c********r
发帖数: 23 | 1 现在养的细胞在玻璃的coverslip上长的形态不好，可是在culture dish里没问题。在
玻璃coverslip上附着了poly-lysine/collagen/gelatin也没有太大帮助。想试一下
plastic或其他材质的coverslip/slide, 但查了一下好像一般autofluorescence比较强
。由于后续要做荧光染色，需要用到FTIC/rhodamine/DAPI，普通的plastic可能不行。
lab-tek有一种permanox plastic chamberslide号称minimal autofluorescence，不知
有人用过没？如果有人知道其他材质的plastic coverslip/slide适合用于荧光染色也
麻烦推荐一下。非常感谢！ |
|
a*****a
发帖数: 312 | 2 【 以下文字转载自 Chemistry 讨论区 】
发信人: asteria (我), 信区: Chemistry
标 题: 哪里能买到Teflon的coverslip holder啊？
发信站: BBS 未名空间站 (Fri Jan 23 14:21:04 2009), 转信
需要用强酸强氧化剂清理一堆coverslip和glas slide，
不知道哪里能买到teflon制作的holder啊？这样就可以一次都放进去了。
多多谢 |
|
f******e
发帖数: 125 | 3 【 以下文字转载自 Chemistry 讨论区 】
发信人: firelane (beaver), 信区: Chemistry
标 题: silanization of coverslip
发信站: BBS 未名空间站 (Fri Sep 3 11:45:56 2010, 美东)
I saw some protocols using waters solution of silane to do the silanization
and some protocol using acetone or heptane solution. I am wondering which
one is better.
Thanks a lot
Sorry that I could not type in Chinese in lab. |
|
l********k
发帖数: 14844 | 4 用coverslip作spacer，做一个tunnel slide，中间滴上水。滴水之前，在tunnel上下
表面（glass slide和cover slip），tunnel的内侧用笔画两个标记，用来focus，然后
就是数圈圈了。
coverslip的厚度一般是0.17mm, 你可以用几个coverslip叠起来用。 |
|
C*I
发帖数: 4736 | 5 一直在误导，现在还在误导。 说说明corona virus 不可以从蝙蝠直接传染给人，必须
经过一个中间宿体性的其它动物才能传染给人。所以，病毒发生后，就故意误导全国人
民去海鲜市场找证据，找其它野生动物的麻烦。 而且还是病毒所去找的，找完了还装
模做样化验呀，分离呀什么的。最后把责任全部推给了海鲜市场的动物。可是那种动物
，一直不敢说，说了其它相关已经在人就会去早那种动物监测。 所以压根不说，打马
虎眼。
事实上，早在2013 年，就是这个武汉病毒研究所，已经从来自云南的蝙蝠身上所携带
的corona virus中分离出第一株蝙蝠SARS类似样的冠状病毒的活病毒，其中就包含了类
似于S类型的基因。从而证实这株病毒能够使其接受和SARS病毒相同的受体，并能够感
染人的细胞。对此新发现，武汉病毒所还把它以武汉病毒研究所的英文简称命名“WIV1
”，以彰显这一发现的重要价值和属于自己第一个发现的巨大研究成果。这个成果刊载
于2013年11月的《自然》杂志。
就是说，从云南弄回来的这种蝙蝠所携带的类似于sars的 corona virus， 可以不经过
其它受体/宿体，而直接传染给人。 他们... 阅读全帖 |
|
C*I
发帖数: 4736 | 6 一直在误导，现在还在误导。 说说明corona virus 不可以从蝙蝠直接传染给人，必须
经过一个中间宿体性的其它动物才能传染给人。所以，病毒发生后，就故意误导全国人
民去海鲜市场找证据，找其它野生动物的麻烦。 而且还是病毒所去找的，找完了还装
模做样化验呀，分离呀什么的。最后把责任全部推给了海鲜市场的动物。可是那种动物
，一直不敢说，说了其它相关已经在人就会去早那种动物监测。 所以压根不说，打马
虎眼。
事实上，早在2013 年，就是这个武汉病毒研究所，已经从来自云南的蝙蝠身上所携带
的corona virus中分离出第一株蝙蝠SARS类似样的冠状病毒的活病毒，其中就包含了类
似于S类型的基因。从而证实这株病毒能够使其接受和SARS病毒相同的受体，并能够感
染人的细胞。对此新发现，武汉病毒所还把它以武汉病毒研究所的英文简称命名“WIV1
”，以彰显这一发现的重要价值和属于自己第一个发现的巨大研究成果。这个成果刊载
于2013年11月的《自然》杂志。
就是说，从云南弄回来的这种蝙蝠所携带的类似于sars的 corona virus， 可以不经过
其它受体/宿体，而直接传染给人。 他们... 阅读全帖 |
|
C*I
发帖数: 4736 | 7 Published: 30 October 2013
Isolation and characterization of a bat SARS-like coronavirus that uses the
ACE2 receptor
Xing-Yi Ge, Jia-Lu Li, Xing-Lou Yang, Aleksei A. Chmura, Guangjian Zhu,
Jonathan H. Epstein, Jonna K. Mazet, Ben Hu, Wei Zhang, Cheng Peng, Yu-Ji
Zhang, Chu-Ming Luo, Bing Tan, Ning Wang, Yan Zhu, Gary Crameri, Shu-Yi
Zhang, Lin-Fa Wang, Peter Daszak & Zheng-Li Shi
Nature volume 503, pages535–538(2013)Cite this article
Abstract
The 2002–3 pandemic caused by severe acute respirator... 阅读全帖 |
|
I***a
发帖数: 13467 | 8 我是这样的，
因为要用到共聚焦观察，片子要长菌，再加细胞，
所以用dish，就是dish上挖了个空，贴上coverslip，东西在coverslip上， |
|
B***v
发帖数: 113 | 9 我是指mounting这一步。是直接悬浮在mounting media里，然后夹在slide和coverslip
之间，还是让其附着在coverslip上再mount到slide上？以前用过一种叫cell tak的东
西。
担心如果不事先附着聚焦会不会有问题。我做confocal |
|
p*****n
发帖数: 981 | 10 谢谢大家的关心，我戒网两周原因见听svoboda的talk的帖子，跟myresearch没有关系。
i won't comment on anything myresearch talked about me.
