Laser激发的，好像在不同的时间Detect。我也有些迷糊大概啥组合需要
Compensation。又听说需要Compensation大多情况是来自于Excitation而不是EMission
。 希望内行的科普。谢谢 |
|
l*******r
发帖数: 63 | 13 是这样的：几个不同的ex laser会有time delay, 这在set up machine 的时候是很重
要的一步。然后machine采集data的时候，不仅知道em，也知道ex, 这样就知道是哪个
channel了。因为假如ex不一样，即使是一个em, machine也是在不同时间内取样。
不知道解释清楚没，汗一个.... |
|
l*******r
发帖数: 63 | 14 假如你的machine可以看这两个channel的话应该没问题。不过不是所有的machine都可
以看所有的channel。要看你自己machine的ex laser and detection filter 设置。看
你两个是最普通的，应该没问题。不过要我是你得的话，会搞搞清楚machine设置的。
假如是FACS core的话，跟他们确认一下。 |
|
r***l
发帖数: 593 | 15 这两个laser肯定有的，red，blue，violet都有。我曾经看他们操作过，就是直接三个
laser全开，选你要的FL，然后就run了。没有time delay相应的设置。
我就不知道是他们不需要设置，还是Cyan ADP没有这种功能。 |
|
D*a
发帖数: 6830 | 16 我就一直想不明白为啥这种问题不直接去问core的人啊 |
|
l*******r
发帖数: 63 | 17 一般都设置好了。比较低端的machine这些参数都是fix的。 |
|
|
c***r
发帖数: 1132 | 19 因为仪器每天开的话，必须先run QC，QC过了才会run样品。所以，基本上你看到的时
候，机器都是已经run完QC的。你没看到，不代表他们没有做，哈哈。
BD的大型仪器都是可以调各种设置的；但是被BD买了的Accuri这种桌面型的就几乎都是
fix的，没什么能调的。
Cyan adp, 看了一眼，没看到哪里能调delay的，只看到调voltage、pmt这些的 |
|
Z**********g
发帖数: 222 | 20 不同的laser激发有先后(细胞快速通过一laser接着又通过另外一laser)，产生时间差,
所以detection也分先后。但仍然有重叠，需补偿。 |
|
|
c*****1
发帖数: 22 | 22 excitation不一样，用不同的laser，哪怕emission一样没关系，是从不同的方向检测
的。所以不存在检测这个影响那个的情况。 |
|
|
i*o
发帖数: 202 | 24 【 以下文字转载自 Physics 讨论区 】
发信人: ito (恩恩), 信区: Physics
标 题: 请教 2photon absorption and emission wavelengths
发信站: BBS 未名空间站 (Thu Aug 26 13:39:40 2010, 美东)
请教一下有没有人有以下各种dye 的2photon absorption and emission spectra 的资料
PE
PE Texas Red
PE cy7
PerCp-Cy5.5
APC
APC-cy7
Alexa Fluo 430
任何信息都可以 谢谢！！ |
|
i*o
发帖数: 202 | 25 请教一下有没有人有以下各种dye 的2photon absorption and emission spectra 的资料
PE
PE Texas Red
PE cy7
PerCp-Cy5.5
APC
APC-cy7
Alexa Fluo 430
任何信息都可以 谢谢！！ |
|
