|
h******y
发帖数: 351 | 2 这得看你的探针是用什么标记的。用同位素的话，S的半衰期大概35天，一个月就递减一
半。如果是DIG标记的话，放-80C，至少半年内没问题。半年以后 ，你的实验也该做完
了吧。 |
|
|
|
k*****n
发帖数: 323 | 5 变量好多啊，逐一排除吧～
1。probe有没有做对啊？是不是反义啊？utp有加进去么？用的什么label？大小多少
2。有没有分别label阳性对照和你的基因？可以考虑互换label方式
3。一抗和二抗对不对
4。检测的channel对不对？ |
|
n*****l
发帖数: 868 | 6 实验室新项目,我真是两眼一抹黑,周围也找不到可以指导的人.
1.probe是不是就合成目的基因互补的一段单链DNA或者RNA? DNA好还是RNA好
呢?
2.probe的label是自己用试剂盒做么?看到很多人做地高辛标记,但是我们实验室要做
FISH,荧光标记是自己标还是公司可以合成? 如果有好的公司,可否给个链接,谢谢.
3.section是冰冻的好还是石蜡的好?要不要蛋白酶K处理?
真的是请前辈不吝赐教,在下不胜感激! |
|
n*****l
发帖数: 868 | 7 还有一个问题,这个probo的长度多少合适?是不是要跨内含子?谢谢 |
|
x**e
发帖数: 163 | 8 1.probe是不是就合成目的基因互补的一段单链DNA或者RNA? DNA好还是RNA好
呢?
是的，我们一般都用cRNA做探针。
2.probe的label是自己用试剂盒做么?看到很多人做地高辛标记,但是我们实验室要做
FISH,荧光标记是自己标还是公司可以合成? 如果有好的公司,可否给个链接,谢谢.
没做过FISH，不过做FISH的探针要考虑荧光的强度，很多公司，比如IDT，可以合成，
但只能在5‘末端加一个荧光基团，强度可能不够，自己合成的话可以将所有的U的添加
一个荧光基团，荧光强度要大数十倍。
3.section是冰冻的好还是石蜡的好?要不要蛋白酶K处理?
我做的都是石蜡的，必须要蛋白酶K处理。
探针在100bp左右为佳，是否跨内含子不清楚，我的没有跨过。 |
|
n*****l
发帖数: 868 | 9 谢谢您的回复。
我也是看到说probe要100bp左右。但是也找到一个公司，EXIQON，online的软件给的
probe都只有20bp多，也只能带1个或者2个荧光基团.
想请教如果自己合成，是象合成引物那样，给序列公司合成后，自己用试剂盒label荧
光么？
还有就是你们为什么用石蜡的呢？他比冰冻切片更好么？因为以前我们做免疫荧光基本
都是用冰冻的，觉得石蜡步骤繁多，又爱脱片。
谢谢 |
|
c******r
发帖数: 3778 | 10 这个current protocols应该有现成的protocol吧？ |
|
n*****l
发帖数: 868 | 11 我有protocol, 只是很多细节的东西,希望能得到前辈的真传少走弯路. |
|
|
g*****n
发帖数: 250 | 13 1. cRNA
2. 500-1000
3. DIG. Anti-DiG antibody-FTLC
4. Probe to 3' region of target mRNA, avoid conserved seq as much as
possible.
