s****y
发帖数: 89 | 1 我用B16F10细胞来做美白的实验。大概就是b16f10细胞培养一段时间会变黑，期间我加
某种药物，看细胞是否会变白。
我现在有个一直解决不了的问题，我用10%FBS DMEM培养细胞，我发现一旦培养基颜色
变黑后24小时内所有细胞都会逐渐悬浮到培养基里（我认为就是死亡了）。悬浮的细胞
我收集起来，离心一下，会发现这些细胞颜色都变黑了，而还没悬浮起来的细胞（也就
是在培养皿底部正常生长的细胞）颜色却是接近淡黄色的。
我的主要目的和想要的结果是培养基颜色变黑后，细胞不会逐渐死亡，且关键一点是把
细胞从培养皿底部弄下来后颜色要是黑色的。因为我得用黑色的细胞做为对照组之类的
，但是不可能用悬浮的死了的细胞做实验。
有没有可能？应该怎么办呢？3,4 个月了都没解决 |
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r******m
发帖数: 5550 | 2 nod...我们养的B16F10也都是有点黑色的，可是培养基颜色不会变黑阿。。
应该是有contamination
btw,好好玩啊，真的是美白试验阿。。。
lz这是什么专业阿 |
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r******m
发帖数: 5550 | 3 我们的B16F10一直都会有淡淡的黑色，因为有melanin表达吧，要不怎么是黑色素瘤呢。
细胞太挤得话，只会让media变很黄阿，
呢？ |
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s******y
发帖数: 28562 | 4 That is not normal at all.
All my attached B16 cells are black.
You need to check your cell culture and see if there is any contamination (
such as fungus or mycoplasma) in it.
Also, did you keep your cells in a good density? B16 cells grow very fast
and you need to split them every three days. |
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s****y
发帖数: 89 | 5
thank you very much. what kind B16 cells do you use? F1? F10?
you use 10% FBS DMEM ? I am sure there is no fungus and mycoplasma, and I
also split them every 3days.
when your attached B16cells turn to black, what color is the medium at that
time?
and the "black" you mentioned is typically dark black? not grey ?
and did your cells gradually detach bottom of the dish when the medium color turn to black? |
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s****y
发帖数: 89 | 6
我在皮肤科实验室读PHD，国内是医学临床毕业的。你说的有点黑是什么时候会变黑呢？
有点黑是指纯黑色？还是像褐色灰色之类的？
一直放在温箱里边培养基颜色都不会变黑？
哎，实验老是做不出结果就不好玩了 |
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g****0
发帖数: 425 | 8 Since it took you few months already, why not get a new batch from ATCC,
which only cost less than 300 bucks. I don't see anything wrong in your
culture procedure. |
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s******y
发帖数: 28562 | 9 我们用的也是B16 F10，
细胞用肉眼看是淡淡的灰色（非常不明显的），离心后沉在一起就是中度的黑色。
细胞培养液在新鲜的时候当然是红色的，培养几天如果发黄了就是该换的时候了。
如果你在分养细胞的时候分得不够稀疏（一般应该1瓶分出10瓶来），会让细胞过早达到
confluent 消耗养分过多然后一起死掉。
在我印象中f10 分泌melanin 不是很快，所以你可能会等不到看到培养液变黑就该换溶液了 |
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s******y
发帖数: 28562 | 10 我仔细回想了一下。大概是这样的，在第三天的时候，细胞是灰色的，培养液是黄色的
带有一点黑，
但是并不会真的很黑。因为B16 F10 cell line分泌的黑色素其实不是很多，在溶液里
面的浓度
不会特别大。如果这个溶液的颜色对你们很重要的话，你们应该用spectrometry 来检视
达到
溶液了 |
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r******m
发帖数: 5550 | 11 怪不得我从来没有见过培养液变黑
我们的细胞都是顶多等90%满就分，长过了就不能用了
换溶液了 |
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s****y
发帖数: 89 | 12
达到
溶液了
我试过在培养基快变黑前换溶液，换过溶液后一两天在下一次溶液颜色快变黑前我离心
细胞，会发现细胞颜色还是淡黄色的，也就是说只有等到培养基颜色变完全黑了（同时
细胞也死了很多了）这时我离心的话才会得到黑色细胞（可这些细胞都基本死了）。这
种情况正常吗？
您是说你们试验中在培养基变黑前离心会得到黑色细胞的吧。
培养基的颜色对我们不重要，重要的是要得到活的黑色的细胞。 |
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s******y
发帖数: 28562 | 13 这个肯定不对头。
我们的细胞从冰箱里拿出来后长一天就变黑了。然后一直都是黑色的。
你们的细胞要么是被感染了，要么就是细胞被诱导分化了（B16 有一定的分化能力）
我建议你们找别的实验室要一份他们的B16 F10, 要么再直接找ＡＴＣＣ订一份 |
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s****y
发帖数: 89 | 14
恩，我也越来越觉得细胞是有点问题。我可能会重新订一份，谢谢帮忙了。
问题解决定来汇报 |
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s****y
发帖数: 89 | 16
想问一下，你们应该会用α-MSH 或 IBMX，来作为positive control 增加
melanin的吧？用这两种物质treat cell，2,3天后cell离心后是不是颜色会比没有treat的细胞，也就是control组颜色更黑？假如是的话，α-MSH或IBMX 这一组的medium 颜色不是黑的吧也就是说没有细胞死吧？
还有就是B16细胞你们一般用多长时间买新的？还是就这样正常split下去没关系？
真不好意思，问这么多，我想确认一下，真的是实验没办法做了。。。 |
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s******y
发帖数: 28562 | 17 我们做的实验和你们的不一样，我们并不关心颜色所以我没有比较过用a-MSH后
细胞是不是变黑了。
B16我们是在别的实验室要来的。一直在split，没有什么问题。反正这个细胞是
癌细胞，理论上是可以没完没了的传代的。
treat的细胞，也就是control组颜色更黑？假如是的话，α-MSH或IBMX 这一组的
medium 颜色不是黑的吧也就是说没有细胞死吧？ |
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s******y
发帖数: 28562 | 19 MEF, REF, HEK293T,Hela, PTK2, B16F10, eptherial cells... |
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s**********e
发帖数: 2888 | 20 计划用tail vein injection of B16F10 cells去看metastasis, 这个实验看着很容易
，想问一下这个实验容易做不？老鼠之间variation大不大？谢谢了。 |
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s**********e
发帖数: 2888 | 21 Thank you very much, this is very useful. I have a B16F10-GFP cell line,
will try to get the Luciferase cell line. |
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