Today, when i was washing my coverslips for immunostaining (imaging :))
experiments. i suddenly understand, damn! so stupid was I . why immunost
aining couldn't be called imaging???
yes, of course, it can! my arguments with nniu, peoplem and peepal were
pointless and stupid. i did some retrospective thoughts on myself.
i did make a stupid mistake about this discuss about imaging.
太钻牛角尖了。以致于不 |
|
O**e
发帖数: 246 | 11 Maybe the coating on the coverslip is not good. |
|
C*********m
发帖数: 213 | 12 据说不划算,不如直接买硅化好的。
silanization |
|
T**********t
发帖数: 1604 | 13 我是用acetone的，没试过别的溶剂。acetone很好用。 |
|
|
v***a
发帖数: 1242 | 15 以前只做过一般的dual-labeled 荧光显微镜，包括tissue和培养的细胞染色。请教如
果现用confocal，有什么不一样的地方需要注意吗，可以不改动protocol直接去看否？
比如细胞染色，我一般是用no.1的coverslip养在上面，现在看到paper里有人做
confocal用的是membrane inserts养细胞，还有的人是用的no.1.5的converslip。这些
都该如何选择比较好？fixative的选择有什么注意吗，我一般都不用Paraformaldehyde
，但paper里几乎清一色都是，而且是用ice-cold PFA fix几个小时。可以用RT PFA来
fix比较短的时间吗？
谢谢！ |
|
b*********b
发帖数: 64 | 16 如果你很想了解confocal或者更高级的two-photon，下面两篇paper对你会有帮助。
1.Ojcius DM et al.Immunology and the confocal microscope. Res Immunol 1996
2.Cahalan MD et al.Two-photon tissue imaging: seeing the immune system in a
fresh light.Nat Rev Immunol 2002
ZL1999 (胖头猫)提到了confocal和一般fluoresent microscopy的区别，除了有一点我
不太认同，根据我的理解，confocal microscopy的photobleaching问题应该比一般的
fluoresent microscopy要小，因为前者illuminate smaller volume of your sample。
如果你要做的是培养的细胞，你可以不用改protocal，我一般用8-well chamber slide
，这样一张slide上可以有8个samples。coversl... 阅读全帖 |
|
m*******y
发帖数: 16 | 17 coverslip的厚度是镜头决定的，有的镜头可以调来适应玻璃厚度，你直接问管显微镜
的人
一般说confocal bleach比较快是因为激光汇聚在在焦点上，虽然每次只激发很小的体
积，但是这个体积内的能量密度很大。同样，管显微镜的人肯定会培训你再让你上机的
，他肯定会教你尽量从小的激光功率开始
a
sample。
slide |
|
b******s
发帖数: 5365 | 18 用惯了inverted confocal microscope再去用upright,真悲催。不但不能做live cell
imaging, 那个盖coverslip真是麻烦， 还很容易搞得很messy;能用的chamber slide
也是寥寥.....@#$%! |
|
p*l
发帖数: 1359 | 19 玻璃折射率1.5，单片coverslip的厚度除以1.5就是等效的空气中的厚度。这种等效计
算方法在classial optical engineering 中叫 reduced thickness。 |
|
a****e
发帖数: 186 | 20 滴水是为了模拟样品折射率么？
coverslip有一个厚度范围，误差区间大概200微米，最好用卡尺或者micrometer量下 |
|
a****e
发帖数: 186 | 21 没具体测过coverslip的厚度误差，fisher标称的误差挺大的，实际上可能比较小，特
别是同一个batch的。
的。 |
|
|
|
|
|
a********n
发帖数: 844 | 26 我们实验室按庄晓薇的技术在做细胞成像。
样品制备跟confocal基本一致，但最后不用封片，而是把coverslip泡在imaging
buffer里边放到显微镜上照相。
现在我们从外地的实验室要一些细胞样品，对方可以帮我们做到二抗完这一步，但不管
自己去拿还是快递也需要一两天时间才能送到我们实验室，我想知道到底细胞固定之后
哪一步实验能停下来一两天而不影响细胞的形态。
如果牛人能给我些建议，我不胜感激。先谢过！ |
|
f******e
发帖数: 125 | 27 I saw some protocols using waters solution of silane to do the silanization
and some protocol using acetone or heptane solution. I am wondering which
one is better.
Thanks a lot
Sorry that I could not type in Chinese in lab. |
|
|
l********7
发帖数: 20 | 29 刚好有个dealer回信给我，也许对你有用：
As a dealer, we offer two options for heated stages:
The first and most basic is from Physitemp http://www.physitemp.com/stages.htm. Their TS-4 stage is capable of heating from -15 to 60 deg C and runs $4,500. They offer software (TPC-WIN) for $675 that only controls temperature and does NOT interface with the camera for synchronization of time and temperature. This option uses standard coverslip corrected objectives.
The second and recommended option is from Linkam (att |
|