5. Paraffin sections good morph, low signal. Frozen bad morph high signal.
6. Protease K yes. But be careful, sections can fall off. |
|
|
d******5
发帖数: 1 | 15 各位xdjm,在下帮国内的亲兄弟问一下（薄厚机会）。 感谢万分。。 近来导师鼓励其
出国深造几年，求各位给指引个方向。
#####
本人武汉大学口腔医学院博士一名，主攻牙发育，牙髓生物学，今年博三即将毕业。想
在美国找一份博后的位置。
在博士三年期间以第一作者发表了2篇SCI论文（JOE IF：2.8，IVCD： IF：1.3）。另
外有一篇第一作者的文章（JCP IF：3.8）已经修回（小修）。
共同第一作者发表一篇JBC。
有一项专利正在审批。
帮导师撰写过一个自然科学基金面上项目的标书，并申请成功（70W 人刀）。
熟练掌握：细胞培养，基因表达检测（PCR，western，免疫荧光），切片，免疫组化，
原位杂交，一些特殊染色。分子生物学：IP，ChIP，EMSA。转基因小鼠相关：基因型鉴
定，micro CT，骨（矿物）沉积率检测。
现在面临毕业，希望能够进一步提升自己科研水平，希望能在发育学（最好颌面部发育
），或骨科学相关的实验室深造。
谢谢。 |
|
b*****n
发帖数: 1841 | 16 本来文章就是蛋白免疫荧光，一reviewer要求做原位杂交，但是这个技术活没学精。能
不能在修回前跟editor argue说做这个实验不解决问题，所以不做？
谢谢！ |
|
T****i
发帖数: 15191 | 17 比如十一工手下的人苦逼摸索结晶的条件，他十一工还把这事拿出来炫。这和铁杵磨成
针没什么两样，苦逼的同时还浪费资源。现在有公司已经有机器自动摸结晶条件。我觉
得，中国就是被人力资源太多太勤劳太能忍耐给害了。否则，十一工如果没几个手下，
如果他手下都是懒人，说不定以他的聪明，他先去搞自动结晶的机器去了，不但解决自
己的需求，还能给国家赚钱。
再比如，有的实验室拼命做Western，大量重复性工作。艳阳天老师就是明白人，买了
自动洗膜的机器，一下子也能省出一些人力。如果钱多的话，更先进的都有。
再比如，以前有个女老板，忘了是哈佛还是MIT的，和十一工一样，让手下两个博后做
原位杂交，看发育不同时期几千个Transcript。两人每天都做，还放射性标记，大约只
有中国人会干。现在有机器可以自动做。
还有以前养果蝇，人工换瓶子，现在HHMI有机器自动换。
所以苦逼的工作之所以苦逼，是因为重复劳动。是重复劳动就早晚可以自动化的。我不
知道为什么有人会以做机器的工作会以不思考为荣。 |
|
G*******d
发帖数: 40 | 18 【 以下文字转载自 ChinaNews 讨论区 】
【 原文由 jdai 所发表 】
【新语丝电子文库(www.xys.org)(www.xys2.org)】
————————————————
博宁基因公司宣传材料
陈晓宁：把世界三大基因库搬到中国
8月19日傍晚，北京首都机场。
两位来自美国洛杉矶的乘客，提着几只不起眼的箱子，走出机场海关。没有人料
到， 这些箱子里装的竟是目前世界上独一无二、价值尚无法估量的三大基因库。基因
库的 到来，将掀开中国生物研究和产业开发新的一页；这也是人类基因组计划的成果
，第 一次让中国的老百姓广泛地受益。
三大基因库
这三大基因库是：
人类基因克隆库（人类基因组BAC〈细菌人工染色体〉文库）
人类基因探针库（人类染色体FISH〈荧光原位杂交〉探针库）
小鼠基因克隆及探针库（小鼠基因组BAC文库和染色体FISH探针库）
这三大基因库具有三大优势：
权威性：人类基因克隆库，共有12万个克隆，涵盖了人的整个基因组（染色体），是
目前世界上数据最全的基因库，其中定位了7，000个克隆，建立了人类基因探针库。
小鼠基因库也全部进行了定位。目前已用于人类基因组计 |
|
h*****f
发帖数: 248 | 19 想问一下一般因乳癌做完全切手术后要做Fluorescence In Situ Hybridization（FISH
/荧光原位杂交?）测试，组织在FISH检测前会如何保全而不影响结果？
美国有机构建议将组织用10％的natural buffered formalin（NBF）浸>6小时，<48小
时然后做FISH检测。
如果手术是在星期五及病理化验部星期六日都不上班，组织在FISH检测前会如何保全？
这跟我妈妈性命相关，希望有关专业人仕能解答。
先谢！ |
|
s****a
发帖数: 55 | 20 拿到一个特聘教授准备近期回国。学校给一个带编制的Co-PI的位置。希望能找到一个
合得来的人一起奋斗（我这个人比较简单，待人坦诚，不是巧立名目招高级博后）。
1. 所有参与project的文章为co-corresponding author或第一作者。
