a***a
发帖数: 27 | 1 本站ID:
amaxa
NKBBS上的ID:
amaxa
在南开的时间段:
2005-2008
院系专业:
医学院
目前所在地:
Minnesota,Twin Cities
其它(备注):
初来乍到，请大家多关照！ |
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c******r
发帖数: 3778 | 2 个人建议哈。这个Amaxa最好还是先做个test。找个GFP plasmid，用他们提供的那个也
可以，然后买个test kit，里面有两个还是三个不同的buffers，然后按照他们的
manual各种情况都做一下。然后flow，这样可以有个比较准确的了解trasfection
efficiency。flow的时候可以加上PI，这样可以了解viability。
这样可以选个比较好的protocol。
如果选好了，这个Amaxa的效率是非常高的。 |
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a***a
发帖数: 27 | 3 【 以下文字转载自 Minnesota 讨论区 】
发信人: amaxa (朋友，好久不见), 信区: Minnesota
标 题: 房屋出租 Wayzata 交通方便临近394 全新装修 Apartment两室两卫 2Br2Ba
关键字: 房屋 出租
发信站: BBS 未名空间站 (Sat Nov 23 17:56:46 2013, 美东)
房屋出租 Wayzata 交通方便临近394 全新装修 Apartment两室两卫 2Br2Ba
地点: 215 Barry Ave S Wayzata MN55391
交通: 在394附近 去Downtown 非常方便, 步行 3分钟到公交车站 675 可以去附近
Ridgedale Shopping Mall,也可以到Downtown
房屋: 两卧室 两卫生间 2Br 2Ba 两个卫生间都可以洗澡
屋子是全新装修的,自己没怎么住 墙上有细工家具
厨房: 全新的 炉子 洗碗机 冰箱 (见照,实景拍摄无ps :) )
有壁炉，不过Heat给的很足，从来没用过
车库: 室内地下车库 车库内有热水洗车... 阅读全帖 |
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d******r
发帖数: 124 | 4 有什么transfection reagent推荐？我试了磷酸钙，neuroFECT,GenCarrier-2，效果都
不理想，转染效率很低（平均2，3个/8000 neuron），死掉很多。因为需要等轴突树突
分化之后再转染，所以不能用电转和amaxa。用病毒又太费时。各位大侠有什么经验可
以传授吗？ |
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s*******g
发帖数: 121 | 5 try transfection kit from Amaxa or shRNA in lentivirus.
20nM |
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z*******0
发帖数: 35 | 6 不好意思，我没说清楚，不是转染效率（80%）太低，因为的细胞proliferation的厉害
，体外一周左右就基本没什么绿色的细胞了。我用的是amaxa的nucleofection，实验室
不能用病毒转，目前没条件。
我的体内实验要2到3周。试过一次没什么效果。所以想看看有什么染色或者PCR的方法
可以用的。
我也知道最好的方法是label，但是目前条件有限，染色或者PCR是我的最佳选择。 |
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s******r
发帖数: 2876 | 7 用lentivirus，整合的。
不好意思，我没说清楚，不是转染效率（80%）太低，因为的细胞proliferation的厉害
，体外一周左右就基本没什么绿色的细胞了。我用的是amaxa的nucleofection，实验室
不能用病毒转，目前没条件。
我的体内实验要2到3周。试过一次没什么效果。所以想看看有什么染色或者PCR的方法
可以用的。
我也知道最好的方法是label，但是目前条件有限，染色或者PCR是我的最佳选择。 |
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s*****g
发帖数: 7857 | 8 我按照Lonza/Amaxa的program做transfection of suspension cells.当时过夜后的细
胞存活率是60%.可是加抗生素选择后几乎就死光光了.即使几天后有20%的细胞,也最后
走向死亡.
有做着方面的专家,给分析一下,是为什么?
以前都做附着细胞的transfection.过夜后活细胞都附着培养皿底部.把含死细胞的培养
液换成新培养液.再加抗生素/培养液就可以得到想要的但细胞克隆了. |
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l*****i
发帖数: 1163 | 9 上LV，通常都有现成的。滴度更高，转染效率更高，表达量更高。
或者用Amaxa的fibroblast转染kit也行。 |
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d***y
发帖数: 299 | 11 electroporation: 1.3 x 107 cells with 10 μg DNA in serum free medium for 10
min and then electroporated the cells using settings of 300
V, 800 μF, and 24 ohms. works well, cheap.
or use amaxa nucleofection. works extremely well. a little bit expensive. |
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d***y
发帖数: 299 | 12 就是RPMI+10%FBS养的。不过可能细胞的克隆不一样，会有点差别。我们是一个个试，
试出这个条件的。
我看不懂你的电击仪的连接设置，跟我们的不一样，我们是BTX-ECM600。
实在不行，就用amaxa nucleofection吧，不过如果你们试验室没有那个仪器，得问问
别的试验室有没有可以借。 |
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d****i
发帖数: 2346 | 13 Amaxa Mouse Macrophage Nucleofector Kit |
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L**********O
发帖数: 1761 | 14 Do you mean amaxa? i tried~~~ but still bad~~~~~ :((((( |
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L**********O
发帖数: 1761 | 15 I tried 3 kits from amaxa nucleofection and lipofectamine.... But they are
all crap~~~~ :((( |
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k****o
发帖数: 589 | 16
are
amaxa的GFP control转染效率如何？按理说应该很高的。另外试过不同的program吗？ |
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j****g
发帖数: 406 | 17 Amaxa? 听用过的人说可以达到80%左右。是primary neuron。 |
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m*********7
发帖数: 5207 | 18 nucleofector 96 well shuffle system from Lonza?
