m****n
发帖数: 1066 | 1 正在clone一段大约2000bp的 3’UTR.
1. RT-PCR, 用过superscriptIII and thermoscript, 不行。靠近polyA的可以PCR出来
。这个2000bp的不行。
2. 用human genomics DNA, 自己从细胞里用DNAeasy提的。至少三四条带在1500-
2000bp的位置。
这个序列二级结构比较多。
高手指点。不行就找genescript合成了。 |
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h*********n
发帖数: 11319 | 2 看看这对地监控视频质量
http://m.weibo.cn/5838191069/3967809031397998?sourceType=sms&fr
2020年前实现52颗卫星的监控网络，对全球任何地点10分钟重访。
星载一体化高分辨多光谱小卫星
来源： 长光卫星技术有限公司时间：2016-02-04
产品描述
高分辨多光谱小卫星采用星载一体化设计理念，整星重量不超过350kg，通过配置控制
力矩陀螺，卫星机动能力可达3°/s，可实现同轨立体成像和条带拼接成像。结合星上
固态盘海量存储和高码速率X波段数传，每天可获取高达950,000km2图像数据。
应用领域
可广泛应用于农林生产、资源管理、环境监测、土地规划、地理测绘等各领域。
主要技术性能指标
●轨道类型
600km太阳同步轨道
●像元分辨力 全色0.
7m 多光谱2.8m
●地面覆盖宽度 12km
●连续成像时间400s
●成像模式
常规推扫、大角度侧摆、条带拼接、立体成像
●最大侧摆角 ±45°
●S频段测控 上行码速
率：2000bps下行码速率：4096bps
●X频段数传 数传码速
率：600Mbps（双通道） 星上存... 阅读全帖 |
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h*********n
发帖数: 11319 | 3 【 以下文字转载自 Military 讨论区 】
发信人: helloterran (hi you), 信区: Military
标 题: 我共又一黑科技，天基全球实时监控
发信站: BBS 未名空间站 (Sun Apr 24 21:17:49 2016, 美东)
看看这对地监控视频质量
http://m.weibo.cn/5838191069/3967809031397998?sourceType=sms&fr
2020年前实现52颗卫星的监控网络，对全球任何地点10分钟重访。
星载一体化高分辨多光谱小卫星
来源： 长光卫星技术有限公司时间：2016-02-04
产品描述
高分辨多光谱小卫星采用星载一体化设计理念，整星重量不超过350kg，通过配置控制
力矩陀螺，卫星机动能力可达3°/s，可实现同轨立体成像和条带拼接成像。结合星上
固态盘海量存储和高码速率X波段数传，每天可获取高达950,000km2图像数据。
应用领域
可广泛应用于农林生产、资源管理、环境监测、土地规划、地理测绘等各领域。
主要技术性能指标
●轨道类型
600km太阳同步轨道
●像元分辨力 全色0.
7m 多光谱... 阅读全帖 |
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n**l
发帖数: 2754 | 4 cammy对blanka贼爽啊，基本ultra一满，blanka就不敢动了。
有些link是挺难的，诸如重拳-〉蹲中腿。上手的确没有波升类的容易。但玩了N久的
ryu/ken，实在有点“波升疲劳”了。cammy的马甲刚打到2000bp，还得好好练。 |
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K*F
发帖数: 120 | 5 请教高人，问题如题，曾经用1%试过，不能分开，有没有其他的办法？
谢谢 |
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T**********t
发帖数: 1604 | 8 一般来说凝胶浓度越低分辨率也越低。
2kb左右的片段完全可以用1.5%或者2%的agarose胶跑。2.2kb和2kb应该能分开的。 |
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h**********r
发帖数: 671 | 9 可以找内切酶把A片段切小，但B片段不被切。run a gel把B回收了。
同理，可以找内切酶把B片段切小，但A片段不被切。run a gel把A回收了。 |
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M*****n
发帖数: 16729 | 10 man, this is not so easy. if you are really concerned about cross-
contamination. try a different route.
I had trouble to separate 3Kb and 3.2kb and I had to re-clone it into a
vector with a different selection marker. |
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T**********t
发帖数: 1604 | 11 分2.2kb和2kb比分3.2kb和3kb要容易些。
前者size相差10%，后者size相差6.7%。
用窄的梳齿，降低上样体积和浓度，2%的胶低电压多跑一会应该分得开。 |
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w*******2
发帖数: 6 | 14 就在凑的地方设计重合的引物就行了，分步得到产物，然后用两个产物PCR重叠。 |
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c*******n
发帖数: 27 | 16 40bp 就足够了。长的引物反而容易引人错误，因为合成时很容易中间缺失某个碱基。 |
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E***u
发帖数: 60 | 18 另外，请教一下，PCR重叠的时候需要特别的protocol么？
还是只需要用普通PCR protocol?
似乎不同的文章说法非常不一样 |
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b*****o
发帖数: 150 | 20 Should be pretty easy. What's your mean "每次都连得稀奇古怪的"?
Is your 2000bp DNA fragment PCR product? or released from another vector?
Are KpnI and HindIII very close to each other? Provide more information if
you really want to get help |
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H*******i
发帖数: 196 | 21 如果PCR work（如果你不担心突变的话）就没问题。没有条带得话基本不用转化，直接
换方法
我弄过比较难的是一个10kb质粒里面有两段500bp（共2000bp）反向互补，最后中间找
了个酶分开PCR 连起来的。
关于PCR, 引物不要用完全反向互补序列，如果做deletion，保证5'端不会misanealing
（里面有很多问题，具体和高保真酶的外切酶活性有关）
时间和你的酶有关，Q5我最长1min/KB
个人引物设计退火温度都是65往上的（你非特异性条带多，是不是序列中二级结构很多
？）。。
另外有protocol是完全不overlap， 引物磷酸化，最后连接的，我没试过。 |
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发帖数: 1 | 22 关注一个基因，想看看它的promoter，发现它与相邻的基因之间就相距几百bp,调它
promoter的话就是这几百bp，还是常见的扩到上游2000bp长度 ?
谢谢赐教~ |
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