2. 待遇：fresh PHD （在主流期刊上有1篇文章以上），10 + 万。有2年薄后经历（在
主流期刊上有2篇文章以上），12 + 万。（基本上所有学校都不会给这么高的，）。安
家费5万元和校内周转房（三居室租住房）。
3. 最迟5年，自己独立建组。
-----------------------------------------------------------------------
-----------------------------------------------------------------------
-----------------------------------------------------------------------
我想以上条件还是很有诚意的。一部分工资也是从课题组里补贴... 阅读全帖 |
|
a**y
发帖数: 335 | 21 我今年作了来美国来第一次体检，血脂略高，血液中其他指标正常，血压偏高（135/88
)。最让我担心的是查出来尿液里有隐血，而且查了几次一直有。找了个泌尿科大夫，
说着有可能是膀胱瘤，因为尿液细胞镜检发现有异形细胞。然后就开始提心吊胆，这三
周查了膀胱镜，B超，荧光原位杂交(FISH)，验了N次尿，今天看结果，说排除肿瘤，因
为FISH结果正常。B超显示我的肾脏结构有一些遗传性的特征，和平常人不一样，功能
上没影响,但就是会产生血尿，然后想到到我老爹体检的时候也有同样的问题，于是觉
得这个解释还合理。总算松了一口气。
年纪大了，体检看样子还是要按时做了。大家保重 |
|
l*******s
发帖数: 26303 | 22 【 以下文字转载自 WaterWorld 讨论区 】
发信人: htd (孩儿她爹), 信区: WaterWorld
标 题: zz 水泊梁山那些基情燃烧的岁月：山寨大国里富二代与穷二代的
发信站: BBS 未名空间站 (Sun Dec 4 22:13:01 2011, 美东)
作者: 暗黑山老妖
链接：
http://www.tianya.cn/publicforum/content/free/1/2182043.shtml
欢迎热血童鞋一起贴！
谢谢！！！
法兰克
2011-06-10 17:08:02 法兰克 (别逼我掀桌！！！！！！！！)
第一节
日期：2011-6-6 20:20:00
楔子
幸福的草民都是相似的，不幸的草民各有各的不幸。
有的是因为生逢乱世，有的是因为生逢盛世。
0
有人说，水浒的时代跟今天有些相似。
从某种角度来看，这个说法有些道理，因为那时候我/国就是一个山寨大国，现在
依然是。
我认为山寨这个词在今天应该算是个褒义词，它向世界雄辩地证明，中国人已经成
了最接近神... 阅读全帖 |
|
h*d
发帖数: 19309 | 23 作者: 暗黑山老妖
链接：
http://www.tianya.cn/publicforum/content/free/1/2182043.shtml
欢迎热血童鞋一起贴！
谢谢！！！
法兰克
2011-06-10 17:08:02 法兰克 (别逼我掀桌！！！！！！！！)
第一节
日期：2011-6-6 20:20:00
楔子
幸福的草民都是相似的，不幸的草民各有各的不幸。
有的是因为生逢乱世，有的是因为生逢盛世。
0
有人说，水浒的时代跟今天有些相似。
从某种角度来看，这个说法有些道理，因为那时候我/国就是一个山寨大国，现在
依然是。
我认为山寨这个词在今天应该算是个褒义词，它向世界雄辩地证明，中国人已经成
了最接近神的种/族。
因为不管上帝创造了什么，无论是汽车手/机Ipod还是羊肉/豆腐生鸡蛋，我们都能
再仿造出一个出来。
然而在以前，这可不是个好玩的概念。
听过评书的人都知道，中国曾有这样一个时期：任何一个城市只要出了三环就遍地
是山寨，每个上面都住着占山为王的强盗，... 阅读全帖 |
|
h*d
发帖数: 19309 | 24 作者: 暗黑山老妖
链接：
http://www.tianya.cn/publicforum/content/free/1/2182043.shtml
欢迎热血童鞋一起贴！
谢谢！！！
法兰克
2011-06-10 17:08:02 法兰克 (别逼我掀桌！！！！！！！！)
第一节
日期：2011-6-6 20:20:00
楔子
幸福的草民都是相似的，不幸的草民各有各的不幸。
有的是因为生逢乱世，有的是因为生逢盛世。
0
有人说，水浒的时代跟今天有些相似。
从某种角度来看，这个说法有些道理，因为那时候我/国就是一个山寨大国，现在
依然是。
我认为山寨这个词在今天应该算是个褒义词，它向世界雄辩地证明，中国人已经成
了最接近神的种/族。
因为不管上帝创造了什么，无论是汽车手/机Ipod还是羊肉/豆腐生鸡蛋，我们都能
再仿造出一个出来。
然而在以前，这可不是个好玩的概念。