(Amaxa was incorporated into Lonza 2 years ago) |
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H****s
发帖数: 301 | 19 叹气先。这个问题几乎年年都有人问。
悬浮细胞系基本上转染效率都不太高，所以找个高转染的悬浮细胞系不是太容易。如果
你需要比较高的转染效率，试试Amaxa吧。否则的话，对于建立和筛选细胞系，普通的
电转就足够了。
稳定克隆的筛选，细胞系的选择是一个方面，表达载体和抗性的选择也很重要。另外，
你要表达ICAM-1，要先看看ICAM-1在各个悬浮细胞系里的表达情况再做决定。最好选择
一个没有ICAM-1表达，或者是表达非常低的细胞系使用。
如果你还是学生的话，和你导师谈谈，然后综合考虑。 |
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c****b
发帖数: 1230 | 20 最好能用于amaxa的，他家的东西实在太tmd的贵了 |
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D****g
发帖数: 275 | 21 You can try electropotration to increase the transfection efficiency, such
as the neon system from Invitrogen or Nucleofector from Amaxa, you can
easily transfect the cells for more than 40-50%.
internal |
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s*********t
发帖数: 600 | 22 1 HPC7
2 NB4 U937 HL60 用amaxa的kit转染 |
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s*****g
发帖数: 7857 | 23 leukemia/lymphoma cell line只有amaxa的kit电转,或病毒转染.
别的LAB用BIO-RAD电转机器,加PBS电转leukemia(当然死了很多,但也有活的),但省钱啊. |
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s*****g
发帖数: 7857 | 24 友情提醒:如果用BIO-RAD上诉廉价方法,是要大量细胞的.
而AMAXA 和病毒转染就不需要大量细胞. |
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h**********8
发帖数: 650 | 25 没有一个好转的
amaxa巨贵，不同细胞还得买不同的盒子
我比较过，invitrogen 的neon是最好的 |
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f*******e
发帖数: 354 | 26 amaxa buffer自己配好了 也就买个杯子的钱 反正是建系 能有活的就OK了 |
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v*********d
发帖数: 382 | 27 要高效肯定是病毒，效率就看titer了，高titer下，90％ 没问题
要是50％－70％ 左右可以的话，可以试试lonza （Amaxa）或者invitrogen 的 neon
transfection system， 都是电＋化学的。 另外，MEF passage越多，效率越差 |
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v*********d
发帖数: 382 | 28 要高效肯定是病毒，效率就看titer了，高titer下，90％ 没问题
要是50％－70％ 左右可以的话，可以试试lonza （Amaxa）或者invitrogen 的 neon
transfection system， 都是电＋化学的。 另外，MEF passage越多，效率越差 |
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n********k
发帖数: 2818 | 30 Thanks...But I am not sure that;s trustable or not...we have been using the
Amax for ys, and it works nicely...however, it is pretty expensive and I am
debating whether I shall switch to Neon for my future lab...THus, I would love to see
some first-hand experience...
Culture/Transfection/Transfection___Selection-Misc/Neon-Transfection-System/neon-vs_-amaxa.html |
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d****d
发帖数: 214 | 31 I tried primary mouse B and T cells, ~50% transfection efficiency for
plasmid DNA and ~100% for small RNA.
I never used Amaxa, but according to someone who used it, Neon is much more
adjustable and controllable.
very |
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k****o
发帖数: 589 | 32
呵呵，公司开发产品都这样的，用的基本上是GFP，IgG表达这样的系统。用17k的质粒
估计他们这个平台都开发不出来。
这个系统用的solution也和Amaxa一样是按细胞种类区分的吗？ |
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c****b
发帖数: 1230 | 33 Amaxa worked just fine for me when a 17 kb plasmid was transfected to cells
for integration |
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A******y
发帖数: 2041 | 34 Anyone has experience with MV4-11 AML cell line? Amaxa p-max ctrl plasmid
work great (4k), but all my coding plasmid (~9 to 10k) can not even get in.
I want to adjust the program but don't know which one to adjust to. |
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l*******i
发帖数: 153 | 35 我们用invitrogen的Neon transfection系统，瞬时转染效率可以达80-90%，稳转在30%
以上。amaxa稍微弱一点。 |
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