听过评书的人都知道，中国曾有这样一个时期：任何一个城市只要出了三环就遍地
是山寨，每个上面都住着占山为王的强盗，... 阅读全帖 |
|
T*******n
发帖数: 3229 | 25 【 以下文字转载自 NewJersey 讨论区 】
发信人: lillblues (★ 专业提供照片后期处理服务), 信区: NewJersey
标 题: zz 水泊梁山那些基情燃烧的岁月：山寨大国里富二代与穷二代的 (转载)
发信站: BBS 未名空间站 (Mon Dec 5 14:51:37 2011, 美东)
发信人: htd (孩儿她爹), 信区: WaterWorld
标 题: zz 水泊梁山那些基情燃烧的岁月：山寨大国里富二代与穷二代的
发信站: BBS 未名空间站 (Sun Dec 4 22:13:01 2011, 美东)
作者: 暗黑山老妖
链接：
http://www.tianya.cn/publicforum/content/free/1/2182043.shtml
欢迎热血童鞋一起贴！
谢谢！！！
法兰克
2011-06-10 17:08:02 法兰克 (别逼我掀桌！！！！！！！！)
第一节
日期：2011-6-6 20:20:00
楔子
幸福的草民都是相似的，不幸的草民各有各的不幸。
有的是因为生逢... 阅读全帖 |
|
s****y
发帖数: 858 | 26 【 以下文字转载自 WaterWorld 讨论区 】
发信人: htd (孩儿她爹), 信区: WaterWorld
标 题: 水泊梁山那些基情燃烧的岁月：山寨大国里富二代与穷二代的战争
发信站: BBS 未名空间站 (Tue Jun 21 16:30:46 2011, 美东)
作者: 暗黑山老妖
链接：
http://www.tianya.cn/publicforum/content/free/1/2182043.shtml
欢迎热血童鞋一起贴！
谢谢！！！
法兰克
2011-06-10 17:08:02 法兰克 (别逼我掀桌！！！！！！！！)
第一节
日期：2011-6-6 20:20:00
楔子
幸福的草民都是相似的，不幸的草民各有各的不幸。
有的是因为生逢乱世，有的是因为生逢盛世。
0
有人说，水浒的时代跟今天有些相似。
从某种角度来看，这个说法有些道理，因为那时候我/国就是一个山寨大国，现在
依然是。
我认为山寨这个词在今天应该算是个褒义词，它向世界雄辩地证明，中国人已经成
了最接近神的... 阅读全帖 |
|
g***j
发帖数: 40861 | 27 【 以下文字转载自 paladin 讨论区 】
发信人: skytwy (skytwy), 信区: paladin
标 题: 水泊梁山那些基情燃烧的岁月：山寨大国里富二代与穷二代的战争 (转载)
发信站: BBS 未名空间站 (Tue Jun 21 20:49:19 2011, 美东)
发信人: htd (孩儿她爹), 信区: WaterWorld
标 题: 水泊梁山那些基情燃烧的岁月：山寨大国里富二代与穷二代的战争
发信站: BBS 未名空间站 (Tue Jun 21 16:30:46 2011, 美东)
作者: 暗黑山老妖
链接：
http://www.tianya.cn/publicforum/content/free/1/2182043.shtml
欢迎热血童鞋一起贴！
谢谢！！！
法兰克
2011-06-10 17:08:02 法兰克 (别逼我掀桌！！！！！！！！)
第一节
日期：2011-6-6 20:20:00
楔子
幸福的草民都是相似的，不幸的草民各有各的不幸。
有的是因为生逢乱世，有的是因为生逢盛世。
... 阅读全帖 |
|
m******i
发帖数: 834 | 28 生物芯片及应用简介
生物芯片技术
《科学》：生物芯片与基因发现
抗体芯片：新一代的蛋白分析手段
生物芯片：本世纪最大的产业
生物芯片及应用简介
一、简介
生物芯片（biochip）是指采用光导原位合成或微量点样等方法，将大量生物大分
子比如核酸片段、多肽分子甚至组织切片、细胞等等生物样品有序地固化于支持物（如
玻片、硅片、聚丙烯酰胺凝胶、尼龙膜等载体）的表面，组成密集二维分子排列，然后
与已标记的待测生物样品中靶分子杂交，通过特定的仪器比如激光共聚焦扫描或电荷偶
联摄影像机（CCD）对杂交信号的强度进行快速、并行、高效地检测分析，从而判断样
品中靶分子的数量。由于常用玻片/硅片作为固相支持物，且在制备过程模拟计算机芯
片的制备技术，所以称之为生物芯片技术。根据芯片上的固定的探针不同，生物芯片包
括基因芯片、蛋白质芯片、细胞芯片、组织芯片，另外根据原理还有元件型微阵列芯片
、通道型微阵列芯片、生物传感芯片等新型生物芯片。如果芯片上固定的是肽或蛋白，
则称为肽芯片或蛋白芯片；如果芯片上固定的分子是寡核苷酸探针或DNA，就是DNA芯片
。由于基因芯片（Genechip）这一专有名词已经被业界 |
|
